實驗二pcr乙肝rapd-資料下載頁
2025-01-06 02:28本頁面
【正文】 higher temperature allows a more uniform result to be produced. These improvements helped to made PCR cost effective. ? 影響 PCR的主要因素 ① PCR反應(yīng)體系的各個組分 ② PCR循環(huán)的溫度 （ 預(yù)變性 、 變性 、退火 、 延伸 ） ③ PCR循環(huán)的次數(shù)和平臺效應(yīng) ④ 操作環(huán)境 相對 DNA克隆而言 ， 這種方法的特點：操作簡便 、 時間短 、 特異性高 、 靈敏度高 、實用性強(qiáng)； 廣泛的應(yīng)用于醫(yī)學(xué)診斷 、 分子生物學(xué) 、分子克隆 、 基因診斷 、 法醫(yī)學(xué) 、 考古學(xué)等各個領(lǐng)域 。 RAPD反應(yīng)檢測 DNA多態(tài)性的原理 RAPD (Random amplified polymorphic DNA） ? RAPD技術(shù)具有快速、方便、靈敏度高、檢測容易的優(yōu)點。 ? 運用隨機(jī)引物擴(kuò)增尋找多態(tài)性 DNA片段可作為分子標(biāo)記。用于檢測 DNA多態(tài)性。 ? 建立于 PCR技術(shù)基礎(chǔ)上，利用一系列 (通常數(shù)百個 )不同的隨機(jī)排列堿基順序的寡聚核苷酸單鏈 (通常為 10聚體 )為引物，對所研究基因組 DNA進(jìn)行 PCR擴(kuò)增。檢測擴(kuò)增產(chǎn)物 DNA片段的多態(tài)性。 ? 擴(kuò)增產(chǎn)物 DNA片段的多態(tài)性反映了基因組相應(yīng)區(qū)域的DNA多態(tài)性。 ? RAPD所用的一系列引物 DNA序列各不相同，但對于任一特異的引物，它同基因組 DNA序列有其特異的結(jié)合位點。這些特異的結(jié)合位點在基因組某些區(qū)域內(nèi)的分布如符合 PCR擴(kuò)增反應(yīng)的條件，即引物在模板的兩條鏈上有互補(bǔ)位置，且引物 3’ 端相距在一定的長度范圍之內(nèi)，就可擴(kuò)增出 DNA片段。 ? 如果基因組在 DNA擴(kuò)增區(qū)發(fā)生 DNA片段 插入、缺失或堿基突變 就可能導(dǎo)致這些特定結(jié)合位點分布發(fā)生相應(yīng)的變化，而使 PCR產(chǎn)物增加、缺少或發(fā)生分子量的改變。 ? 通過對 PCR產(chǎn)物檢測即可檢出基因組 DNA的多態(tài)性。分析時可用的引物數(shù)很大，雖然對每一個引物而言其檢測基因組 DNA多態(tài)性的區(qū)域是有限的，但是利用一系列引物則可以使檢測區(qū)域幾乎覆蓋整個基因組。因此 RAPD可以對整個基因組 DNA進(jìn)行多態(tài)性檢測 。 一般 RAPD的電泳結(jié)果 一般 RAPD的電泳結(jié)果
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