血清γ球蛋白的分離純化與鑒定-資料下載頁(yè)
2025-01-04 17:08本頁(yè)面
【正文】 譜為對(duì)照，觀察提純物屬哪種蛋白，其純度如何。 操作步驟 ： 裝置電泳箱。 區(qū)分電泳箱正負(fù)極 。 點(diǎn)樣：浸于巴比妥溶液中的薄膜，濾紙輕輕吸 干 — 半干燥態(tài)。鉛筆標(biāo)記；點(diǎn)樣器沾適 量新鮮血清，垂直點(diǎn)樣。 放入電泳槽，使膜保持水平。 通電： 110伏， 1小時(shí)。斷電后，取膜。 染色：氨基黑 10B染色 10min。 浸洗：浸洗液浸洗 3次，每次 510min。 快 + 鉛筆標(biāo)記 ，垂直點(diǎn)樣 保持膜不下垂 半干燥態(tài) ?按泳動(dòng)快慢順序分為： 清蛋白、 α α β、 γ— 球蛋白。 注意事項(xiàng)： 1 、區(qū)分電泳槽正負(fù)極。 2 、點(diǎn)樣處放在負(fù)極端，保持膜水平。 試劑材料 飽和硫酸銨溶液 納氏試劑 Sephadex G 25 DEAE－纖維素 醋酸纖維素薄膜 儀器 離心機(jī) 層析柱 紫外分光光度計(jì) 小燒杯 小試管 鐵架臺(tái)及鐵夾 電泳槽 白瓷板等。 注意事項(xiàng) 1． 鹽析時(shí)應(yīng)逐滴加入飽和硫酸銨 ， 邊加邊搖 ， 靜止要充分 。 2． 裝柱時(shí)柱內(nèi)要嚴(yán)防斷層與氣泡 ， 凝膠床面要平整 。 3． 準(zhǔn)確配制 NH4Ac緩沖液并嚴(yán)格調(diào)整其 PH至 。 4． 保持層析柱床表面完整 ,上樣或加緩沖液時(shí) ,動(dòng)作應(yīng)輕 、 慢 ， 切勿將柱床表面沖起 .上樣時(shí)小心控制下端聚乙烯管 .嚴(yán)防空 氣進(jìn)入層析柱床內(nèi) 。 5． 樣品進(jìn)入床內(nèi) ,打開(kāi)出口后應(yīng)立即收集 .洗脫時(shí)注意收集樣 品 ,切勿使樣品丟失 ,并注意不要使層析柱干涸 ,保留部分液 體在凝膠柱床表面 。 6． 本次實(shí)驗(yàn)填柱料 Sephadex G25和 DEAE纖維素價(jià)錢 昂貴 ， 在使用時(shí)應(yīng)注意隨時(shí)回收重復(fù)使用 。 思考題 1． 除了用凝膠過(guò)濾方法除去樣品中鹽外 ， 還可以用哪 些方法除鹽 ？ 2． 離子交換層析和凝膠過(guò)濾分離蛋白質(zhì)的原理是什么 ？ 3． 如何對(duì)分離 、 純化后所得到的 γ球蛋白的純度和 含量進(jìn)行鑒定 ？ 4． 如何從血清中分離純化免疫球蛋白 G？
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