【正文】 在 實驗 的進行的全過程中，還得到了楊曉玲老師的悉心指導和熱情幫助，在此表示感謝。 淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設計（論文） 第 13 頁 共 16 頁 結 論 本實驗 以鹽藻為研究對象， 利用考馬斯亮藍 G— 250 染色法 在 595 nm 下 測 吸光值， 得到 鹽藻 胞外蛋白質的含量為 。 圖 圖 3 鹽藻胞外蛋白質的 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳圖 淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設計（論文） 第 12 頁 共 16 頁 450 10 20 30 40d(mm)lgM 圖 4 標準 蛋白 分子量 lgM— d曲線圖 4 討論 近年來，鹽藻的研究多在于提取β — 胡蘿卜素方面，在鹽藻蛋白質方面研究的比較少，尤是其胞外蛋白質。根據(jù)繪制的標準曲線計算得出鹽藻胞外蛋白質含量為 。 （ 16）加樣： 用微量 注射器取樣 10μ L，加入樣品槽 5， 6， 7， 8中，同時在 4號槽中加入10μ L的標準蛋白溶液，標準蛋白分子量如表 7。 （ 11） 配制 脫色液： 冰乙酸 75mL， 乙 醇 50mL，加重蒸 水定容至 1000mL。L1 HCl 48mL，調 節(jié) pH至 ， 用玻璃棒引流至 100 mL 的容量瓶中， 最后加重蒸水定容至 100mL， 4℃貯存 ，待用。先配制 （ 14）用刀片將紫紅色的斑點取下，置于試管中，加入 1mL 蒸餾水，搖勻，用離心機離心（ 4000r/min,10min） ,取上清液，保存與 EP 管中，待用。 （ 10） 將點樣后的薄層板，置于裝有展開劑的展層缸中，每只缸裝兩塊薄層板，傾角15 度，嚴密封口，進行展開。 由于后面的電泳實驗需要對薄板上分離的蛋白質做定性分析，因此薄板的厚度要做的盡量厚一些，約 ～ 1mm。 （ 7） 2h 后，從冰箱中取出燒杯。 (3)將取得的藻液離心（ 4000r/min,20min）。 標準蛋白曲線的制作 用電子天平準確稱取標準牛血清白蛋白 20mg，放入燒杯中，用蒸餾水溶解后倒入 100mL容量瓶中，并用蒸餾水定容至 100mL 刻度處，即制成標準蛋白溶液，濃度為 。今后研究的重 點應集中在以下幾個方面：①應大量選育優(yōu)質、高產(chǎn)量、含生物活性物質的品種，利用生物工程技術加快培育品種的步伐，大力發(fā)展飼用海藻生產(chǎn)。存在于杜氏藻中的二羥基丙酮還原酶已被分離、純化和商業(yè)銷售。若長期食用還需考慮其核酸水平 ,每日攝食的微藻數(shù)量不應超過 20g。 有關鹽藻 DNA 的研究也很多。并脫氫形成雙鍵，這是異構化的關鍵。 篩選出的 β — 胡蘿卜素 高產(chǎn)品系在高溫、高鹽、強光照和缺氮的條件下， 累積的 β — 胡蘿卜素占千重的 10%以上，有報道最高可達14％，而在一般的生物體中僅占千重的 ％左右。杜氏藻的碳水化合物有半乳糖、葡萄糖、甘露糖、核糖、木糖、鼠李糖和多糖等。特別是當鹽度 于 20%時，它們是最重要的原初生產(chǎn)者。也有廣鹽性種類例如 D. tertiolecta， D. bioculata， D. primolecta， 還有生存于超鹽環(huán)境如鹽湖、鹽田中的種類如 D. salina， D. minuta， D. parva， D. viridis 等。它們結構上的顯著特點是沒有堅硬的細胞壁，細胞由有彈性的多糖蛋白復合物型細胞膜包裹，表面有粘性覆蓋層。 