chapter3核酸化學-資料下載頁
2025-01-06 14:21本頁面
【正文】 水解， RNA水解 ?加熱條件下， D－核糖＋濃鹽酸＋苔黑酚 綠色 D－ 2－脫氧核糖＋酸＋二苯胺 藍紫色 二、核酸的紫外吸收特性 ? 在核酸分子中，由于嘌呤堿和嘧啶堿具有 共軛雙鍵 體系，因而具有獨特的紫外線吸收光譜，一般在 260nm左右有最大吸收峰，可以作為核酸及其組份定性和定量測定的依據(jù)。 ? 以 A260/A280進行定性、定量 ? DNA和 RNA溶液中加入溴化乙錠（ EB），在紫外下發(fā)出熒光 三、核酸的變性、復性與分子雜交 1. 變性 ? 穩(wěn)定核酸雙螺旋次級鍵斷裂，空間結構破壞，變成單鏈結構的過程。核酸的一級結構 (堿基順序 )保持不變。 ? 變性表征 生物活性部分喪失、粘度下降、浮力密度升高、紫外吸收增加 （增色效應） ? 變性因素 pH（ ） 變性劑（脲、甲酰胺、甲醛） 低離子強度 加熱 ? DNA的變性過程 是突變性的，它在很窄的溫度區(qū)間內(nèi)完成。因此， 通常將加熱變性使 DNA的雙螺旋結構失去一半時的溫度稱熔解溫度或熔點，用 Tm表示 。 ? 一般 DNA的 Tm值在 8295?C之間。 DNA的 Tm值與分子中的 G和 C的含量 有關，也與 DNA的均一性和介質中離子強度有關。 ? G和 C的含量高， Tm值高。因而測定 Tm值，可反映 DNA分子中 G, C含量，可通過經(jīng)驗公式計算：（ G+C)%=() 2. 熱變性和 Tm 3. 核酸的復性 ? 變性核酸的互補鏈在適當?shù)臈l件下，重新締合成為雙螺旋結構的過程稱為 復性 。 ? DNA復性后，一系列性質將得到恢復，但是生物活性一般只能得到部分的恢復，具有 減色效應 。 ? 將熱變性的 DNA驟然冷卻至低溫時， DNA不可能復性。變性的 DNA緩慢冷卻時可復性，因此又稱為 “ 退火 ” 。 退火溫度＝ Tm－ 25℃ ? 復性影響因素 片段濃度 /片段大小 /片段復雜性（重復序列數(shù)目） / 溶液離子強度 ? DNA單鏈與在某些區(qū)域有互補序列的異源 DNA單鏈或 RNA鏈形成雙螺旋結構的過程。這樣形成的新分子稱為 雜交 DNA分子 。 ? 核酸的雜交在分子生物學和遺傳學的研究中具有重要意義。 ? Southern 雜交（ Southern bloting） ? Northern 雜交（ Northern bloting） ? Western 雜交 （ Western bloting） 引物 引物 * 引物的序列及其與模板結合的特異性是決定PCR反應結果的關鍵。 * 引物設計的主要原則是最大限度地提高擴增效率和特異性。 3’ 5’ 5’ 5’ 5. PCR技術 基因組 PCR原理圖 3’ 3’ 3’ 變性、退火 延伸 變性、退火、延伸 3’ 四、核酸的序列測定 雙脫氧鏈終止法（ Sanger酶法） 本 章 小 結 ? 核酸是遺傳物質載體的證明和研究歷史 ? 核酸的化學結構：戊糖、堿基（ A、 T、 G、 C、 U），核苷、核苷酸及其衍生物的結構特點（原子編號） ? DNA的結構：一級結構（核酸序列及其表示、基因及基因組、序列測定）、二級結構（ Watson －Crick雙螺旋模型、 Z－ DNA）、結構維持的化學鍵 ? RNA結構與功能：堿基組成特點、 RNA的種類結構及功能 ? 核酸的性質：酸堿性、變性與復性、分子雜交
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