【正文】 ： 1： 1 的比例依次向燒杯加入正丁醇 20ml, 冰醋酸 5ml, 蒸餾水 5ml，攪拌均勻，并倒入層析缸中。 （ 10） 將點(diǎn)樣后的薄層板，置于裝有展開劑的展層缸中，每只缸裝兩塊薄層板，傾角15 度，嚴(yán)密封口，進(jìn)行展開。 （ 12）將顯色劑茚三 酮置于玻璃噴霧器中，均勻噴在展開后的層析板上。 （ 14）用刀片將紫紅色的斑點(diǎn)取下，置于試管中，加入 1mL 蒸餾水，搖勻，用離心機(jī)離心（ 4000r/min,10min） ,取上清液，保存與 EP 管中，待用。 （ 3）配制 10%AP（ W/V）： 用電子天平 稱 取 AP1g 置于燒杯中 ，加重蒸水至 10mL，攪拌均勻 。先配制 L1TrisHCl 加重蒸水至最后總 體積為 100mg 2mg 4g 2ml 10ml （ 5） 配制 30%分離膠貯液： 用電子天 平 稱 取 丙烯酰胺 （ Acr） 30g 和 N, N’亞甲雙丙烯酰胺 (Bis)， 置于燒杯中，加入適量 重蒸水 溶解 ， 用玻璃棒引流至 100 ml 的容量瓶中， 最后定容至 100ml，過濾后置 于 棕色試劑瓶中， 4℃ 貯存 ，待用。L1 HCl 48mL，調(diào) 節(jié) pH至 ， 用玻璃棒引流至 100 mL 的容量瓶中， 最后加重蒸水定容至 100mL， 4℃貯存 ，待用。 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 第 9 頁 共 16 頁 （ 9） 配制電極緩沖液（內(nèi)含 %SDS， （ 11） 配制 脫色液： 冰乙酸 75mL， 乙 醇 50mL，加重蒸 水定容至 1000mL。沿長(zhǎng)玻璃板壁緩緩注入，約 3~4mm高，以進(jìn)行水封。 （ 16）加樣： 用微量 注射器取樣 10μ L，加入樣品槽 5， 6， 7， 8中，同時(shí)在 4號(hào)槽中加入10μ L的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子量如表 7。 取出凝膠板，用蒸餾水沖洗數(shù)次，再用脫色液浸泡， 換脫色液 3 次， 大約 24h，直至蛋白條帶清晰。根據(jù)繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得出鹽藻胞外蛋白質(zhì)含量為 。 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 第 11 頁 共 16 頁 表 9 鹽藻胞外蛋白質(zhì) 的 Rf 值 X1(cm) X2(cm) Y(cm) Rf1 值 Rf2 值 圖 2 鹽藻胞外蛋白質(zhì) 的 薄板層析圖 鹽藻胞外蛋白質(zhì)分子量 圖 3顯示的是電泳的結(jié)果，圖 4是根據(jù)圖 3提供的數(shù)據(jù)畫出的標(biāo)準(zhǔn)樣的 lgM — d曲線 圖。 圖 圖 3 鹽藻胞外蛋白質(zhì)的 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳圖 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 第 12 頁 共 16 頁 450 10 20 30 40d(mm)lgM 圖 4 標(biāo)準(zhǔn) 蛋白 分子量 lgM— d曲線圖 4 討論 近年來，鹽藻的研究多在于提取β — 胡蘿卜素方面，在鹽藻蛋白質(zhì)方面研究的比較少，尤是其胞外蛋白質(zhì)。我所做的一類胞外蛋白的分子量為 34 600， 22 900，和 17 800與其中一類細(xì)胞蛋白分子量 23 933， 17 954（同組實(shí)驗(yàn)胡夢(mèng)嬌同學(xué) 所做 ）相比 ，分子量非常接近，尤其是 17 800與 17 954，據(jù)此我們可以推測(cè)，這兩種分別取自胞內(nèi)和胞外的蛋白質(zhì)可能是同一種蛋白質(zhì)，這一種蛋白質(zhì)由細(xì)胞產(chǎn)生，但是也可以由細(xì)胞內(nèi)分泌到細(xì)胞外。 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 第 13 頁 共 16 頁 結(jié) 論 本實(shí)驗(yàn) 以鹽藻為研究對(duì)象， 利用考馬斯亮藍(lán) G— 250 染色法 在 595 nm 下 測(cè) 吸光值， 得到 鹽藻 胞外蛋白質(zhì)的含量為 。為了使我盡早進(jìn)入狀態(tài)，郭老師提供了大量的資料，從而使我對(duì) 實(shí)驗(yàn) 目的、 實(shí)驗(yàn) 步驟有了更加深入、更加全面的了解，從宏觀上有了認(rèn)識(shí)。 在 實(shí)驗(yàn) 的進(jìn)行的全過程中，還得到了楊曉玲老師的悉心指導(dǎo)和熱情幫助，在此表示感謝。 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 第 15 頁 共 16 頁 參 考 文 獻(xiàn) [1] 柴玉榮 ， 王天云 ， 薛樂勛 ． 