酶譜法檢測(cè)血清基質(zhì)金屬蛋白酶mmpmmp9的活性-資料下載頁(yè)
2025-01-06 09:42本頁(yè)面
【正文】 行下一步實(shí)驗(yàn)，如酶活性太高造成顯帶不理想，可適當(dāng)進(jìn)行稀釋 。 ? 凝膠的制備 : 玻璃板對(duì)齊后放入夾中垂直卡緊。按表格配 10％分離膠，加入 TEMED后立即搖勻即可灌膠，灌膠時(shí)，可用 5ml加樣槍吸取凝膠沿玻璃板加進(jìn)去，然后膠上加一層異丙醇，以隔離空氣中的氧，促進(jìn)凝膠聚合（灌膠時(shí)開(kāi)始可快一些，膠面快到所需高度時(shí)要放慢速度。操作時(shí)凝膠一定要沿玻璃板流下，這樣膠中才不會(huì)有氣泡）。約幾分鐘后當(dāng)異丙醇和膠之間有一條折射線(xiàn)時(shí)，說(shuō)明膠已凝了，再等 3min使膠充分凝固就可倒去膠上層水并用吸水紙將水吸干。按前面表格配 4％的濃縮膠，加入 TEMED后立即搖勻即可灌膠。將剩余空間灌滿(mǎn)濃縮膠，然后將梳子插入濃縮膠中。灌膠時(shí)也要使膠沿玻璃板流下以免膠中有氣泡產(chǎn)生。插梳子時(shí)要使梳子保持水平。待到濃縮膠凝固后，兩手分別捏住梳子的兩邊豎直向上輕輕將其拔出 。 ? 在每個(gè)加樣孔中加入 10 181。l 樣品 。 ? 電泳： 在 4℃ 100V下，約 2h。 ? 凝膠的處理： （ 1）電泳結(jié)束后，取下凝膠，放入平皿中，用洗滌緩沖液在室溫?fù)u動(dòng)下洗滌 1h，其間換液一次； （ 2）棄去洗滌緩沖液，然后加入孵育緩沖液沒(méi)過(guò)膠面，至 37℃ 恒溫箱中， 24h后取出； （ 3）棄去孵育緩沖液，加入 %考馬斯亮藍(lán)染液染色約 30min，回收染液，加入脫色液脫色至藍(lán)色背景和白色條帶均十分明顯時(shí)，用 5％乙酸中止脫色； （ 4）待凝膠在 5％乙酸中恢復(fù)到適當(dāng)大小后，用凝膠圖象處理系統(tǒng)分析結(jié)果，以白色條帶的凈光密度值相對(duì)定量樣品中酶活性。 預(yù)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果 N N P P 135kD 92kD 72kD NGAL/MMP9 ProMMP2 MMP9 第三部分，食管癌患者血液中 MMP2和 MMP9 的活性變化及其臨床意義 ? 癌癥的發(fā)生發(fā)展是多基因多因素參與的慢性長(zhǎng)期過(guò)程。 ? 癌組織的發(fā)生發(fā)展有著由單純?cè)錾?→ 不典型增生 → 原位癌 → 浸潤(rùn)癌演變過(guò)程的連續(xù)性。 ? 癌癥分期大別分為四期： 第一期：腫瘤局限一處，沒(méi)有擴(kuò)散跡象； 第二期：腫瘤已擴(kuò)散到鄰近的淋巴結(jié)，但沒(méi)有波及其它器官或組織； 第三期：腫瘤除了擴(kuò)散到鄰近淋巴結(jié)外，還波及附近器官或組織； 第四期：腫瘤已擴(kuò)散到遠(yuǎn)處的部位； 一般言之，第一、二期屬早期，治療后痊愈機(jī)會(huì)高；第三、四期屬晚期，治愈及存 活的機(jī)會(huì)較差。 課后討論 1. 查閱相關(guān)資料 ， 討論 MMP2與 MMP9在食管癌各發(fā)展階段的活性檢測(cè)能否作為監(jiān)控癌癥發(fā)展的一個(gè)指標(biāo) ， 應(yīng)該注意什么問(wèn)題 ， 其臨床意義如何 ？ 2. 若發(fā)現(xiàn) MMP2與 MMP9在癌癥病人中出現(xiàn)異常 ， 談?wù)勀憧赡懿扇〉姆椒▉?lái)遏抑這種情況 。
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