生物化學核酸ppt課件(2)-資料下載頁
2025-05-01 13:29本頁面
【正文】 D－ 2－脫氧核糖＋酸＋二苯胺 藍紫色 二、核酸的紫外吸收特性 ? 在核酸分子中，由于嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵體系，因而具有獨特的紫外線吸收光譜，一般在 260nm左右有最大吸收峰，可以作為核酸及其組份定性和定量測定的依據。 ? 以 A260/A280進行定性、定量 ? DNA和 RNA溶液中加入溴化乙錠（ EB），在紫外下發(fā)出熒光 三、核酸的變性、復性與分子雜交 1. 變性 ? 穩(wěn)定核酸雙螺旋次級鍵斷裂，空間結構破壞，變成單鏈結構的過程。核酸的的一級結構 (堿基順序 )保持不變。 ? 變性表征 生物活性部分喪失、粘度下降、浮力密度升高、紫外吸收增加（增色效應） ? 變性因素 pH（ ） 變性劑（脲、甲酰胺、甲醛） 低離子強度 加熱 ? DNA的變性過程 是突變性的，它在很窄的溫度區(qū)間內完成。因此，通常將紫外吸收的增加量達最大量一半時的溫度稱熔解溫度，用 Tm表示。 ? 一般 DNA的 Tm值在 7085?C之間。 DNA的 Tm值與分子中的 G和 C的含量有關。 ? G和 C的含量高， Tm值高。因而測定 Tm值，可反映 DNA分子中 G, C含量，可通過經驗公式計算：（ G+C)%=() 2. 熱變性和 Tm 3. 核酸的復性 ? 變性核酸的互補鏈在適當的條件下，重新締合成為雙螺旋結構的過程稱為 復性 。 ? DNA復性后，一系列性質將得到恢復，但是生物活性一般只能得到部分的恢復，具有減色效應。 ? 將熱變性的 DNA驟然冷卻至低溫時， DNA不可能復性。變性的 DNA緩慢冷卻時可復性，因此又稱為 “ 退火 ” 。 退火溫度＝ Tm－ 25℃ ? 復性影響因素 片段濃度 /片段大小 /片段復雜性（重復序列數目） / 溶液離子強度 ? DNA單鏈與在某些區(qū)域有互補序列的異源 DNA單鏈或 RNA鏈形成雙螺旋結構的過程。這樣形成的新分子稱為 雜交 DNA分子 。 ? 核酸的雜交在分子生物學和遺傳學的研究中具有重要意義。 ? Southern 雜交（ Southern bolting） ? Northern 雜交（ Northern bolting） ? Western 雜交 （ Western bolting） 四、核酸的序列測定 1. 雙脫氧鏈終止法（ Sanger酶法） 2. Gilbert化學降解法 本 章 小 結 ? 核酸是遺傳物質載體的證明和研究歷史 ? 核酸的化學結構：戊糖、堿基（ A、 T、 G、 C、 U），核苷、核苷酸及其衍生物的結構特點（原子編號） ? DNA的結構：一級結構（核酸序列及其表示、基因及基因組、序列測定）、二級結構（ Watson －Crick雙螺旋模型、 Z－ DNA）、結構維持的化學鍵 ? RNA結構與功能：堿基組成特點、 RNA的種類結構及功能 ? 核酸的性質：酸堿性、變性與復性、分子雜交
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