牛奶中酪蛋白的分離與鑒定-資料下載頁(yè)
2025-05-09 00:56本頁(yè)面
【正文】 一定體積 （ 使其測(cè)定值在標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線范圍內(nèi) ） 。測(cè)定方法同上 ， 根據(jù)所測(cè)定的 OD595nm值 ， 在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)蛋白的量 ， 從而計(jì)算出未知樣品的蛋白質(zhì)濃度 (?g/mL)。 五 注意事項(xiàng) （ 1） 如果測(cè)定要求很?chē)?yán)格 ， 可以在試劑加入后的 520 min內(nèi)測(cè)定光吸收 ， 因?yàn)樵龠@段時(shí)間內(nèi)顏色最穩(wěn)定 。 （ 2） 測(cè)定中 ， 蛋白 染料復(fù)合物會(huì)有少部分吸附于比色杯壁上 ， 但此復(fù)合物的吸附量可以忽略 。 測(cè)定完后可用乙醇將藍(lán)色的比色杯洗干凈 。 （ 3） 一些陽(yáng)離子如 K+、 Na+、 Mg2+、 乙醇等物質(zhì)對(duì)測(cè)定無(wú)影響 ， 而大量的去污劑如 SDS等會(huì)嚴(yán)重干擾測(cè)定 。 六 722型分光光度計(jì)使用方法 1．調(diào)整 （ 1） 將靈敏度旋鈕調(diào)至“ 1”檔（放大倍率最?。?。調(diào)波長(zhǎng)調(diào)節(jié)器至所需波長(zhǎng)。 （ 2） 開(kāi)啟電源開(kāi)關(guān)，指示燈亮，選擇開(kāi)關(guān)置于“ T”，調(diào)節(jié)透光率[100%T]旋鈕使數(shù)字顯示 []左右，預(yù)熱 20min . 2．校正 （ 1）打開(kāi)吸收池暗室蓋（光門(mén)自動(dòng)關(guān)閉），調(diào)節(jié) [0% T]旋鈕，使數(shù)字顯示為“ ”，蓋上吸收池蓋，將參比溶液置于光路，使光電管受光，調(diào)節(jié)透光率 [100%T]旋鈕，使數(shù)學(xué)顯示為“ ”。 （ 2）如果顯示不到“ 100”，則可適當(dāng)增加電流放大器靈敏度檔數(shù)，但應(yīng)盡可能使用低檔數(shù)，這樣儀器將有更高的穩(wěn)定性。當(dāng)改變靈敏度 后必須重新校正“ 0”和“ 100”。 （ 3）按（ 1）連續(xù)幾次調(diào)整“ ”和“ ”后，如將選擇開(kāi)關(guān)置于“ A”，調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕，使數(shù)字顯示為“ .000”，即可進(jìn)行下面吸光度 A的測(cè)量；如將選擇開(kāi)關(guān)置于“ C”，將標(biāo)準(zhǔn)溶液推入光路，調(diào)節(jié)濃度旋鈕，使得數(shù)字顯示值為已知標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度數(shù)值，即可進(jìn)行下面 濃度 c的測(cè)量。 3．測(cè)定 （１） 吸光度Ａ的測(cè)量。將要測(cè)Ａ的試樣溶液推入光路，顯示值即為待測(cè)樣品的吸光度值Ａ。 （２） 濃度 c的測(cè)量。將要測(cè) c試樣溶液推入光路，即可讀出待測(cè)樣品的濃度值 c。 4．結(jié)束 測(cè)量完畢，關(guān)閉電源，將各調(diào)節(jié)旋鈕恢復(fù)至初始位置。取出吸收池洗凈，晾干，存于專(zhuān)用盒內(nèi)。 注意事項(xiàng) ： （ 1） 儀器接地要良好，否則顯示數(shù)字不穩(wěn)定。 （ 2） 如果大幅度改變測(cè)試波長(zhǎng)時(shí)，在調(diào)整“ ”和“ 100”后稍等片刻（因光能量變化急劇，光電管受光后響應(yīng)緩慢，需一段光響應(yīng)平衡時(shí)間），當(dāng)穩(wěn)定后，重新調(diào)整“ ”和“ 100”即可工作。 （ 3） 儀器左側(cè)下角有一只干燥劑筒，應(yīng)保持其干燥，發(fā)現(xiàn)干燥劑變色應(yīng)立即更新或烘干后再用。 （ 4） 當(dāng)儀器停止工作時(shí)，關(guān)掉電源，電源開(kāi)關(guān)需同時(shí)切斷，并罩好儀器 七 思考題 與其它測(cè)定蛋白質(zhì)濃度的方法相比，考馬斯亮藍(lán)染色法測(cè)定有何優(yōu)點(diǎn)？
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