木瓜蛋白酶提取實(shí)驗(yàn)方案-資料下載頁
2025-04-25 01:43本頁面
【正文】 管中，于50度水浴預(yù)熱5min，準(zhǔn)確加入50度預(yù)熱的蒸餾水5ml, 置50度水浴中，加入三氯乙酸溶液5mL，振搖，于50度水浴中放置40min，用干燥濾紙過濾，濾液在2h內(nèi)采用分光光度法以水為空白，在275nm的波長處測定吸光度A0。 ?酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液：另取酪氨酸對(duì)照溶液，以蒸餾水為空白，在275nm的波長處測定吸光度An。酶活力單位定義為在測定條件下,每1 min生成1μg/mL酪氨酸所需的酶量。公式： 酶活力（U/g）= 式中:Ｗ1—酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)液每1ｍＬ中含酪氨酸的量,單位為微克(μｇ)。10—反應(yīng)時(shí)間。11—測定總體積。n—待測液的稀釋倍數(shù)。1000—毫克與克的轉(zhuǎn)換倍數(shù)。在上述條件下,每分鐘水解酪蛋白生成1μｇ酪氨酸所需的酶量為1個(gè)酶活力單位。：取8支15 mL試管，按下表加入試劑管號(hào)12345678蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液（ml）0蒸餾水（ml）0考馬斯亮藍(lán)（ml）蛋白質(zhì)含量（ug）0102030406080100A595將試管搖勻，放置23分鐘。用分光光度計(jì)比色測定吸光值A(chǔ)595nm。(注意應(yīng)在1小時(shí)內(nèi)完成比色)，以A595nm為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白色質(zhì)濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)酶液進(jìn)行稀釋，統(tǒng)一酶液體積至100ml：分別取1ml 酶液酶液酶液酶液酶液酶液6于6支干凈離心管中稀釋至10ml（相當(dāng)于木瓜蛋白酶溶于100ml蒸餾水中），再進(jìn)行下步處理。 用倍比稀釋的方法找出酶液測吸光度的最適倍數(shù)，使再重新取樣測量，取1ml酶液于試管中，再加4ml考馬斯亮藍(lán)溶液，混勻，靜置5min后在A595下測吸光度，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算酶含量。
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