酶學(xué)基礎(chǔ)三ppt課件-資料下載頁
2025-01-08 05:27本頁面
【正文】 ，即每 mg蛋白所含的酶活力單位或每 kg蛋白中所含的 Kat數(shù) 。 比活力是表示酶制劑純度的一個(gè)指標(biāo)。 比活力 = 總活力單位 總蛋白 mg數(shù) = U(或 IU) / mg蛋白 實(shí)際應(yīng)用中也用每單位制劑中含有的酶活力數(shù)表示（如：酶單位 /mL（液體制劑），酶單位 /g（固體制劑）），對同一種酶來講，比活力愈高則表示酶的純度越高（含雜質(zhì)越少）。 在評價(jià)純化酶的純化操作中，還有一個(gè)概念就是回收率。 回收率 =某純化操作后的總活力 /某純化操作前的總活力 ［總活力 =比活力 總體積（總重量）］ 終點(diǎn)法 : 酶反應(yīng)進(jìn)行到一定時(shí)間后終止其反應(yīng)，再用化學(xué)或物理方法測定產(chǎn)物或反應(yīng)物量的變化。 動(dòng)力學(xué)法 :連續(xù)測定反應(yīng)過程中產(chǎn)物 \底物或輔酶的變化量，直接測定出酶反應(yīng)的初速度。 （二）酶活力的測定 ?測定初速度 ?最適條件 ?[S] 》 [E] 要求 斜率 =[P]/ t = V（ 初速度 ） [P] t 酶活力的測定的具體方法 1）比色法 適用于酶的催化產(chǎn)物與特定物質(zhì)反應(yīng)生成有色的溶液 2）分光光度法 產(chǎn)物吸光度值與底物不同 3）滴定法 4）量氣法 5）同位素測定法 6）酶偶聯(lián)分析法 葡萄糖＋ O2 葡萄糖氧化酶 葡萄糖酸＋ H2O2 H2O2+4氨基安替吡林 過氧化物酶 H2O +醌類化合物 在 500nm處測定光密度 酶活力的測定： ? 根據(jù)酶催化的專一性，選擇適宜的底物，并配制成一定濃度的底物溶液； ? 根據(jù)酶的動(dòng)力學(xué)性質(zhì)，確定酶催化反應(yīng)的溫度、pH、底物濃度、激活劑濃度等反應(yīng)條件； ? 在一定條件下，將一定量的酶液和底物溶液混合均勻，適時(shí)記下反應(yīng)開始的時(shí)間； ? 反應(yīng)到一定的時(shí)間，取出適量的反應(yīng)液，運(yùn)用各種生化檢測技術(shù)，測定產(chǎn)物的生產(chǎn)量或底物的減少量。
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