【正文】 可觀察到卵形、球形、圓柱形、橢圓形、梨形、紡錘形等。杜氏藻形態(tài)上類似于衣藻，為單細(xì)胞綠藻，通常為卵形，長(zhǎng) 不過(guò) 6～ 15μ m，寬只有 4～ 10μ m，具有 2 根 等長(zhǎng)鞭毛，可運(yùn)動(dòng) 。 利用考馬斯亮藍(lán) G— 250 染色法 在 595nm下測(cè)定吸光值， 得到 鹽藻 胞外蛋白質(zhì)的含量為 。蛋白質(zhì)丙酮沉淀后，通過(guò)薄板層析可以看出 鹽藻 胞外蛋白有兩大類蛋白質(zhì) Rf 值分別為 和 ，對(duì)遷移率為 的蛋白質(zhì)進(jìn) SDS— PAGE 可以得到 3 條帶，其 泳距分別是 mm， mm， mm，其對(duì)應(yīng)的分子量依次是 34600， 22900，和 17800。細(xì)胞內(nèi)有 1 個(gè)杯狀葉綠體，底基部有 1 個(gè)由多糖顆粒包圍的蛋白核廣多糖 ， 是細(xì)胞的貯藏產(chǎn)物，此外還有核、線粒體、高爾基體、液泡和眼點(diǎn)。當(dāng)環(huán)境不利時(shí)，常變?yōu)榍蛐?[1]。 杜氏藻的分布及生態(tài) 杜氏藻廣泛存在于自然界，既有淡水種類，例如 D. flagellata， D. chordata， D. laleralis，D. paupera。就鹽生杜氏藻 ()而言，能適應(yīng)低鹽水到飽和鹽水 (35%~36%)。杜氏藻中對(duì)于 pH 的耐受性也有明顯不同，有耐受強(qiáng)酸性環(huán)境的種類，例如 D. acidophila， 也有耐 受 強(qiáng)堿性的種類 如 D． salina， 一般來(lái)說(shuō)海生的杜氏藻并不是海洋浮游植物的主要種類，但在超鹽環(huán)境中，如美國(guó)的大鹽湖、以色列的死海、澳大利亞的賓克湖中，紅色的 D. salina， 粉紅色的 D. parva， 綠色的 D. viridis 常常是優(yōu)勢(shì)種。當(dāng)高鹽度和高光強(qiáng)時(shí) ， D. parva 向水體底部移動(dòng)，而 D. salina 還保持懸浮，這是 D. salina 光合作用光飽和點(diǎn)高之故。 表 1 鹽藻的營(yíng)養(yǎng)成分 成分 蛋白質(zhì) 脂肪 總碳水化 合物 β — 胡蘿卜素 維生素 C 鈣 磷 含量（ %） 杜氏藻含有多種維生素，例如硫胺素、 吡哆醇、核黃素、菸酸，特別是生物素和 α 生育酚的含量較高。 Wackenrode 在 1831 年揭示了β — 胡蘿卜素的存在，化學(xué)家于 1931 年弄清了它的化學(xué)結(jié)構(gòu)，并 于 1950 年成功地合成了β — 胡蘿卜素。因此，近十幾年來(lái)科學(xué)家努力尋求一種能產(chǎn)生大量 β — 胡蘿卜素 的生物， 同時(shí)希望其中的順式異構(gòu)體越多越好，而鹽藻就是符合這一要求的最佳選擇。以達(dá)草滅， J— 334 和六甲基嘧啶等阻斷β — 胡蘿卜素的生物合成，發(fā)現(xiàn)在β — 胡蘿卜素的前體 — 八氫番茄紅素形成時(shí)。在該酶的催化下，異戊烯焦磷酸轉(zhuǎn)入β — 胡蘿卜素合成中的碳鏈。這方面的工作仍需深入進(jìn)行。外加脫落酸在適當(dāng)?shù)臐舛认拢? 也有這種功效。加以尿素為氮源特別有利于鹽藻合成β — 胡蘿卜素和維生素 C，而不利于維生素 E 的合成 。但微藻細(xì)胞壁難于消化 ,食用后易產(chǎn)生不良副反應(yīng) ,食用前必須進(jìn)行充分的加工處理。已進(jìn)行了以藻蛋白代替魚(yú)粉或大豆蛋白質(zhì)的飼養(yǎng)試驗(yàn) ,有幾個(gè)研究小組曾經(jīng)報(bào)導(dǎo)取得了可喜的成果。除去類胡蘿卜素和甘油后的藻渣中蛋白質(zhì)的含量比例將進(jìn)一步提高，達(dá)到 40%，其蛋白含量和氨基酸組成類似于大豆蛋白。 提取β一胡蘿卜素和甘油后的藻粉，蛋白質(zhì)含量可達(dá) 70％以上（鹽藻含有 l8 種人體所需的氨基酸，其中人體必需的 8 種氨基酸舍量占全氨基酸含量的 %。但目前在國(guó)內(nèi)僅有少數(shù)幾家海藻加工企業(yè)，而主要是生產(chǎn)人類食品、藥品以及提取工業(yè)品，而至今尚無(wú)專門(mén)的海藻蛋白質(zhì)加工企業(yè)，對(duì)海藻蛋白質(zhì)研究正處于剛剛起步的階段。③ 由于海藻中的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)成分和含量差異很大，所以在生產(chǎn)海藻過(guò)程中。 