【正文】 集團化學(xué)試劑有限公司 考馬斯亮藍(lán) G250 粉末 國藥集團化學(xué)試劑有限公司 標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白粉末 國藥集團化學(xué)試劑有限公司 85%磷酸 南京化學(xué)試劑有限公司 硅膠 GF254 中國雁蕩山試劑廠 羧甲基纖維素鈉 北京化學(xué)試劑有限公司 無水乙醇 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 分析純 AR 鹽酸 南京化學(xué)試劑一廠 正丁醇， 南京化學(xué)試劑一廠 冰醋酸 國藥集團化學(xué)試劑有限公司 水合茚三酮 中國醫(yī)藥公司 十二烷基磺酸鈉 (SDS) 北京中聯(lián)化工試劑廠 重蒸水 實驗室自制 過硫酸銨（ AP） AMRESCO 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 5 頁 共 16 頁 四甲基乙二胺（ TEMED） 巰基乙醇 溴酚藍(lán) 蔗糖 國藥集團化學(xué)試劑有限公司 丙烯酰胺 （ Acr） N, N’亞甲雙丙烯酰胺 (Bis) AMRESCO 三羥甲基氨基甲烷（ Tris） 考馬斯亮藍(lán) R250 國藥集團化學(xué)試劑有限公司 甘氨酸 ProteinMarker Mid Range Bio Basic Inc. 儀器 UV754 紫外可見光光度計 山東高密彩虹分析儀器有限公司 YP2020N 電子天平 上?？茖W(xué)精密有限公司 78— 1 加熱磁力攪拌器 常州國華電器有限公司 日立 CR22G 冷凍高速離心機 日本 HITACHI 公司 電熱恒溫干燥箱 連云港醫(yī)療器械設(shè)備廠 DYY— 2C 穩(wěn)流穩(wěn)壓電泳儀 南京 高新技術(shù)校園生物技術(shù)所 夾心式垂直板電泳槽 北京六一廠 微量注射器 上海安亭微量進樣廠 LD52A 低速離心機 北京醫(yī)用離心機廠 SZ93 自動雙重純水蒸餾器 上海亞榮生化儀器廠 SHZD（Ⅲ ）循環(huán)水式真空泵 鞏義市英峪予華儀器廠 DYB2 脫色搖床 江蘇省興化市分析儀器廠 PHS— 2F PH 計 上海精密科學(xué)儀器有限公司 ZGX— 300C 智能光照培養(yǎng)箱 杭州錢塘江設(shè)備有限公司制造 實驗 方法 考馬斯亮藍(lán) G250 染色液制備 稱取 100mg 考馬斯 亮藍(lán) G250 粉末，溶于 50mL 95％乙醇中，加入 85％（ W／ V）的磷酸 100mL，最后用蒸餾水定容到 1 000mL， 裝入試劑瓶中，此溶液在常溫下可放置一個月 [7]。 本實驗以鹽藻為 研究對象，研究其胞外的蛋白質(zhì)，通過對其的研究可以進一步認(rèn) 識海藻蛋白質(zhì)的特性和作用。③ 由于海藻中的各種營養(yǎng)物質(zhì)成分和含量差異很大，所以在生產(chǎn)海藻過程中。②對加工工藝的研究。但目前在國內(nèi)僅有少數(shù)幾家海藻加工企業(yè)，而主要是生產(chǎn)人類食品、藥品以及提取工業(yè)品，而至今尚無專門的海藻蛋白質(zhì)加工企業(yè)，對海藻蛋白質(zhì)研究正處于剛剛起步的階段。鹽藻的蛋白質(zhì)含量和 氨 基酸組成表明，鹽藻是營養(yǎng)食品的蛋白新資源，是高蛋白仿生高級營養(yǎng)制品的理想原料。 提取β一胡蘿卜素和甘油后的藻粉，蛋白質(zhì)含量可達(dá) 70％以上（鹽藻含有 l8 種人體所需的氨基酸，其中人體必需的 8 種氨基酸舍量占全氨基酸含量的 %。 對鹽藻營養(yǎng)成分的分析結(jié)果表明，鹽藻營養(yǎng)的物質(zhì)含量非常豐富。除去類胡蘿卜素和甘油后的藻渣中蛋白質(zhì)的含量比例將進一步提高，達(dá)到 40%，其蛋白含量和氨基酸組成類似于大豆蛋白。 杜氏 鹽 藻的綠色細(xì)胞通常含 50%~60%的蛋白質(zhì) (干重 )，而生 長在高鹽、氮不足的紅色細(xì)胞中約含 30%。已進行了以藻蛋白代替魚粉或大豆蛋白質(zhì)的飼養(yǎng)試驗 ,有幾個研究小組曾經(jīng)報導(dǎo)取得了可喜的成果。 微藻還被成功地用于水產(chǎn)養(yǎng)殖 ,飼養(yǎng)魚類或作動物性浮游生物 (如鹽湖甲殼蟲、紅蟲、輪蟲 )、蝦幼蟲或牡蠣等的餌料。但微藻細(xì)胞壁難于消化 ,食用后易產(chǎn)生不良副反應(yīng) ,食用前必須進行充分的加工處理。因此早在 1949 年 ,Spoehr 和Milner 就建議利用藻類蛋白質(zhì)解決全球性蛋白短缺問題 ,但這方面的研究為數(shù)不多 ,并且大多是在 1970 年以前進行的。