【正文】 蛋白溶液 (ml) 0 染色液 (ml) 3 3 3 3 鹽藻胞外蛋白質的 薄板層析與 Rf 值的測定 （ 1）用洗衣粉清洗玻璃板 4 12cm 和 15 cm 各兩塊，然后用蒸餾水沖洗，晾干待用。并繪制 標準蛋白曲線 如圖 1 淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設計（論文） 第 6 頁 共 16 頁 表 3標準曲線溶液配制 管號 對照 1 2 3 4 5 (ml) 0 蒸餾水 (ml) 0 加入的標準蛋白濃度 (mg/ml) 0 染色液 (ml) 3 3 3 3 3 3 A595nm 0 標準蛋白曲線 y = 4 . 7 2 1 4 x0 . 00 . 20 . 40 . 60 . 81 . 00 . 0 0 0 . 0 5 0 . 1 0 0 . 1 5 0 . 2 0 0 . 2 5蛋白質濃度 / m g / m LA595 圖 1 標準牛血清白蛋白的吸光度與蛋白質濃度曲線 鹽藻胞外蛋白質的獲取與含量測定 (1)鹽藻生長培養(yǎng)在光照培養(yǎng)箱中進行。蛋白質含量高達 50％左右 (干粉 )，相當于全脂奶粉的 2 倍 [3]。介質中的營養(yǎng)鹽與β — 胡蘿卜素的合成也有關系。有關β — 胡蘿卜素的累積機制，特別是異構化位置的研究，倍受關注。杜氏藻的自然群體有明顯的季節(jié)變化，在 夏季時 當水溫超過 30℃ 時，自然群體最為豐富，但它們在水中并不是均勻分布的，通常 和 D. parva 集中于水體表層，而綠色杜氏藻 (D. viridis)常在水體的下層和底泥表面。在不同條件下，可觀察到卵形、球形、圓柱形、橢圓形、梨形、紡錘形等。細胞內有 1 個杯狀葉綠體，底基部有 1 個由多糖顆粒包圍的蛋白核廣多糖 ， 是細胞的貯藏產物，此外還有核、線粒體、高爾基體、液泡和眼點。杜氏藻中對于 pH 的耐受性也有明顯不同，有耐受強酸性環(huán)境的種類，例如 D. acidophila， 也有耐 受 強堿性的種類 如 D． salina， 一般來說海生的杜氏藻并不是海洋浮游植物的主要種類，但在超鹽環(huán)境中，如美國的大鹽湖、以色列的死海、澳大利亞的賓克湖中，紅色的 D. salina， 粉紅色的 D. parva， 綠色的 D. viridis 常常是優(yōu)勢種。因此，近十幾年來科學家努力尋求一種能產生大量 β — 胡蘿卜素 的生物， 同時希望其中的順式異構體越多越好，而鹽藻就是符合這一要求的最佳選擇。外加脫落酸在適當的濃度下， 也有這種功效。除去類胡蘿卜素和甘油后的藻渣中蛋白質的含量比例將進一步提高，達到 40%，其蛋白含量和氨基酸組成類似于大豆蛋白。 藥品 丙酮 國藥集團化學試劑有限公司 考馬斯亮藍 G250 粉末 國藥集團化學試劑有限公司 標準牛血清白蛋白粉末 國藥集團化學試劑有限公司 85%磷酸 南京化學試劑有限公司 硅膠 GF254 中國雁蕩山試劑廠 羧甲基纖維素鈉 北京化學試劑有限公司 無水乙醇 天津市科密歐化學試劑有限公司 分析純 AR 鹽酸 南京化學試劑一廠 正丁醇， 南京化學試劑一廠 冰醋酸 國藥集團化學試劑有限公司 水合茚三酮 中國醫(yī)藥公司 十二烷基磺酸鈉 (SDS) 北京中聯化工試劑廠 重蒸水 實驗室自制 過硫酸銨（ AP） AMRESCO 淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設計（論文） 第 5 頁 共 16 頁 四甲基乙二胺（ TEMED） 巰基乙醇 溴酚藍 蔗糖 國藥集團化學試劑有限公司 丙烯酰胺 （ Acr） N, N’亞甲雙丙烯酰胺 (Bis) AMRESCO 三羥甲基氨基甲烷（ Tris） 考馬斯亮藍 R250 國藥集團化學試劑有限公司 甘氨酸 ProteinMarker Mid Range Bio Basic Inc. 