核酸的生物化學ppt課件-資料下載頁
2025-05-12 04:29本頁面
【正文】 后，經(jīng)緩慢降溫，如放置室溫逐漸冷卻，解開的互補鏈之間對應的堿基對再形成氫鍵，恢復完整的雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱DNA熱變性的復性。 核酸復性時 UV下降，此稱低色效應 （ hypochromic effect） DNA熱變性后緩慢冷卻處理過程稱退火 annealing DNA加熱變性后，若經(jīng)驟然降溫，互補鏈堿基之間來不及配對互補，形成氫鍵聯(lián)系，兩鏈維持分離狀態(tài)。 慢 驟 ● 核酸分子雜交 hybridization 當不同來源的核酸變性后一起復性時，只要這些核酸分子中含有相同序列的片段，即可形成堿基配對，出現(xiàn)復性現(xiàn)象，形成雜種核酸分子，或稱雜化雙鏈，稱核酸分子雜交。 核酸分子雜交 膜上固相雜交 雜交探針技術(shù) ? 采用一小段已知序列的單鏈 (含數(shù)十個核苷酸 )核酸，經(jīng)同位素或其它小分子或發(fā)光物質(zhì)標記其末端或全鏈，即為核酸探針 (probe)。 ? 在適當條件或環(huán)境中與待測核酸樣品雜交，通過放射性同位素自顯影、顯色、發(fā)光或熒光檢測，判斷待測的核酸分子是否含有與探針同源的核酸序列。 ? 探針技術(shù)已廣泛用于分子生物學、分子遺傳學基因分析及臨床醫(yī)學診斷，后者已發(fā)展為一門獨立的新型學科 ——DNA診斷學，又稱基因診斷。 DNA的生物合成 ? DNA生物合成的概念 生物體內(nèi)由 DNAP催化合成 DNA的過程，包括 DDDP指導的 DNA合成 —— 復制 RDDP指導的 DNA合成 —— 反轉(zhuǎn)錄 DDDP、重組酶或 SOS系統(tǒng)酶參與的 DNA修復 DNA的復制合成 ? 半保留復制概念 復制起始點（ ori）和方向（ 5’? 3’） 復制體系 —— DnaB（識別 ori） 、解旋酶 (Topo)、解鏈蛋白(Rep蛋白 )、引發(fā)酶 /前體、 DNAPIII、 DNAPI、DNA連接酶 半保留復制 DNA合成進行時，以兩條親代 DNA鏈中的每 —條鏈為模板，在 DNA指導下的 DNA聚合酶催化下，按 A與 T、 G與C堿基配對原則合成子代 DNA的過程稱DNA的復制 (replication)。由于復制合成的子代 DNA兩條脫氧核糖核苷酸鏈中有一條來自親代 DNA，另一條是以前者為模板新合成的子代 DNA鏈，所以 DNA的這種合成作用又稱半保留復制 (semiconservative replication)。 解旋、解鏈： DNA Topo酶和解鏈酶，松弛 DNA超螺旋結(jié)構(gòu)，形成復制叉 RNA引物合成：前導鏈在引發(fā)酶和引發(fā)前體合成 RNA引物（ 10~60nt)，隨從鏈引物在引發(fā)酶和引發(fā)前體以及 DnaA蛋白聯(lián)合作用下。 DNA鏈延長 ——DNA聚合酶作用下 前導鏈 5’ ? 3’連續(xù)合成 隨從鏈 ——岡琦片段 終止： DNA片段合成至一定長度后，鏈中的 RNA引物即被核酸酶水解而切掉。此時出現(xiàn)的缺口由 DNA的繼續(xù)延長而填補，然后由 DNA連接酶將這些片段再連接起來，形成完整的 DNA鏈。 ? DNA復制過程 插入 DNA replication 反轉(zhuǎn)錄合成 反轉(zhuǎn)錄酶 —— RDDP活性 RNase活性 DDDP活性 反轉(zhuǎn)錄過程及應用（ PCR） cDNA合成 ——RNADNA雜交體形成 RNA水解 雙鏈 cDNA合成 修復合成 ? DNA復制可能因堿基對錯配而發(fā)生自發(fā)突變；在某些理、化或生物學因素 (如電離輻射、紫外線、化學誘變劑或致癌病毒等 )作用下，?？梢?DNA鏈的損傷或突變。 ? DNA損傷可有 DNA的斷鏈、鏈內(nèi)交聯(lián)和鏈間交鏈等； DNA的突變可分為點突變、缺失突變、插入突變和置換突變。 ? 細胞修復 DNA損傷是通過一系列酶來完成的，這些酶可以除去 DNA分子上的損傷，恢復 DNA的正常結(jié)構(gòu)。修復有多種方式。 切除修復 (excision repair) 重組修復 (rebinational repair) SOS repair 謝謝！
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