生物化學(xué)核酸ppt課件(2)-資料下載頁
2025-05-01 13:29本頁面
【正文】 D－ 2－脫氧核糖＋酸＋二苯胺 藍(lán)紫色 二、核酸的紫外吸收特性 ? 在核酸分子中，由于嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵體系，因而具有獨(dú)特的紫外線吸收光譜，一般在 260nm左右有最大吸收峰，可以作為核酸及其組份定性和定量測定的依據(jù)。 ? 以 A260/A280進(jìn)行定性、定量 ? DNA和 RNA溶液中加入溴化乙錠（ EB），在紫外下發(fā)出熒光 三、核酸的變性、復(fù)性與分子雜交 1. 變性 ? 穩(wěn)定核酸雙螺旋次級(jí)鍵斷裂，空間結(jié)構(gòu)破壞，變成單鏈結(jié)構(gòu)的過程。核酸的的一級(jí)結(jié)構(gòu) (堿基順序 )保持不變。 ? 變性表征 生物活性部分喪失、粘度下降、浮力密度升高、紫外吸收增加（增色效應(yīng)） ? 變性因素 pH（ ） 變性劑（脲、甲酰胺、甲醛） 低離子強(qiáng)度 加熱 ? DNA的變性過程 是突變性的，它在很窄的溫度區(qū)間內(nèi)完成。因此，通常將紫外吸收的增加量達(dá)最大量一半時(shí)的溫度稱熔解溫度，用 Tm表示。 ? 一般 DNA的 Tm值在 7085?C之間。 DNA的 Tm值與分子中的 G和 C的含量有關(guān)。 ? G和 C的含量高， Tm值高。因而測定 Tm值，可反映 DNA分子中 G, C含量，可通過經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算：（ G+C)%=() 2. 熱變性和 Tm 3. 核酸的復(fù)性 ? 變性核酸的互補(bǔ)鏈在適當(dāng)?shù)臈l件下，重新締合成為雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程稱為 復(fù)性 。 ? DNA復(fù)性后，一系列性質(zhì)將得到恢復(fù)，但是生物活性一般只能得到部分的恢復(fù)，具有減色效應(yīng)。 ? 將熱變性的 DNA驟然冷卻至低溫時(shí)， DNA不可能復(fù)性。變性的 DNA緩慢冷卻時(shí)可復(fù)性，因此又稱為 “ 退火 ” 。 退火溫度＝ Tm－ 25℃ ? 復(fù)性影響因素 片段濃度 /片段大小 /片段復(fù)雜性（重復(fù)序列數(shù)目） / 溶液離子強(qiáng)度 ? DNA單鏈與在某些區(qū)域有互補(bǔ)序列的異源 DNA單鏈或 RNA鏈形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過程。這樣形成的新分子稱為 雜交 DNA分子 。 ? 核酸的雜交在分子生物學(xué)和遺傳學(xué)的研究中具有重要意義。 ? Southern 雜交（ Southern bolting） ? Northern 雜交（ Northern bolting） ? Western 雜交 （ Western bolting） 四、核酸的序列測定 1. 雙脫氧鏈終止法（ Sanger酶法） 2. Gilbert化學(xué)降解法 本 章 小 結(jié) ? 核酸是遺傳物質(zhì)載體的證明和研究歷史 ? 核酸的化學(xué)結(jié)構(gòu)：戊糖、堿基（ A、 T、 G、 C、 U），核苷、核苷酸及其衍生物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)（原子編號(hào)） ? DNA的結(jié)構(gòu)：一級(jí)結(jié)構(gòu)（核酸序列及其表示、基因及基因組、序列測定）、二級(jí)結(jié)構(gòu)（ Watson －Crick雙螺旋模型、 Z－ DNA）、結(jié)構(gòu)維持的化學(xué)鍵 ? RNA結(jié)構(gòu)與功能：堿基組成特點(diǎn)、 RNA的種類結(jié)構(gòu)及功能 ? 核酸的性質(zhì)：酸堿性、變性與復(fù)性、分子雜交
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