【導(dǎo)讀】物化學(xué)技術(shù)對鹽藻胞外蛋白質(zhì)的特性進行分析。利用考馬斯亮藍(lán)G—250染色法在595nm. 下測定吸光值，得到鹽藻胞外蛋白質(zhì)的含量為。蛋白質(zhì)丙酮沉淀后，通過薄板。對應(yīng)的分子量依次是34600，22900，和17800。有人建議將它們列為杜氏藻目，杜氏藻科。杜氏藻形態(tài)上類似于衣藻，為單細(xì)胞綠。物，此外還有核、線粒體、高爾基體、液泡和眼點。它們結(jié)構(gòu)上的顯著特點是沒有堅硬的。細(xì)胞壁，細(xì)胞由有彈性的多糖蛋白復(fù)合物型細(xì)胞膜包裹，表面有粘性覆蓋層。透壓發(fā)生變化時，細(xì)胞的形狀、大小就隨之而改變。時迅速稀釋或干燥時，通常會形成不動孢子。杜氏藻廣泛存在于自然界，既有淡水種類，例如D.flagellata，D.chordata，D.laleralis，議將淡水種類另列一屬。可見杜氏藻耐受鹽濃度變化范圍很寬。而言，能適應(yīng)低鹽水到飽和鹽水。當(dāng)外界鹽濃度化，它們通過合成甘油來調(diào)節(jié)。細(xì)胞內(nèi)甘油含量與細(xì)胞外鹽濃度是呈正相關(guān)的。度變化是無關(guān)的。杜氏藻中對于pH的耐受性也有明顯不同，有耐受強酸性環(huán)境的種類，

　　

【正文】 準(zhǔn) 蛋 白 電 泳 的 遷 移 距 離 （ 泳 距 ） 是,, (由于標(biāo)準(zhǔn)樣蛋白量較少，故凝 膠 上蛋白顯色也較淡，凝膠實物經(jīng)復(fù)印成圖片后又因碳黑陰影的掩蔽使得打印圖3上色調(diào)更淺 )膠槽 5，6， 7， 8 加的是胞外蛋白樣品，電泳形成 3個電泳條帶，泳距分別是 mm， mm， mm。鹽藻胞外蛋白樣品對應(yīng)的分子量分別是 34600，22900，和 17800。 圖 圖 3 鹽藻胞外蛋白質(zhì)的 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳圖 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 12 頁 共 16 頁 450 10 20 30 40d(mm)lgM 圖 4 標(biāo)準(zhǔn) 蛋白 分子量 lgM— d曲線圖 4 討論 近年來，鹽藻的研究多在于提取β — 胡蘿卜素方面，在鹽藻蛋白質(zhì)方面研究的比較少，尤是其胞外蛋白質(zhì)。本實驗以鹽藻為研究對象，研究其胞外蛋白質(zhì)的特性，在對鹽藻胞外蛋白質(zhì)的含量進行測定時發(fā)現(xiàn)其濃度不是太高，為 ，其中可能主要包括鹽藻分泌的蛋白質(zhì)和一些死亡的鹽藻的解體。進一步對胞外蛋白的遷移率 Rf值進行測定，發(fā)現(xiàn)其中含有兩類主要的蛋白質(zhì)，并且 Rf值差距比較大，對其推測可能一類是鹽藻分泌的胞外蛋白質(zhì)，另一類是鹽藻破碎裂解出的蛋白質(zhì)，具體情況還需要進一步的研究。在對 Rf值 為 的蛋白質(zhì)進行 SDS— 聚丙烯凝膠電泳和測定分子量時，發(fā)現(xiàn)所測得的三個分子量值與鹽藻胞內(nèi)分子量有一定的接近 [17]。我所做的一類胞外蛋白的分子量為 34 600， 22 900，和 17 800與其中一類細(xì)胞蛋白分子量 23 933， 17 954（同組實驗胡夢嬌同學(xué) 所做 ）相比 ，分子量非常接近，尤其是 17 800與 17 954，據(jù)此我們可以推測，這兩種分別取自胞內(nèi)和胞外的蛋白質(zhì)可能是同一種蛋白質(zhì)，這一種蛋白質(zhì)由細(xì)胞產(chǎn)生，但是也可以由細(xì)胞內(nèi)分泌到細(xì)胞外。這方面的資料比較少，還需要我們在以后的學(xué)習(xí)和研究中進一步了解 。 我國是 海洋 大國， 鹽藻資源很豐富。但現(xiàn)在主要是其利用胞內(nèi)蛋白作為添加劑生產(chǎn)海藻型蛋白質(zhì)飼料 ， 現(xiàn)在 需要 進一步 研制出 一系列更 合理有效利用 鹽藻胞內(nèi)蛋白 的技術(shù)，提高其附加值。 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 13 頁 共 16 頁 結(jié) 論 本實驗 以鹽藻為研究對象， 利用考馬斯亮藍(lán) G— 250 染色法 在 595 nm 下 測 吸光值， 得到 鹽藻 胞外蛋白質(zhì)的含量為 。 通過丙酮沉淀蛋白質(zhì)的方法，對鹽藻胞外蛋白進行粗提取，將粗提取的蛋白質(zhì) 通過薄板層析進一步提純，可以看出 鹽藻 胞外蛋白有兩大類蛋白質(zhì) Rf 值分別為 和 ，對遷移率為 的蛋白質(zhì)進 SDS— PAGE 可以得到 3 條帶， 泳距分別是 mm， mm， mm，其對應(yīng)的分子量分別是 34600， 22900，和17800。 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 14 頁 共 16 頁 致 謝 本次 實驗 得助于敬愛的郭金耀老師，在他的關(guān)懷和幫助下畫上了句號。回顧 實驗 的全過程， 在選題、準(zhǔn)備、收集和做論文的整個過程中都得到 郭 老師的悉心指導(dǎo)。為了使我盡早進入狀態(tài)，郭老師提供了大量的資料，從而使我對 實驗 目的、 實驗 步驟有了更加深入、更加全面的了解，從宏觀上有了認(rèn)識。