實(shí)驗(yàn)：豬胰蛋白酶的分離純化-資料下載頁(yè)
2025-01-08 01:55本頁(yè)面
【正文】 留 樣品 1~樣品 5，用來計(jì)算比活和純化倍數(shù)； ? 離子交換層析過程中的 分部收集樣品中，蛋白峰附近的樣品。 3. 需測(cè)樣品 實(shí)驗(yàn)方法 四、純化效果檢測(cè) ? 用 12％ 的 SDS— PAGE檢測(cè)，考馬斯亮藍(lán) R250染色。 ? 粗酶液留樣 1， ? 胰酶激活后樣品留樣 2， ? 透析后的樣品 3（上柱前樣品） ? 未吸附樣品（流穿） ? 離子交換層析后洗脫 1（留樣 4 ） ? 離子交換層析后洗脫 2中活力較高樣品（留樣 5） 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 ? 1．離子交換層析后收集各管樣品的蛋白含量及活性。 ? 2. 以管數(shù)為橫坐標(biāo)、以 A280及活性為縱坐標(biāo)，制作雙坐標(biāo)圖的 離子交換層析曲線 。 ? 3．測(cè)定粗酶液、胰酶激活后樣品、離子交換層析收集管中樣品液的體積及酶活力，完成 純化表格 。 ? 4． SDSPAGE電泳結(jié)果 純化表格 純化步驟 總蛋白量（ mg） 總酶活 （ U） 比活（ U/mg） 收率（％） 純化倍數(shù) 胰酶激活后樣品 100 50 100 透析后上柱前樣品 80 48 96 離子交換層析后的洗脫 2 20 40 80 SDSPAGE電泳結(jié)果 思考題 ? 1．提取制備豬胰蛋白酶的過程中，應(yīng)特別注意哪些主要環(huán)節(jié)和影響因素？ ? 2. 胰蛋白酶活力的測(cè)定方法還有哪些？ ? 3．在實(shí)驗(yàn)中，可以采取什么方法來提高產(chǎn)率和比活率？ 實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式 ? 一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康? ? 二、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 ? 三、實(shí)驗(yàn)原理 ? 四、實(shí)驗(yàn)操作步驟 ? 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論 ? 六、附錄（實(shí)驗(yàn)記錄） ? 其中， 前四部分內(nèi)容 為預(yù)習(xí)報(bào)告的內(nèi)容； ? 第五部分（實(shí)驗(yàn)結(jié)果）和第六部分為實(shí)驗(yàn)過程中的內(nèi)容； ? 第五部分（實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論）整理后與預(yù)習(xí)報(bào)告合并為實(shí)驗(yàn)報(bào)告 實(shí)驗(yàn)總體安排 ? 第 10周： ? 生物 0911（分兩組），生物 0913（ 15人左右） ? 第 11周： ? 生物 0912（分兩組），生物 0913（ 15人左右） 注： 每小組選兩個(gè)組長(zhǎng)，協(xié)調(diào)同學(xué)們分工、合作。 第 9周，周五之前將分組同學(xué)名單、組長(zhǎng)及每個(gè)同學(xué)上課情況發(fā)到我郵箱： 實(shí)驗(yàn)具體安排 ? 星期一 ? 粗豬胰蛋白酶的提取 ? 硫酸銨沉淀，懸浮液放入 4℃ 冰箱過夜 ? 星期二 ? 將硫酸銨沉淀 離心后，取沉淀 ? 透析 ? 裝柱 → 平衡 ? 星期三 ? 離子交換層析 ? 蛋白含量測(cè)定 ? 酶活測(cè)定 ? SDSPAGE
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