核酸化學(xué)ppt課件-資料下載頁(yè)
2025-05-04 02:30本頁(yè)面
【正文】 。 4. 水解 目錄 二、酸堿性質(zhì) ?兩性電解質(zhì) ? 核酸等電點(diǎn)一般在 3～ 4左右 （ DNA的等電點(diǎn)為 4～ ， RNA的等電點(diǎn)為 2～ ）。 目錄 可在 ～ 核苷酸 磷酸基電荷 堿基的電荷 凈電荷 AMP 1 + GMP 1 + CMP 1 + UMP 1 +0 1 目錄 三、紫外吸收 ?最大吸收峰在 260nm附近 ?可以作為區(qū)別蛋白質(zhì)和對(duì)核酸及其組份定性和定量測(cè)定的依據(jù)，進(jìn)行核酸純度鑒定，也可作為核酸變性和復(fù)性的指標(biāo)。 目錄 根據(jù) A260/A280的比值判斷核酸樣品的 純度 純 DNA： A260/A280= 純 RNA： A260/A280= （若樣品中含有雜蛋白或苯酚，則 A260/A280比值明顯降低） 純的核酸樣品可根據(jù) 260nm的光吸收值算出其 含量 若 260nm光吸收值 為 1相當(dāng)于 50μg/ml雙螺旋 DNA 或相當(dāng)于 40μg/ml單鏈 DNA或 RNA 或相當(dāng)于 20μg/ml寡核苷酸 。 目錄 1. 概念： 是指核酸雙螺旋區(qū)的多聚核苷酸鏈間的氫鍵斷裂，變成單鏈結(jié)構(gòu)的過(guò)程 。 四、 DNA的變性 目錄 o 能夠引起核酸變性的因素有： 1）溫度升高； 2）酸堿度改變、 pH（ ）； 3）有機(jī)溶劑如甲醛和尿素、甲酰胺等； 4）低離子強(qiáng)度。 目錄 ?變性核酸將失去其部分或全部的生物活性。 ?一級(jí)結(jié)構(gòu) (堿基順序 )保持不變。 ?紫外吸收值明顯增加，即 增色效應(yīng) 。 ? DNA的變性過(guò)程是突變性的，它在很窄的溫度區(qū)間內(nèi)完成。 DNA解鏈溫度 ?粘度降低， 浮力密度增大 目錄 天然 DNA分子在熱變性條件下，雙螺 旋結(jié)構(gòu)破壞，堿基暴露，在紫外光 260nm 波長(zhǎng)處的吸收度明顯增加，此現(xiàn)象稱為 增色效應(yīng) 。 變性 DNA分子復(fù)性形成雙螺旋結(jié)構(gòu)時(shí) 其紫外吸收降低的現(xiàn)象稱為 減色效應(yīng) 。 增色效應(yīng)與減色效應(yīng) 目錄 目錄 ?當(dāng) 50% 的 DNA變性時(shí)的溫度稱為該 DNA的解鏈溫度，即增色效應(yīng)達(dá)到一半時(shí)的溫度；一般 DNA的 Tm值在 7085?C之間。 ?影響 Tm的因素 ? DNA的均一性 ? 分子中 G和 C的含量。 可通過(guò)經(jīng)驗(yàn)公式計(jì)算：（ G+C)%=() ? Tm值隨溶液鹽濃度增加而增大 DNA解鏈溫度（熔點(diǎn)， Tm ） 目錄 。 溶解曲線 與 Tm和 G+C含量 目錄 Tm與介質(zhì)離子強(qiáng)度有關(guān) 目錄 高溫變性 緩慢冷卻 熱復(fù)性 急速冷卻 復(fù)性失敗 ? 一定條件下，去除變性因素后，核酸 恢復(fù)二級(jí)結(jié)構(gòu)及生物活性的現(xiàn)象 ；通常使用 熱復(fù)性 。 DNA的復(fù)性 目錄 o 對(duì)于熱變性的 DNA，在 緩慢冷卻 的條件下可重新結(jié)合恢復(fù)雙螺旋結(jié)構(gòu)，稱為退火 。 退火溫度＝ Tm－ 25℃ o 分子量越大復(fù)性越難。 o 濃度越大，復(fù)性越容易。 目錄 ： 在變性的 DNA溶液中加入外源DNA單鏈分子或 RNA單鏈分子（與原DNA具有同源性），去掉變性條件后復(fù)性形成雙螺旋結(jié)構(gòu)的過(guò)程。 雜交 DNA分子 。 ： 利用核酸雜交可檢測(cè)特定的核苷酸片段或研究同源性等。 五、分子雜交 目錄 分子雜交 ? 探針： 用于雜交的異源DNA或 RNA序列，其核苷酸序列是人工特定的、已知的，經(jīng)放射性標(biāo)記的一條鏈。 目錄 變性 （加熱） 探針 雜交 （緩慢冷卻） 復(fù)性 （緩慢冷卻） 核酸 的變性、復(fù)性和雜交
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