【正文】 名稱、生產(chǎn)企業(yè)、貨號、注冊證號 /備案憑證編號（如有）及其他相關(guān)信息，質(zhì)控品的濾紙應(yīng)明確型號。 4.【儲存條件及有效期】按照穩(wěn)定性研究資料，說明試劑盒的效期穩(wěn)定性，其他穩(wěn)定性也應(yīng)視情況明確，如開瓶穩(wěn)定性、復(fù)溶穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、凍融次數(shù)要求等，應(yīng)標(biāo)明具體的儲存條件及有效期。 5.【適用儀器】明確所有適用儀器的具體型號，并提供與儀器有關(guān)的重要信息以指導(dǎo)用戶操作。 6.【樣本要求】樣本的收集、處理和保存：應(yīng)參照相關(guān)文件的要求，并詳細(xì)描述采樣步 驟和注意事項。明確采樣前處理、消毒、采樣量、保存條件及期限（短期、長期）、運送條件、凍融次數(shù)的限制等。另外應(yīng)說明采樣過程中使用的濾紙型號應(yīng)與質(zhì)控品的濾紙型號一致。 上述內(nèi)容均需在穩(wěn)定性研究資料中詳述并進(jìn)行性能評估驗證。 7.【檢驗方法】應(yīng)詳細(xì)描述完成完整檢測所需的全部步驟以指導(dǎo)用戶正確操作，包括： 干血斑的前處理、萃取、衍生化（如有）、復(fù)溶及上機檢測等。 內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品溶液、各級工作液的配制方式。內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)品溶液和工作液的短期和長期保存方式、凍融次數(shù)等。 上機 檢測：儀器準(zhǔn)備、設(shè)置、儀器使用相關(guān)參數(shù)及結(jié)果處理。 質(zhì)量控制：質(zhì)控品的設(shè)置及檢測時的質(zhì)量控制方法、要求等。 說明檢測時應(yīng)特別注意的事項，如對精密度的控制措施、溶液的保存條件、其他影響檢測的因素等。 8.【陽性判斷值 /參考區(qū)間】明確設(shè)定及驗證陽性判斷值 /參考區(qū)間所使用的樣本例數(shù)及類型、試驗方法、統(tǒng)計方法及計算結(jié)果。 9.【檢驗結(jié)果的解釋】應(yīng)對不同的檢驗結(jié)果進(jìn)行解釋，并明確后續(xù)處理方法。如存在灰區(qū)，應(yīng)對灰區(qū)結(jié)果的處理方式一并詳述。 10.【檢驗方法的局限性】 本試劑盒的檢測結(jié)果僅能初步提示某種遺傳代謝病，其結(jié)果僅供臨床參考，不能作為診斷。對患者的臨床診斷應(yīng)采用相應(yīng)方法并結(jié)合其癥狀 /體征、病史等情況綜合進(jìn)行。 本試劑盒適用于全血干血斑樣本檢測，不適用于其它樣本檢測。 異常的紅細(xì)胞比容、年齡、早產(chǎn)、疾病等因素可能會影響檢測結(jié)果。 樣本采集、運輸及處理不當(dāng)、未按說明書操作等均有可能導(dǎo)致假陽性或假陰性結(jié)果，例如：血液未均勻浸透血斑區(qū)域、濾紙干血片打孔時打得太靠近血斑的邊緣、樣品收集或樣品干燥有問題、由于樣品受熱受潮，不能洗脫血斑、血斑濾紙受排泄物污染等等。應(yīng)描述在樣本采集，保存、運輸中需遵循的原則及注意事項。 。 單一代謝產(chǎn)物往往無法提供足夠的遺傳代謝病信息，應(yīng)建立代謝物模型來研究相關(guān)疾病。 。 11.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】按照分析 性能評估資料內(nèi)容描述以下性能指標(biāo)：檢測限、企業(yè)內(nèi)部參考品符合率（如適用）、準(zhǔn)確性、線性、特異性等。各項評估應(yīng)包括評估方法、數(shù)據(jù)和結(jié)果。應(yīng)描述臨床評價的試驗結(jié)果，包括臨床試驗機構(gòu)數(shù)量、樣本情況、試驗結(jié)果等內(nèi)容。 12.【注意事項】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容： 如該產(chǎn)品含有人源或動物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。 檢驗過程有關(guān)的有機溶劑的安全性要求，例如操作和廢棄的注意事項。 相關(guān)操作人員應(yīng)經(jīng)過專業(yè)的培訓(xùn)，并嚴(yán)格按照說明書的方法來進(jìn)行試驗。 三、名 詞解釋 的實際待測樣本，即將人全血滴加至濾紙上，再經(jīng)過打孔處理的樣本。 ，將添加了其他物質(zhì)（例如待測物、干擾物質(zhì)等）的人全血（或模擬血液基質(zhì)）滴加至濾紙上，再經(jīng)過打孔處理的樣本。 。 四、參考文獻(xiàn) .《臨床遺傳代謝病》，人民衛(wèi)生出版社，.《中國藥典》（ 2021 年版），中國醫(yī)藥科技出版社 .3.《新生兒疾病篩查技術(shù)規(guī)范》（ 2021 年版），（衛(wèi)婦 社發(fā)〔 2021〕 96 號） ,2021 年12 月 1 日 .4.《新生兒疾病篩查管理辦法》（中華人民共和國衛(wèi)生部令第 64 號 ） ， 2021 年 3 月 5日 .,FreeCarnitine,andAcylcarnitinesUsingTandemMassSpectrometry ，GuidanceforIndustryandFDAStaff ， FDA ，； ,PA:ClinicalandLaboratoryStandardsInstitute。、起草單位國家藥品監(jiān)督管理局醫(yī)療器械技術(shù)審評中心。 第三篇：酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 附件 1 酶聯(lián)免疫法檢測試劑注冊技術(shù)審查指導(dǎo)原則 一、前言 本指導(dǎo)原則主要針對酶聯(lián)免疫類檢測試劑的主要原材料、生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系、產(chǎn)品質(zhì)量控制等環(huán)節(jié)提出指導(dǎo)性技術(shù)要求。 本指導(dǎo)原則系對酶聯(lián)免疫法檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性確定其中的具體內(nèi)容是否適用，若不適用，需詳細(xì)闡述其理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)。 本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗證資料。