藥品 丙酮 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 考馬斯亮藍(lán) G250 粉末 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白粉末 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 85%磷酸 南京化學(xué)試劑有限公司 硅膠 GF254 中國(guó)雁蕩山試劑廠 羧甲基纖維素鈉 北京化學(xué)試劑有限公司 無(wú)水乙醇 天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司 分析純 AR 鹽酸 南京化學(xué)試劑一廠 正丁醇， 南京化學(xué)試劑一廠 冰醋酸 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 水合茚三酮 中國(guó)醫(yī)藥公司 十二烷基磺酸鈉 (SDS) 北京中聯(lián)化工試劑廠 重蒸水 實(shí)驗(yàn)室自制 過(guò)硫酸銨（ AP） AMRESCO 淮海工學(xué)院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 第 5 頁(yè) 共 16 頁(yè) 四甲基乙二胺（ TEMED） 巰基乙醇 溴酚藍(lán) 蔗糖 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 丙烯酰胺 （ Acr） N, N’亞甲雙丙烯酰胺 (Bis) AMRESCO 三羥甲基氨基甲烷（ Tris） 考馬斯亮藍(lán) R250 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司 甘氨酸 ProteinMarker Mid Range Bio Basic Inc. 儀器 UV754 紫外可見(jiàn)光光度計(jì) 山東高密彩虹分析儀器有限公司 YP2020N 電子天平 上?？茖W(xué)精密有限公司 78— 1 加熱磁力攪拌器 常州國(guó)華電器有限公司 日立 CR22G 冷凍高速離心機(jī) 日本 HITACHI 公司 電熱恒溫干燥箱 連云港醫(yī)療器械設(shè)備廠 DYY— 2C 穩(wěn)流穩(wěn)壓電泳儀 南京 高新技術(shù)校園生物技術(shù)所 夾心式垂直板電泳槽 北京六一廠 微量注射器 上海安亭微量進(jìn)樣廠 LD52A 低速離心機(jī) 北京醫(yī)用離心機(jī)廠 SZ93 自動(dòng)雙重純水蒸餾器 上海亞榮生化儀器廠 SHZD（Ⅲ ）循環(huán)水式真空泵 鞏義市英峪予華儀器廠 DYB2 脫色搖床 江蘇省興化市分析儀器廠 PHS— 2F PH 計(jì) 上海精密科學(xué)儀器有限公司 ZGX— 300C 智能光照培養(yǎng)箱 杭州錢(qián)塘江設(shè)備有限公司制造 實(shí)驗(yàn) 方法 考馬斯亮藍(lán) G250 染色液制備 稱取 100mg 考馬斯 亮藍(lán) G250 粉末，溶于 50mL 95％乙醇中，加入 85％（ W／ V）的磷酸 100mL，最后用蒸餾水定容到 1 000mL， 裝入試劑瓶中，此溶液在常溫下可放置一個(gè)月 [7]。培養(yǎng)溫 度白天為 25℃，夜間 20℃。 [9] (2)取六只三角燒瓶里培養(yǎng)的鹽藻倒入 1000 mL 的量筒中，量取 1000mL。取干凈的具塞試管 4 支，按表 4 編號(hào)后，依次加入各種物質(zhì)。然后將燒杯置于冰箱下層，沉淀蛋白質(zhì) [12]。 （ 2）電子天平稱取 羧甲基纖維素鈉，放入 100mL 燒杯中，加入 25mL 蒸餾水，利用加熱磁力攪拌器攪拌均勻。 注意： 不能單用 硅膠 G 粉做支持物，否則風(fēng)干后的硅膠板易破碎。 （ 7）配制樣品溶液：從試管中量取 5mL 蛋白質(zhì)溶液置于另一干凈的試管中，依次加入1ml95%的乙醇， 1 滴 6M 的 HCL，晃動(dòng)均勻。 注意：每次所劃的樣不宜太多，要適宜均勻。 （ 11） 配 制 ％茚三酮 丙酮溶液：用電子天平稱取 水合 茚三酮 ，置于小燒杯中，然后向燒杯中加入 50mL 丙酮，用玻璃棒攪拌均勻。遷移率 Rf=斑點(diǎn)中心與原點(diǎn)之間的距離記 /原點(diǎn)與溶劑前緣之間的距離。 （ 2） 配制 1%TEMED（ V/V）： 用移液槍取 1mLTEMED 注入燒杯中 ，加重蒸水至 100mL，攪拌均勻， 置 于 棕色瓶中， 4℃ 貯存 ，待用 。L 1 TrisHCl 緩沖液。 表 5 不連續(xù)體系樣品溶解液配制 SDS 巰基乙 醇 溴酚藍(lán) 蔗糖 L1 TrisHCl 緩沖液）： 用電子天平 稱 取三羥甲基氨基甲烷（ Tris） ， 置于燒杯中， 加少許重蒸水使其溶解，再加 1molL1 HCl 48mL調(diào) 節(jié) pH 至 ，用玻璃棒引流至 100mL 的容量瓶中， 最后用重蒸水定容至 100mL， 4℃貯存 ，待用。 （ 10） 配制 ： 稱考馬斯亮藍(lán) R250 ， 加35%的乙醇 454mL,46mL 冰乙酸混勻， 過(guò)濾后 待 用。 (13)按表 6 配制 10ml %的分離膠，混勻后，用細(xì)長(zhǎng)頭的滴管將凝膠液加至長(zhǎng)短玻璃板間的縫內(nèi)，約 4cm 高，用注射器取少許重蒸水。 表 6 SDS— 不連續(xù)體系凝膠配制 試劑名稱 配制 %分離膠所需 試劑