食品安全現(xiàn)代生物檢測(cè)技術(shù)-資料下載頁(yè)
2025-01-08 12:42本頁(yè)面
【正文】 法、定量競(jìng)爭(zhēng)PCR(Quantitative petitive PCR)和 Real—time PCR(實(shí)時(shí)定量 PCR)法等三種。 ? （ 1）半定量 PCR法 ? ①樣品 DNA的提取和定量。 ? 按常規(guī)方法提取 DNA后，取部分樣品 DNA在 ％瓊脂糖凝膠中電泳，與已知古量的 Marker比較，用計(jì)算機(jī)凝腔成像分析系統(tǒng)處理結(jié)果，以確定所提取的 DNA量。例如，一般700mg的玉米粉可提取 lμg DNA。 ? ② PCR反應(yīng)。 ? DNA的質(zhì)量分析 ? ? CaMV35S啟動(dòng)子的定量 PCR反應(yīng) ? （ 2）定量競(jìng)爭(zhēng) PCR法 PCR反應(yīng)實(shí)質(zhì)是對(duì)特定模板 DNA的指數(shù)擴(kuò)增放大，而在相同的條件下，獲得 DNA的量與最初模板DNA的濃度成正相關(guān)，競(jìng)爭(zhēng)定量 PCR就是依據(jù)這種擴(kuò)增 DNA與模板 DNA之間的濃度相關(guān)性設(shè)計(jì)的。基本原理是先構(gòu)建含有修飾過的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn) DNA片段 (競(jìng)爭(zhēng) DNA)，競(jìng)爭(zhēng) DNA由質(zhì)粒組成，帶有一個(gè)改造 PCR擴(kuò)增子，改造部分可以是 DNA插人序列、缺失序列或者點(diǎn)突變，競(jìng)爭(zhēng) DNA與待測(cè)目標(biāo) DNA在同一反應(yīng)管中進(jìn)行 PCR共擴(kuò)增，因競(jìng)爭(zhēng) DNA片段和待測(cè) DNA的大小不同，經(jīng)瓊脂糖凝膠可將兩者分開，通過比較兩種條帶的量可進(jìn)行定量分析。 ? （ 三）生物芯片與轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測(cè) ? 就目前轉(zhuǎn)基因食品檢測(cè)中常用的 ELISA和 PCR技術(shù)而言，最大的缺點(diǎn)是檢測(cè)范圍窄，效率低，無法高通量大規(guī)模地同時(shí)檢測(cè)多種樣品，尤其是對(duì)轉(zhuǎn)基因背景一無所知的情況下。對(duì)各種候選待檢基因序列或蛋白的逐一篩查幾乎是不可能的。而目前正在研究的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品所涉及的基因數(shù)量有上萬種，今后都有可能進(jìn)入商品化生產(chǎn)，顯而易見對(duì)進(jìn)出口產(chǎn)品的檢測(cè)，需要有更有效的、快速、特別是高通量的檢測(cè)方法，最近幾年出現(xiàn)的生物芯片技術(shù)能較好地解決這一問題。生物芯片根據(jù)所載探針種類分為基因芯片和蛋白質(zhì)芯片兩大類：基因芯片以 DNA為探針。依據(jù)核酸雜交的原理檢測(cè)樣品中的特定基因序列；蛋白質(zhì)芯片以蛋白質(zhì)為探針，依據(jù)抗原抗體反應(yīng)的免疫學(xué)原理檢測(cè)樣品中的特定蛋白質(zhì)。
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