【正文】 專業(yè)班級 ： 生物技術 生技 032 指導者： 郭金耀 教授 評閱者： 秦 蕾 副 教授 2020 年 6 月 連 云 港 畢業(yè)設計（論文）中文摘要 鹽藻胞外蛋白質(zhì)的特性分析 摘 要： 本研究以 鹽藻為研究對象 ，通過蛋白質(zhì)丙酮沉淀，薄板層析， SDS— PAGE 等生物化學技術對 鹽藻 胞外蛋白質(zhì)的特性進行分析。 關鍵詞： 鹽藻 蛋白質(zhì) 薄板層析 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 分子量 畢業(yè)設計（論文）外文摘要 The characteristic analysis of Excellular protein from the DunalieUa Salin Abstract: The research takes the DunalieUa Salina as the research object, through acetone, the thin steel plate chromatographic analysis, SDS— PAGE and other biochemistry technology to carriey on the analysis of Excellular protein of the DunalieUa Salina. Using tests Coomassie Brilliant Blue G250 to determine the extinction value under 595 nm, obtains content of the excellular protein of the DunalieUa Salina is , may see the excellular protein of the DunalieUa Salina through the thin— layer chromatograph analysis the protein to have two big albuminoid substance Rf value respectively is and . protein enters SDS— PAGE to the transport ratio to be allowed to obtain three belts,the distance of the three belts is mm， mm， mm respectively,from which we can obtain the molecular weights,they are 34600， 22900， and 17800 accordingly. Keywords: DunalieUa Salina； protein； thin— layer chromatograph； SDS— PAGE； molecular weight 目 錄 1 引言………………………………………………………………………………… 1 鹽生杜氏藻的特性 …………………………………… …………… ………………… 1 鹽藻的研究現(xiàn)狀 ………………………………………………… …………………… 2 鹽藻蛋白質(zhì) ………………………………………………………………………………… 2 本試驗研究意義及前景 ………………………………………………… ……………… 3 2 材料與方法 …………………………………………………………………………………… 4 實驗 材料 ………………………………………………………………………… ……… … 4 實驗 方法 …………………………………………………………………… …………… … 5 3 結(jié)果與分析 …………………………………………………………………………… … … 11 鹽藻胞外蛋白質(zhì)的含量 …………………………………………………………… … 11 鹽藻胞外蛋白質(zhì)的 Rf 值 …………………………………………………………… … 11 鹽藻胞外蛋白質(zhì) 的 分子量 …… …………………………………………………… 11 4 討論 …… ……………………………………………………………………………………… 12 結(jié)論 ……………………………………………………… …………………………………… 13 致謝 …………………………………………………………………………………………… 14 參考文獻 … …………………………………………………………………………………… 15 淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設計（論文） 第 1 頁 共 16 頁 1 引言 鹽生杜氏藻的特性 杜氏藻的形態(tài)結(jié)構(gòu)特點 杜氏藻 (DunalieUa Salina)屬于綠藻綱，團藻目，杜氏藻屬，已記錄了 29 個種和一些變種。它們結(jié)構(gòu)上的顯著特點是沒有堅硬的細胞壁，細胞由有彈性的多糖蛋白復合物型細胞膜包裹，表面有粘性覆蓋層。 杜氏藻的繁殖有營養(yǎng)繁殖和有性生殖兩種，營養(yǎng)繁殖為縱裂，在一定條件下可形成有厚粘膠層的膠群體，偶爾也形成孢囊 (不 動孢子 )，當環(huán)境不利時或急劇變化時，例如培養(yǎng)時迅速稀釋或干燥時，通常會形成不動孢子。也有廣鹽性種類例如 D. tertiolecta， D. bioculata， D. primolecta， 還有生存于超鹽環(huán)境如鹽湖、鹽田中的種類如 D. salina， D. minuta， D. parva， D. viridis 等。當外界鹽濃度化，它們通過合成甘油來調(diào)節(jié)其滲透壓變化。特別是當鹽度 于 20%時，它們是最重要的原初生產(chǎn)者。 杜氏藻的細胞成分 杜氏藻商業(yè)生產(chǎn)的主要產(chǎn)品是類胡蘿卜素，作為副產(chǎn)品的有甘油和蛋白質(zhì)等。杜氏藻的碳水化合物有半乳糖、葡萄糖、甘露糖、核糖、木糖、鼠李糖和多糖等。但是化學合成的β — 胡蘿卜素不可避免地帶有副產(chǎn)物。 篩選出的 β — 胡蘿卜素 高產(chǎn)品系在高溫、高鹽、強光照和缺氮的條件下， 累積的 β — 胡蘿卜素占千重的 10%以上，有報道最高可達14％，而在一般的生物體中僅占千重的 ％左右。其順、反結(jié)構(gòu)的比例就已確定， 即先形成異構(gòu)體雛形。并脫氫形成雙鍵，這是異構(gòu)化的關鍵。β — 胡蘿卜素的合成與一些植物生長調(diào)節(jié)劑相關。 有關鹽藻 DNA 的研究也很多。 鹽藻蛋白質(zhì) 淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設計（論文） 第 3 頁 共 16 頁 藻類的粗蛋白含量超過 60%,生物學產(chǎn)量高于任何作物。若長期食用還需考慮其核酸水平 ,每日攝食的微藻數(shù)量不應超過 20g。微藻用于非芻動物飼料時也必須先經(jīng)過加工 ,破壞細胞壁后再加以利用 ， 杜氏 鹽 藻 相對與其它 微藻 的最大特點就是無 細胞壁。存在于杜氏藻中的二羥基丙酮還原酶已被分離、純化和商業(yè)銷售。 鹽藻內(nèi)蛋白質(zhì)中氨基酸的比例，基本符臺聯(lián)合國糧農(nóng)組織 FAO 營養(yǎng)全面食品的標準，即必需氨 基酸與總 氨 基酸的比例在 40% 至 60% 。今后研究的重 點應集中在以下幾個方面：①應大量選育優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)量、含生物活性物質(zhì)的品種，利用生物工程技術加快培育品種的步伐，大力發(fā)展飼用海藻生產(chǎn)。如何進行科學配伍也是一個難題，在生產(chǎn)中要有針對性地科學 選擇海藻種類進行合理的配伍，才能發(fā)揮其特殊功效，達到安全高效 [8]。 標準蛋白曲線的制作 用電子天平準確稱取標準牛血清白蛋白 20mg，放入燒杯中，用蒸餾水溶解后倒入 100mL容量瓶中，并用蒸餾水定容至 100mL 刻度處，即制成標準蛋白溶液，濃度為 。光照與黑暗的比為 12h： 12h。 (3)將取得的藻液離心（ 4000r/min,20min）。 （ 5）利用 紫外可見光光度計 在 A595nm 下測得 1， 2， 3 組的吸光值，在標準曲線上找出相應的點，并求出鹽藻胞外蛋白質(zhì)的濃度。 （ 7） 2h 后，從冰箱中取出燒杯。待羧甲基纖維素鈉充分溶解后，再加入 14g 硅膠 G 粉，最后加入 25mL 蒸餾水，用玻璃棒攪拌均勻，直至糊狀。 由于后面的電泳實驗需要對薄板上分離的蛋白質(zhì)做定性分析，因此薄板的厚度要做的盡量厚一些，約 ～ 1mm。 （ 8）配制層析液：按照正丁醇：冰醋酸：蒸餾水 4