活性蛋白質(zhì)的分離與應(yīng)用-資料下載頁(yè)
2025-05-10 12:19本頁(yè)面
【正文】 應(yīng)用都可以使之形成帶有一定電荷的膠束，從而得到很好的分離效果。有文獻(xiàn)報(bào)道在電解液中加入環(huán)糊精等物質(zhì)，可使含疏水結(jié)構(gòu)組分的多肽選擇與環(huán)糊精的環(huán)孔作用，從而利用疏水作用食多肽得到分離。 ? 用離子交換層析分離蛋白質(zhì)也是根據(jù)其帶電荷的情況。常用于蛋白質(zhì)分離的離子交換劑有弱酸性的羥甲基纖維素和弱堿性的二乙基氨基乙基纖維素，前者為陽(yáng)離子交換劑，后者為陰離子交換劑。若將離子交換與凝膠過濾相結(jié)合，效果更佳。 ? 蛋白質(zhì)對(duì)離子交換劑的結(jié)合力取決于彼此間相反電荷的靜電吸引，這與溶液的 pH有關(guān)，因?yàn)?pH決定離子交換劑與蛋白質(zhì)的電離程度。鹽類的存在可以降低離子交換劑的離子基團(tuán)和蛋白質(zhì)的相反電荷基團(tuán)之間的靜電吸引。因此，蛋白質(zhì)混合物的分離可用改變?nèi)芤褐宣}類離子強(qiáng)度（加鹽梯度洗脫）和 pH來完成。對(duì)離子交換劑結(jié)合力最小的蛋白質(zhì)，首先由層析柱中洗脫出來。 ? 某些物質(zhì)，例如極性的硅膠和氧化鋁以及非極性的活性炭等粉末具有吸附能力，能夠?qū)⑵渌N類的分子吸附在其粉末顆粒的表面，而吸附力又因被吸附的物質(zhì)性質(zhì)不同而異，吸附層析法就是利用這種吸附力的強(qiáng)弱不同達(dá)到分離的目的。對(duì)蛋白質(zhì)分子與各種吸附劑結(jié)合的真實(shí)性知道得還很少，但認(rèn)為與非極性吸附劑作用可能主要是靠范德華力和疏水作用；而與極性吸附劑作用的主要作用力，可能是離子吸引和氫鍵連接的力。 ? 蛋白質(zhì)提純中使用最廣泛和最有效的吸附劑是結(jié)晶磷酸鈣，即羥基磷灰石。據(jù)推測(cè)，蛋白質(zhì)分子中帶負(fù)電荷的基團(tuán)是與羥基磷灰石晶體的鈣離子結(jié)合。蛋白質(zhì)可用磷酸緩沖液從羥基磷灰石柱上洗脫下來。 蛋白質(zhì)分離純化的方法 ——親和層析 ? 親和層析法是分離蛋白質(zhì)的一種極為有效的方法。它通常只需經(jīng)過一步的處理，即可使某種待提純的蛋白質(zhì)從復(fù)雜的蛋白質(zhì)混合物中分離出來，并且純度很高。這種方法根據(jù)的是某些蛋白質(zhì)所具有的生物學(xué)性質(zhì)，即它們與另一種稱為配體的分子能特異而非共價(jià)地結(jié)合。例如，某些酶可以通過非共價(jià)鍵與其特異的輔酶牢固結(jié)合 。 蛋白質(zhì)分離純化的方法 ——親和層析 ? 親和層析的基本原理是：先把提純的某一蛋白質(zhì)的配體通過適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)反應(yīng)共價(jià)地連接到像瓊脂糖一類的多糖顆粒表面的官能團(tuán)上，這種多糖材料在其他性能方面允許蛋白質(zhì)自由通過；當(dāng)含有待提純的蛋白質(zhì)的混合樣品加到這種多糖材料的層析柱上時(shí)，待提純的蛋白質(zhì)則與其特異的配體結(jié)合，因而吸留在配體的載體 ——瓊脂糖顆粒的表面上，而其他的蛋白質(zhì)，因?qū)@個(gè)配體不具有特異的結(jié)合位點(diǎn)，將通過柱子而流出；被特異地結(jié)合在柱子上的蛋白質(zhì)，可用自由配體的溶液洗脫下來。 蛋白質(zhì)分離純化的方法 超濾法生產(chǎn)分離大豆蛋白工藝流程 脫脂豆粕 → 粉碎 → 酸浸提 → 固液分離 → 洗滌 → 堿浸提 → 固液分離 ↓ ↓ 豆乳清 渣（ 棄去 ） 豆乳清 → 超濾處理 → 中和 → 噴霧干燥 → 分離大豆蛋白 ↓ 滲出液 （ 棄去 ） 梯度分離溶提法分離小麥的蛋白的工藝流程 面粉磷酸鹽緩沖液 離心 分離 上清液（清蛋白、球蛋白） 沉淀 2mol/L尿素 離心分離 上清液（醇溶蛋白） 沉淀 6mol/L尿素 離心分離 上清液（谷蛋白） 沉淀 謝謝觀賞！
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