淮 海 工 學 院 畢業(yè)設計 (論文 )說明書 題 目： 鹽藻胞外蛋白質的特性分析 作 者： 曹 宇 學 號： 5203102201 系 (院 )： 海洋學院 專業(yè)班級 ： 生物技術 生技 032 指導者： 郭金耀 教授 評閱者： 秦 蕾 副 教授 2020 年 6 月 連 云 港 畢業(yè)設計（論文）中文摘要 鹽藻胞外蛋白質的特性分析 摘 要： 本研究以 鹽藻為研究對象 ，通過蛋白質丙酮沉淀，薄板層析， SDS— PAGE 等生物化學技術對 鹽藻 胞外蛋白質的特性進行分析。因此，當滲透壓發(fā)生變化時，細胞的形狀、大小就隨之而改變。有人建議將淡水種類另列一屬。在鹽田蒸發(fā)池中可見到這些紅色群體的存在。鹽生杜氏藻在低鹽培養(yǎng)基中生長時，其碳水化合物含量可達細胞干重的30%~40%，高鹽度下，碳水化合物含量降低，而甘油含量顯著增加。 鹽藻累積的β — 胡蘿卜素其順式異構體最多可 60％以上。在脫氫過程中脫去的是 S— 氫還是 R— 氫。如 D． salina 的葉綠體 DNA 片段在大腸桿菌中得到啟動、表達對有關β — 胡蘿卜素 合成的同源基因之間的調控研究等等。 微藻還被成功地用于水產(chǎn)養(yǎng)殖 ,飼養(yǎng)魚類或作動物性浮游生物 (如鹽湖甲殼蟲、紅蟲、輪蟲 )、蝦幼蟲或牡蠣等的餌料。 對鹽藻營養(yǎng)成分的分析結果表明，鹽藻營養(yǎng)的物質含量非常豐富。②對加工工藝的研究。 取干凈的具塞試管 6 支，按表 3 編號后，加入各種物質。取的上清液，置入 500 mL 的三角燒瓶中，放入冰箱上層待用。其中的溶液利用冷凍高速離心機離心（ 10000r/min,5min, 4 ℃） ，用 蒸餾水吹洗法 將取得的沉淀置于試管中，在冰箱下層保存待用。 （ 5）配制 6M 的 HCL：量取分析純 ,加蒸餾水定容至 10mL。展開時間為 3h50min 展開距離約達到薄層板的 3/4 時，取出薄層板。 鹽藻胞外蛋白質的 電泳與分子量測定 （ 1）配制 10%（ W/V） SDS 溶液： 用電子天平 稱 取 5gSDS 置于燒杯中 ，加重蒸水至 50mL，微熱使其溶解，置 于 試劑瓶中， 4℃ 貯存 ，待用 。L 1 TrisHCl 緩沖液： 用電子天平 稱取 Tris （ 三羥甲基氨基甲烷 ） ， 置于燒杯中， 加入 50ml 重蒸水，再中入約3ml 1mol （ 8） 配制濃縮膠緩沖液（ （ 12） 垂直平板電泳槽的安裝 ： 先把垂直平板電泳槽和兩塊玻璃板洗凈，晾干。 加樣時，將微量注射器的針頭通過電極緩淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設計（論文） 第 10 頁 共 16 頁 沖液伸入加樣槽內，盡量接近底部，輕輕推動微量注射器 。表明鹽藻胞外蛋白質的含量非常低，要想應用于實際生產(chǎn)還有一些不足。本實驗以鹽藻為研究對象，研究其胞外蛋白質的特性，在對鹽藻胞外蛋白質的含量進行測定時發(fā)現(xiàn)其濃度不是太高，為 ，其中可能主要包括鹽藻分泌的蛋白質和一些死亡的鹽藻的解體。 通過丙酮沉淀蛋白質的方法，對鹽藻胞外蛋白進行粗提取，將粗提取的蛋白質 通過薄板層析進一步提純，可以看出 鹽藻 胞外蛋白有兩大類蛋白質 Rf 值分別為 和 ，對遷移率為 的蛋白質進 SDS— PAGE 可以得到 3 條帶， 泳距分別是 mm， mm， mm，其對應的分子量分別是 34600， 22900，和17800。 并衷心的感謝院領導和大學四年來帶所有的帶課老師。在此，向郭 老師 表示衷心的感謝。但現(xiàn)在主要是其利用胞內蛋白作為添加劑生產(chǎn)海藻型蛋白質飼料 ， 現(xiàn)在 需要 進一步 研制出 一系列更 合理有效利用 鹽藻胞內蛋白 的技術，提高其附加值。鹽藻胞外蛋白樣品對應的分子量分別是 34600，22900，和 17800。并測得混合物在吸光度 A595nm 的平均吸光值為 ，考馬斯亮藍法具有干擾少，簡便，靈敏，準確等優(yōu)點而且重復性好。 表 6 SDS— 不連續(xù)體系凝膠配制 試劑名稱 配制 %分離膠所需 試劑用量 /ml 配制 3%濃縮膠所需