為 了 實驗 的順利進行 郭老師 給予了莫大的幫助。 此外， 郭 老師 嚴(yán)謹(jǐn)細(xì)致的治學(xué)態(tài)度 和勤奮踏實的工作作風(fēng)，給我留下了深刻的印象，默默感染并影響著我，讓我感慨頗多、受益匪淺。在此，向郭 老師 表示衷心的感謝。 在 實驗 的進行的全過程中，還得到了楊曉玲老師的悉心指導(dǎo)和熱情幫助，在此表示感謝。 并衷心的感謝院領(lǐng)導(dǎo)和大學(xué)四年來帶所有的帶課老師。 對在本次 實驗 中， 向 提供幫助的胡夢姣，王麗，闞飛等同學(xué)表示感謝。并對余成元學(xué)弟在實驗過程的幫助表示感謝。 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 15 頁 共 16 頁 參 考 文 獻 [1] 柴玉榮 ， 王天云 ， 薛樂勛 ． 新型生物反應(yīng)器 — 杜氏鹽藻研究進展 .中國生物工程雜志 .2020， 24（ 2）： 3033． [2] 杜氏藻市場調(diào)研報告． :/ /. [3] 陸超華 ， 謝文造 ． 利用鹽藻開發(fā)功能食品的前景 .廣州食品工業(yè)科技 .1995, 11（ 4） : 1417 [4] 孫福璋 ,賈磊 ,賀君．海洋天然色素 — 胡蘿卜素提取及杜氏藻中有關(guān)營養(yǎng)成分的測定海洋科學(xué)． 1991， 1 (4) ： 13． [5] 李建武，余瑞元，袁明修等 ． 生物化學(xué)實驗原理和方法 . 北京：北京 大學(xué)出版社 .1994,216— 222． [6] 吳學(xué)軍 ,謝能詠，劉勇 ． 薄層層析法分離六種氨基酸 ． 江漢大學(xué)學(xué)報 .1999， 16（ 3）： 13． [7] 李娟 ,張耀庭 ,曾偉等 ． 利用考馬斯亮藍(lán)法測定 總蛋白含量 ． 中國生物制品學(xué)雜志 ． 2020,13(2)118120． [8] 常巧玲 ,孫建義 ． 海藻飼料資源及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中 的應(yīng)用 ． 飼料工業(yè) ． 2020,27（ 2） 6264． [9] 郭金耀 ,楊曉玲 ． 營養(yǎng)方式對鹽藻生長與物質(zhì)積累的影響 .江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) .2020,(1) ：138140． [10] 劉艷，楊海波 ． 對小球藻蛋白質(zhì)的提取及分離的研究 .大連大學(xué)學(xué)報 .2020， 23（ 4）：14． [11] 陸正清 ． 薄層層析法測定調(diào)味品中氨基酸含量綜述 .中國調(diào)味品 .2020， 7(6):13． [12] 潘俊敏 ,張憲孔 ． 藻類葉綠素和類胡蘿素的快速薄板層析法 .植物生理學(xué)通訊 .1990， (3)：51— 53． [13] 陸健等 ． 蛋白質(zhì)純化技術(shù)及應(yīng)用 . 北京 ：化學(xué)工業(yè)出版社 .2020,26— 25． [14] 楊雪梅 ,吳超元 ． 鹽藻的研究與開發(fā) ,生命科學(xué) ． 1994,6（ 9）： 79． [15] 郭堯君 .蛋白質(zhì)電泳實驗技術(shù) . 北京： 科學(xué) 出版社 . 1999， 123138． [16] 吳斗思 ,盧淑琴 ,吳獻役 ． 用 SDS 凝膠電泳法測定水解絲蛋白的分子量 .天津紡織工學(xué)院學(xué)報 .1996,15(4)： 2526． [17] 陳思學(xué) ,李琳 ,焦新之 ． 滲透震擾對杜氏鹽藻細(xì)胞蛋白質(zhì)磷酸化的影響 . 植物學(xué)報 ． 1998, 2(2)： 15 [18] 方紹慶 ， 魯閩 ， 陳克衛(wèi) ． SDS 一聚丙烯酰胺凝膠電泳法鑒定動物肌肉蛋白熱變性的研究 .現(xiàn)代食品科技 .2020， 22（ 3）： 2109— 220． [19 ] 夏冰芝 ， 俞詩源 ， 嚴(yán) 峰 等 ．蟾蜍和麻蜥肝臟及肺組織中低分子蛋 白的 SDS— PAGE比較分析 .西安師范大學(xué)學(xué)報 . 2020， 42（ 6） ： 65— 67． [20] 汪家政 , 范明．蛋白質(zhì)技術(shù)手冊． 北京：科學(xué)出版社． 2020， 05— 107． [21] 胡軼紅，吉愛玲，徐存拴．大鼠八種器官的蛋白質(zhì)圖譜分析．河南科學(xué) ． 2020， 18(1)：59— 62． 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 16 頁 共 16 頁 [22] 鹿海林，房興堂 ． 值得重視的飼料資源 — 海藻蛋白質(zhì)飼料 ． 飼料世界 ． 2020，（ 1）17— 19． [23] Hajimu lshiwata,et a1． Concentration of Carbon Monoxide in Commercial Fish Flesh and in Fish Flesh Exposed to Carbon Monoxide Gas for Color Fixing． Food , 1996， 37 (2)： 83— 90． [24] of Activation Methods for OrganozicReagents Tetrahedron, 1987,(10):2203．