加以尿素為氮源特別有利于鹽藻合成β — 胡蘿卜素和維生素 C，而不利于維生素 E 的合成 。如 D． salina 的葉綠體 DNA 片段在大腸桿菌中得到啟動、表達(dá)對有關(guān)β — 胡蘿卜素 合成的同源基因之間的調(diào)控研究等等。外加脫落酸在適當(dāng)?shù)臐舛认拢? 也有這種功效。如高鹽能刺激鹽藻細(xì)胞內(nèi)脫落酸的合成。這方面的工作仍需深入進行。在脫氫過程中脫去的是 S— 氫還是 R— 氫。在該酶的催化下，異戊烯焦磷酸轉(zhuǎn)入β — 胡蘿卜素合成中的碳鏈。再合成β — 胡蘿卜素。以達(dá)草滅， J— 334 和六甲基嘧啶等阻斷β — 胡蘿卜素的生物合成，發(fā)現(xiàn)在β — 胡蘿卜素的前體 — 八氫番茄紅素形成時。 鹽藻累積的β — 胡蘿卜素其順式異構(gòu)體最多可 60％以上。因此，近十幾年來科學(xué)家努力尋求一種能產(chǎn)生大量 β — 胡蘿卜素 的生物， 同時希望其中的順式異構(gòu)體越多越好，而鹽藻就是符合這一要求的最佳選擇。其中有些甚至對人體有害，遠(yuǎn)不能滿足人類的要求。 Wackenrode 在 1831 年揭示了β — 胡蘿卜素的存在，化學(xué)家于 1931 年弄清了它的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并 于 1950 年成功地合成了β — 胡蘿卜素。鹽生杜氏藻在低鹽培養(yǎng)基中生長時，其碳水化合物含量可達(dá)細(xì)胞干重的30%~40%，高鹽度下，碳水化合物含量降低，而甘油含量顯著增加。 表 1 鹽藻的營養(yǎng)成分 成分 蛋白質(zhì) 脂肪 總碳水化 合物 β — 胡蘿卜素 維生素 C 鈣 磷 含量（ %） 杜氏藻含有多種維生素，例如硫胺素、 吡哆醇、核黃素、菸酸，特別是生物素和 α 生育酚的含量較高。根據(jù)對鹽生杜氏藻 營養(yǎng) 成分 （ 表 1） [3]分析表明，除了含 % β — 胡蘿卜素外，甘油的含量占淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 2 頁 共 16 頁 30%，蛋白質(zhì)的含量也約占 %。當(dāng)高鹽度和高光強時 ， D. parva 向水體底部移動，而 D. salina 還保持懸浮，這是 D. salina 光合作用光飽和點高之故。在鹽田蒸發(fā)池中可見到這些紅色群體的存在。杜氏藻中對于 pH 的耐受性也有明顯不同，有耐受強酸性環(huán)境的種類，例如 D. acidophila， 也有耐 受 強堿性的種類 如 D． salina， 一般來說海生的杜氏藻并不是海洋浮游植物的主要種類，但在超鹽環(huán)境中，如美國的大鹽湖、以色列的死海、澳大利亞的賓克湖中，紅色的 D. salina， 粉紅色的 D. parva， 綠色的 D. viridis 常常是優(yōu)勢種。細(xì)胞內(nèi)甘油含量與細(xì)胞外鹽濃度是呈正相關(guān)的。就鹽生杜氏藻 ()而言，能適應(yīng)低鹽水到飽和鹽水 (35%~36%)。有人建議將淡水種類另列一屬。 杜氏藻的分布及生態(tài) 杜氏藻廣泛存在于自然界，既有淡水種類，例如 D. flagellata， D. chordata， D. laleralis，D. paupera。有性生殖類似于衣藻的同配接合生殖。當(dāng)環(huán)境不利時，常變?yōu)榍蛐?[1]。因此，當(dāng)滲透壓發(fā)生變化時，細(xì)胞的形狀、大小就隨之而改變。細(xì)胞內(nèi)有 1 個杯狀葉綠體，底基部有 1 個由多糖顆粒包圍的蛋白核廣多糖 ， 是細(xì)胞的貯藏產(chǎn)物，此外還有核、線粒體、高爾基體、液泡和眼點。有人建議將它們列為杜氏藻目，杜氏藻科。蛋白質(zhì)丙酮沉淀后，通過薄板層析可以看出 鹽藻 胞外蛋白有兩大類蛋白質(zhì) Rf 值分別為 和 ，對遷移率為 的蛋白質(zhì)進 SDS— PAGE 可以得到 3 條帶，其 泳距分別是 mm， mm， mm，其對應(yīng)的分子量依次是 34600， 22900，和 17800。 淮 海 工 學(xué) 院 畢業(yè)設(shè)計 (論文 )說明書 題 目： 鹽藻胞外蛋白質(zhì)的特性分析 作 者： 曹 宇 學(xué) 號： 5203102201 系 (院 )： 海洋學(xué)院 專業(yè)班級 ： 生物技術(shù) 生技 032 指導(dǎo)者： 郭金耀 教授 評閱者： 秦 蕾 副 教授 2