生物化學核酸化學ppt課件-資料下載頁
2025-05-01 13:29本頁面
【正文】 核酸的分離方法： ?細胞裂解； ?酶處理； ?核酸的分離提純： ?鹽提取法 ?酚提取法 ?層析法 。 三、核酸的分析 純 DNA的 OD260/280≥。 純 RNA OD260/280≥，如果樣品中含有雜蛋白，比值會明顯下降。 如果 OD260/230≥，否則樣品中含有雜多糖。通常 OD相當于50μg/mL的雙螺旋 DNA或 40 μg/mL單鏈DNA（或 RNA）。 紫外法 1977年兩位學者分別提出了 化學斷裂法 和雙脫氧鏈終止法 。 這兩種方法的基本原理相同，都是用不同的專一性手段使被分析的 DNA分子斷裂成若干帶放射性標記的、長短不一的片段，然后用測 DNA片段的相對長度來測核苷酸的順序。 四、核酸測序的研究方法 Sanger雙脫氧鏈終止法 四、核酸測序的研究方法 Gilbert化學斷裂法 四、核酸測序的研究方法 DNA片段一端用放射性標記，用堿基特異性的化學反應裂解 DNA，通過標定末端與斷裂位點之間的距離來確定堿基的位置。 四、核酸測序的研究方法 最新的測序方法： ?焦磷酸測序技術： ? Roche公司的 GS FLX系統(tǒng)（ 454系統(tǒng)）； ?橋擴增測序技術： ? Illumina公司的 Genome Analyzer系統(tǒng)（ Solexa系統(tǒng)）； ?連接測序技術： ? ABI公司的 SOLiD系統(tǒng)； 第六節(jié) 核酸的應用研究 一、人類基因組計劃 二、分子雜交 三、小 RNA和微小 RNA 四、反義 RNA 一、人類基因組計劃 ?1990年，美國國會批準美國的“人類基因組計劃”于 10月 1日正式啟動。美國的人類基因組計劃總體規(guī)劃是：擬在 15年內(nèi)至少投入 30億美元，進行對人類全基因組的分析。 一、人類基因組計劃 2022年 4月 l4日，美、英、日、德、法、中六國首腦發(fā)表了“人類基因組聯(lián)合宣言”，宣告“人類基因組計劃”提前完成。 一、人類基因組計劃 ?美國： WASH＆ MIT等研究中心，貢獻率為 54％； ?英國： SANGER等研究中心，貢獻率為 33％； ?日本： RIKEN等研究中心，貢獻率為 7％； ?法國： GENOSCOPE研究中心，貢獻率為 ％； ?德國： IMB等研究中心，貢獻率為 ％； ?中國：華大基因等，貢獻率為 1％； 一、人類基因組計劃 ? 2022,12,18日，水稻基因組由中國領銜完成。 一、人類基因組計劃 ?2022年 10月 11日，我國科學家成功繪制出第一個完整中國人基因組圖譜（炎黃一號），這也是第一個亞洲人全基因序列圖譜。 ?2022年 10月 11日，我國科學家成功繪制出大熊貓晶晶的基因組序列。 ?玉米、水稻、豬、家蠶等生物的 DNA全序列也被陸續(xù)測定，目前科學家的研究中心開始轉(zhuǎn)移到對基因組的功能研究上，產(chǎn)生了基因組學這一新的學科。 一、人類基因組計劃 ?破譯基因組的全部遺傳信 。 ?利用基因組學信息和生物技術改善全人類的健康 。 ?蛋白質(zhì)組學和結(jié)構基因組學 ：闡釋基因組中全部基因及其編碼蛋白質(zhì)的功能以及結(jié)構與功能的關系。 后基因組時代 （ Postgenome era） 概念： 兩種來源不同，具有互補堿基序列的多核苷酸片段在溶液中冷卻時，可以再形成雙螺旋結(jié)構，稱為雜交作用。 DNA和 DNA雜交以及 DNA和RNA雜交在核酸技術中占有十分重要的地位。 二、分子雜交 種類： 1~3 ?Southern印跡法 （ Southern bloting： DNADNA）。 ?Northern印跡法 （ Northern bloting： DNARNA）。 ?Western印跡法 （ Western bloting：抗原 抗體）。 ?小 RNA： 1998年發(fā)現(xiàn)一些小 RNA具有調(diào)控DNA分子的功能，這種機制叫做 RNA干擾（ RNAi） 。 ?微小 RNA： 19～ 25nt組成的，具有負調(diào)控功能的 RNA分子。 ?小 RNA和微小 RNA技術主要應用于癌癥的預防、診斷和治療方面。 三、小 RNA和微小 RNA ?反義 RNA是指與目標核酸 (如 mRNA或 DNA)互補的 RNA分子，能抑制目標核酸的翻譯的 RNA分子。 ?反義 RNA技術目前在植物基因工程和人類疾病治療方面具有廣泛的應用。 四、反義 RNA
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