應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。 本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善、科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，其相關(guān)內(nèi)容也將進(jìn)行適 時的調(diào)整。 二、適用范圍 本指導(dǎo)原則適用于有關(guān)病原微生物檢測的第三類體外診斷試劑的注冊技術(shù)審查。其他酶聯(lián)免疫法檢測試劑（如作為二類管理的體外診斷試劑）可參考本指導(dǎo)原則執(zhí)行。 三、基本要求 （一）基本原則 、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應(yīng)制定其相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并應(yīng)符合有關(guān)法規(guī)的要求。 — 2— 術(shù)人員、儀器設(shè)備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，獲得《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》；同時，應(yīng)按照《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細(xì)則（試行）》的要求建立相應(yīng)的質(zhì)量管理體系，形成文件和記錄，加以實施并保持有效運行；還應(yīng)通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質(zhì)量管理體系考核評定標(biāo)準(zhǔn)（試行）》的考核。企業(yè)應(yīng)對試劑的使用范圍做出明確規(guī)定，并經(jīng)國家藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)。 、規(guī)范的原則，各反應(yīng)條 件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。 、生產(chǎn)過程中所用的各種材料及工藝，應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。 ：保證試劑使用安全、質(zhì)量穩(wěn)定、工藝可控、檢測有效。 （二）原材料質(zhì)量控制 與產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料主要包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆抗體、多克隆抗體以及多肽類、激素類等生物原科。這類原料可用于包被酶標(biāo)反應(yīng)板、標(biāo)記相關(guān)酶（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等）、中和反應(yīng)用抗原或抗體、制備校準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品）等。 使用前應(yīng)按照工藝要求對這類生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗，以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對穩(wěn)定；若購買，其供應(yīng)商要求相對固定，不能隨意變更供應(yīng)商，如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請。 主要生物原料的常規(guī)檢驗項目一般包括：（ 1）外觀 肉眼觀察，大部分生物原料為澄清均一的液體，不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末，不含其他顏色的雜質(zhì)；特殊生 — 3— 物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。 （ 2）純度和分子量 主要經(jīng) SDSPAGE 電泳后，利用電泳掃描儀進(jìn)行分析，也可用其他適宜的方法，如高效液相法等。根據(jù)所檢測生物原料的分子量選擇適宜聚丙烯酰胺凝膠濃度進(jìn)行電泳，一般每個電泳道加樣量為 5μ g，電泳后的凝膠可用考馬斯亮藍(lán)染色或銀染法染色。染色后的凝膠用電泳掃描儀分析原料的純度和分子量，純度應(yīng)達(dá)到相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分子量大小應(yīng)在正確的條帶位臵。 （ 3）蛋白濃度 蛋白濃度可通過 Lowry 法、 280nm 光吸收法、雙縮脲法或其他適宜的方法進(jìn)行檢測。 （ 4）效價 效價的測定一般根據(jù)蛋白含 量測定結(jié)果，通過倍比稀釋法進(jìn)行。效價應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。 （ 5）功能性實驗 功能性實驗是指生物原料用于試劑盒實際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑盒的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性。 生物輔料一般指在生產(chǎn)過程中作為蛋白保護(hù)劑用途的一類生物原料，主要包括小牛血清、山羊血清、牛血清白蛋白和酪蛋白等。這些生物原料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)符合 2021 年版的《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。建議作以下檢驗： （ 1）牛血清或羊血清 外觀：為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無溶血或異物。無菌試驗：將血清直接 37℃放臵 7 天，明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或 — 4— 沉淀。 總蛋白含量：用雙縮脲法測定，蛋白含量≥ 32mg/ml。 球蛋白含量：取待測血清 1ml，采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀，沉淀溶于 %氯化鈉溶液，至 1ml，用 Lowry 方法測定，蛋白含量應(yīng)≤2mg/ml。 （ 2）牛血清白蛋白： 外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無吸潮，無結(jié)塊，無肉眼可見的其它雜質(zhì)顆粒。 溶 解性：將牛血清白蛋白配成 10%溶液，在 18 26℃時，溶解時間應(yīng)≤ 15 分鐘， pH值應(yīng)為 。 總蛋白含量：用雙縮脲法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥ 95％。 總蛋白中的牛血清白蛋白（ BSA）含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為≥ 95%。 BSA 的凈含量：總蛋白含量乘總蛋白中的 BSA 含量，其標(biāo)準(zhǔn)為≥90%。（ 3）酪蛋白： 應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（ 4）標(biāo)記用酶 應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱（如辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶等），同時應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗，酶的純度 RZ 值（ OD403nm/OD280nm）應(yīng)大于 。 對于小牛血清或山羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實驗，即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品，進(jìn)行酶聯(lián)免疫測定，均不能出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。 生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對固定，不得隨意變更供應(yīng)商。 3.化學(xué)原材料 化學(xué)原材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括外觀、一般鹽類檢測、溶液 pH 值 、溶解情況、干燥失重、熾灼殘渣等，均應(yīng)符合《中國生物制品主要原輔材 — 5— 料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)（ 2021 年版）》分析純級別的要求，并且要適合于本企業(yè)的生產(chǎn)。 主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對固定，不得隨意發(fā)生變更?；瘜W(xué)原材料在購入時，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)量檢驗報告。 （ 1）酶標(biāo)板①外觀 明亮處用肉眼觀察板條的外觀質(zhì)量，如有欠注、飛邊、骯臟、表面光潔度差，底部有波紋及劃傷等應(yīng)剔除。②吸附能力和精密性采用合適的方法進(jìn)行檢驗。 一般用一定 濃度的正常人免疫球蛋白 G(IgG)包被板條，再用一定濃度的抗人 IgG 酶結(jié)合物吸附，通過顯色反應(yīng)，使用酶標(biāo)儀讀數(shù)，計算 CV 值。 CV 值結(jié)果應(yīng)符合相關(guān)產(chǎn)品的功能性質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，一般批內(nèi) CV≤ 5％，批間 CV≤ 10％。 （ 2）液體試劑裝量瓶 包括陰陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液等液體組分，均應(yīng)有相應(yīng)的裝量瓶，并建立相應(yīng)的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如不同的液體試劑所用的裝量瓶規(guī)格、裝量瓶的顏色、瓶蓋的顏色等。 （ 3）其他材料 包括試劑瓶標(biāo)簽、粘膠紙、鋁箔袋、襯墊、可密 封塑料袋、說明書、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參照國家食品藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說明書、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 — 6— 企業(yè)質(zhì)控品一般包括陰 /陽性參考品的符合率、靈敏度（最低檢出量）、精密性、鉤狀效應(yīng)（ hook 效應(yīng)）等質(zhì)控樣品，對于定量檢測試劑，還包括線性質(zhì)控品樣品。如該產(chǎn)品具有國家標(biāo)準(zhǔn)品或參考品，應(yīng)使用國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）進(jìn)行標(biāo)化；若該診斷試劑沒有國家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品），則企業(yè)參考品的制備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序，以保證產(chǎn)品的安 全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類產(chǎn)品的質(zhì)量。 企業(yè)質(zhì)控品的基質(zhì)應(yīng)與診斷試劑的待測樣品的基質(zhì)基本一致，如待測樣品為血清 /血漿，質(zhì)控品基質(zhì)也應(yīng)為血清 /血漿。 （三）試劑盒各組分的生產(chǎn) 酶聯(lián)免疫法檢測試劑主要組分的生產(chǎn)包括酶標(biāo)記物的制備及滴配過程（酶工作液濃度確定）、各種工作溶液的配制、包被酶標(biāo)反應(yīng)板、分裝及包裝等步驟；并通過產(chǎn)品的半成品檢驗和成品檢驗兩個質(zhì)控過程來保證其質(zhì)量符合規(guī)定。 酶聯(lián)免疫診斷試劑研制生產(chǎn) 過程中所用的工作液一般包括：包被液、封閉液、陰性陽性對照、樣品稀釋液、洗滌液、酶結(jié)合物或酶稀釋液、底物或底物緩沖液、終止液等，對定量檢測試劑，還包括標(biāo)準(zhǔn)品（或校準(zhǔn)品）溶液。若陰性、陽性對照或其他液體組分涉及生物安全性問題，制備時應(yīng)在相應(yīng)的生物安全實驗室完成。 各種工作液在配制過程中應(yīng)嚴(yán)格按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的配方進(jìn)行配制，充分混勻確保