新型生物反應(yīng)器 — 杜氏鹽藻研究進(jìn)展 .中國(guó)生物工程雜志 .2020， 24（ 2）： 3033． [2] 杜氏藻市場(chǎng)調(diào)研報(bào)告． :/ /. [3] 陸超華 ， 謝文造 ． 利用鹽藻開發(fā)功能食品的前景 .廣州食品工業(yè)科技 .1995, 11（ 4） : 1417 [4] 孫福璋 ,賈磊 ,賀君．海洋天然色素 — 胡蘿卜素提取及杜氏藻中有關(guān)營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定海洋科學(xué)． 1991， 1 (4) ： 13． [5] 李建武，余瑞元，袁明修等 ． 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)原理和方法 . 北京：北京 大學(xué)出版社 .1994,216— 222． [6] 吳學(xué)軍 ,謝能詠，劉勇 ． 薄層層析法分離六種氨基酸 ． 江漢大學(xué)學(xué)報(bào) .1999， 16（ 3）： 13． [7] 李娟 ,張耀庭 ,曾偉等 ． 利用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定 總蛋白含量 ． 中國(guó)生物制品學(xué)雜志 ． 2020,13(2)118120． [8] 常巧玲 ,孫建義 ． 海藻飼料資源及其在水產(chǎn)養(yǎng)殖中 的應(yīng)用 ． 飼料工業(yè) ． 2020,27（ 2） 6264． [9] 郭金耀 ,楊曉玲 ． 營(yíng)養(yǎng)方式對(duì)鹽藻生長(zhǎng)與物質(zhì)積累的影響 .江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué) .2020,(1) ：138140． [10] 劉艷，楊海波 ． 對(duì)小球藻蛋白質(zhì)的提取及分離的研究 .大連大學(xué)學(xué)報(bào) .2020， 23（ 4）：14． [11] 陸正清 ． 薄層層析法測(cè)定調(diào)味品中氨基酸含量綜述 .中國(guó)調(diào)味品 .2020， 7(6):13． [12] 潘俊敏 ,張憲孔 ． 藻類葉綠素和類胡蘿素的快速薄板層析法 .植物生理學(xué)通訊 .1990， (3)：51— 53． [13] 陸健等 ． 蛋白質(zhì)純化技術(shù)及應(yīng)用 . 北京 ：化學(xué)工業(yè)出版社 .2020,26— 25． [14] 楊雪梅 ,吳超元 ． 鹽藻的研究與開發(fā) ,生命科學(xué) ． 1994,6（ 9）： 79． [15] 郭堯君 .蛋白質(zhì)電泳實(shí)驗(yàn)技術(shù) . 北京： 科學(xué) 出版社 . 1999， 123138． [16] 吳斗思 ,盧淑琴 ,吳獻(xiàn)役 ． 用 SDS 凝膠電泳法測(cè)定水解絲蛋白的分子量 .天津紡織工學(xué)院學(xué)報(bào) .1996,15(4)： 2526． [17] 陳思學(xué) ,李琳 ,焦新之 ． 滲透震擾對(duì)杜氏鹽藻細(xì)胞蛋白質(zhì)磷酸化的影響 . 植物學(xué)報(bào) ． 1998, 2(2)： 15 [18] 方紹慶 ， 魯閩 ， 陳克衛(wèi) ． SDS 一聚丙烯酰胺凝膠電泳法鑒定動(dòng)物肌肉蛋白熱變性的研究 .現(xiàn)代食品科技 .2020， 22（ 3）： 2109— 220． [19 ] 夏冰芝 ， 俞詩(shī)源 ， 嚴(yán) 峰 等 ．蟾蜍和麻蜥肝臟及肺組織中低分子蛋 白的 SDS— PAGE比較分析 .西安師范大學(xué)學(xué)報(bào) . 2020， 42（ 6） ： 65— 67． [20] 汪家政 , 范明．蛋白質(zhì)技術(shù)手冊(cè)． 北京：科學(xué)出版社． 2020， 05— 107． [21] 胡軼紅，吉愛玲，徐存拴．大鼠八種器官的蛋白質(zhì)圖譜分析．河南科學(xué) ． 2020， 18(1)：59— 62． 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 第 16 頁 共 16 頁 [22] 鹿海林，房興堂 ． 值得重視的飼料資源 — 海藻蛋白質(zhì)飼料 ． 飼料世界 ． 2020，（ 1）17— 19． [23] Hajimu lshiwata,et a1． Concentration of Carbon Monoxide in Commercial Fish Flesh and in Fish Flesh Exposed to Carbon Monoxide Gas for Color Fixing． Food , 1996， 37 (2)： 83— 90． [24] of Activation Methods for OrganozicReagents Tetrahedron, 1987,(10):2203．