pcr(polymerasechainreaction)-資料下載頁
2024-10-24 17:20本頁面
【導(dǎo)讀】熟悉PCR技術(shù)的基本原理和操作。車前去北加利福尼亞紅樹。條被月光籠罩的山路上構(gòu)。隨后賣給了Roche公司。變性、復(fù)性、半保留復(fù)制。一生二，二生四，四生萬物。引物、酶、dNTP、模板和Mg2+. 來自水生棲熱菌Thermusaquaticus. PCR反應(yīng)體系的準(zhǔn)備。所用器皿和試劑必需經(jīng)高溫滅菌或DEPC處理。血液，每克肝臟加2ml的裂解液，勻漿器中。核酸基因技術(shù)討論版/生物信息學(xué)討論版/PCR技術(shù)討論版。混勻離心5sec，94℃水浴，2min. （一般在72℃時(shí)酶催化核苷酸的標(biāo)準(zhǔn)速率可。假陰性，不出現(xiàn)擴(kuò)增條帶。吸頭及EP管一次性使用。器皿及工作區(qū)域要分開，無菌操作。DNA粗制品可作為擴(kuò)增模板。臨床標(biāo)本如血液、體液、毛發(fā)、細(xì)胞、活組。①取出膠床和梳子，在膠床未封閉的兩端貼上膠布或。①稱1g瓊脂糖置三角瓶中，加100ml×TBE. ③熔化的瓊脂糖自然冷卻到60～70℃時(shí)，加入E
【正文】 ： 將冷卻致 60℃ 的凝膠倒入準(zhǔn)備好的膠 床內(nèi)， 凝膠厚度 3～ 5mm 室溫下靜置 1小時(shí)左右，凝膠固化。 撕去膠床 兩端的膠帶紙，將帶凝膠的膠床置于電泳槽中， 并使樣品孔位于電場(chǎng)負(fù)極 向電泳槽中加入 TBE電泳緩沖液 ， 越 過凝膠表面即可 輕輕拔出固定在凝膠中的梳子。 原梳齒處 (樣品孔 )即被緩沖液充滿，如發(fā)現(xiàn) 有氣泡，應(yīng)設(shè)法去除 樣品準(zhǔn)備： 向核酸樣品中加入約為樣品體積 1/6的上樣緩沖液，用加樣器輕輕混勻 上樣： 用加樣器吸取樣品，輕輕的加入到凝 膠的樣品孔中。加樣量一般 10μl 蓋上電泳槽，接通電源，開始電泳 開始電泳前，再次確認(rèn)凝膠樣品孔處于電場(chǎng)的負(fù)極。 電泳條件：電壓 50v；時(shí)間 電泳結(jié)束后，切斷電源，取出凝膠。 1電泳結(jié)果分析： ①紫外檢測(cè)儀直接觀察電源條帶 ②攝影記錄 注意事項(xiàng)： 凝膠濃度選擇 根據(jù)樣品 DNA分子大小而定， 所以電泳前應(yīng)對(duì) DNA片段大小有粗略的估計(jì) 用膠布封閉膠床兩端時(shí)，要確保嚴(yán)密，以免 灌膠時(shí)有膠液漏出 用微波爐熔化瓊脂糖時(shí)，以免突然產(chǎn)生氣泡，使瓊脂糖溢出來 凝膠冷卻至 60℃ 左右，立即鋪膠，以防凝固 上樣前檢查樣品孔內(nèi)是否有氣泡，并設(shè)法排除 電泳前，確認(rèn)樣品孔位于電場(chǎng)負(fù)極 因 EB存在，全部操作過程要帶防護(hù)手套 瓊脂糖凝膠濃度與 DNA分子的有效分離范圍 膠濃度（％） 線性 DNA分子大小（ kb） 5～ 60 1～ 20 ～ 10 ～ 7 ～ 6 ～ 4 ～ 3 maker
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