儀器 UV754 紫外可見光光度計 山東高密彩虹分析儀器有限公司 YP2020N 電子天平 上?？茖W精密有限公司 78— 1 加熱磁力攪拌器 常州國華電器有限公司 日立 CR22G 冷凍高速離心機 日本 HITACHI 公司 電熱恒溫干燥箱 連云港醫(yī)療器械設備廠 DYY— 2C 穩(wěn)流穩(wěn)壓電泳儀 南京 高新技術校園生物技術所 夾心式垂直板電泳槽 北京六一廠 微量注射器 上海安亭微量進樣廠 LD52A 低速離心機 北京醫(yī)用離心機廠 SZ93 自動雙重純水蒸餾器 上海亞榮生化儀器廠 SHZD（Ⅲ ）循環(huán)水式真空泵 鞏義市英峪予華儀器廠 DYB2 脫色搖床 江蘇省興化市分析儀器廠 PHS— 2F PH 計 上海精密科學儀器有限公司 ZGX— 300C 智能光照培養(yǎng)箱 杭州錢塘江設備有限公司制造 實驗 方法 考馬斯亮藍 G250 染色液制備 稱取 100mg 考馬斯 亮藍 G250 粉末，溶于 50mL 95％乙醇中，加入 85％（ W／ V）的磷酸 100mL，最后用蒸餾水定容到 1 000mL， 裝入試劑瓶中，此溶液在常溫下可放置一個月 [7]。然后將燒杯置于冰箱下層，沉淀蛋白質 [12]。 注意：每次所劃的樣不宜太多，要適宜均勻。L 1 TrisHCl 緩沖液。 （ 10） 配制 ： 稱考馬斯亮藍 R250 ， 加35%的乙醇 454mL,46mL 冰乙酸混勻， 過濾后 待 用。并測得混合物在吸光度 A595nm 的平均吸光值為 ，考馬斯亮藍法具有干擾少，簡便，靈敏，準確等優(yōu)點而且重復性好。但現在主要是其利用胞內蛋白作為添加劑生產海藻型蛋白質飼料 ， 現在 需要 進一步 研制出 一系列更 合理有效利用 鹽藻胞內蛋白 的技術，提高其附加值。 并衷心的感謝院領導和大學四年來帶所有的帶課老師。本實驗以鹽藻為研究對象，研究其胞外蛋白質的特性，在對鹽藻胞外蛋白質的含量進行測定時發(fā)現其濃度不是太高，為 ，其中可能主要包括鹽藻分泌的蛋白質和一些死亡的鹽藻的解體。 加樣時，將微量注射器的針頭通過電極緩淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設計（論文） 第 10 頁 共 16 頁 沖液伸入加樣槽內，盡量接近底部，輕輕推動微量注射器 。 （ 8） 配制濃縮膠緩沖液（ 鹽藻胞外蛋白質的 電泳與分子量測定 （ 1）配制 10%（ W/V） SDS 溶液： 用電子天平 稱 取 5gSDS 置于燒杯中 ，加重蒸水至 50mL，微熱使其溶解，置 于 試劑瓶中， 4℃ 貯存 ，待用 。 （ 5）配制 6M 的 HCL：量取分析純 ,加蒸餾水定容至 10mL。取的上清液，置入 500 mL 的三角燒瓶中，放入冰箱上層待用。②對加工工藝的研究。 微藻還被成功地用于水產養(yǎng)殖 ,飼養(yǎng)魚類或作動物性浮游生物 (如鹽湖甲殼蟲、紅蟲、輪蟲 )、蝦幼蟲或牡蠣等的餌料。在脫氫過程中脫去的是 S— 氫還是 R— 氫。鹽生杜氏藻在低鹽培養(yǎng)基中生長時，其碳水化合物含量可達細胞干重的30%~40%，高鹽度下，碳水化合物含量降低，而甘油含量顯著增加。有人建議將淡水種類另列一屬。 淮 海 工 學 院 畢業(yè)設計 (論文 )說明書 題 目： 鹽藻胞外蛋白質的特性分析 作 者： 曹 宇 學 號： 5203102201 系 (院 )： 海洋學院 專業(yè)班級 ： 生物技術 生技 032 指導者： 郭金耀 教授 評閱者： 秦 蕾 副 教授 2020 年 6 月 連 云 港 畢業(yè)設計（論文）中文摘要 鹽藻胞外蛋白質的特性分析 摘 要： 本研究以 鹽藻為研究對象 ，通過蛋白質丙酮沉淀，薄板層析， SDS— PAGE 等生物化學技術對 鹽藻 胞外蛋白質的特性進行分析。也有廣鹽性種類例如 D. tertiolecta， D. bioculata， D.