【正文】 ℃ 貯存 ，待用 。 表 5 不連續(xù)體系樣品溶解液配制 SDS 巰基乙 醇 溴酚藍 蔗糖 L1 HCl 48mL調(diào) 節(jié) pH 至 ，用玻璃棒引流至 100mL 的容量瓶中， 最后用重蒸水定容至 100mL， 4℃貯存 ，待用。 (13)按表 6 配制 10ml %的分離膠，混勻后，用細長頭的滴管將凝膠液加至長短玻璃板間的縫內(nèi)，約 4cm 高，用注射器取少許重蒸水。 （ 18）卸下橡膠框，取下凝膠板，記下染料在分離膠的遷移距離記做 Y，并在凝膠板切下一角做為標記，將凝膠板置于大培養(yǎng)皿中，并向培養(yǎng)皿中加入染色液 ,將培養(yǎng)皿置于脫色搖床上，染色 1h， 回收 染色液 。 實驗表明，在薄層層析中， 層析效果 與制板的規(guī)格及程序、樣品的點樣量及毛細管內(nèi)徑、點樣量勻稱與 否有關(guān)，與展 層板 、展開方式也有一定的影響，應(yīng)是薄層層析分析中嚴格控制的條件 。在對 Rf值 為 的蛋白質(zhì)進行 SDS— 聚丙烯凝膠電泳和測定分子量時，發(fā)現(xiàn)所測得的三個分子量值與鹽藻胞內(nèi)分子量有一定的接近 [17]?；仡?實驗 的全過程， 在選題、準備、收集和做論文的整個過程中都得到 郭 老師的悉心指導。并對余成元學弟在實驗過程的幫助表示感謝。為 了 實驗 的順利進行 郭老師 給予了莫大的幫助。這方面的資料比較少，還需要我們在以后的學習和研究中進一步了解 。凝膠的厚度是 1mm，濃縮膠的電流是 10mA，分離膠的電流是 30mA，全程電泳時間為3h30min 。 （ 19） 根據(jù)蛋白質(zhì)在電泳當中其分子量的對數(shù)值 (1gM)與其相對遷移距率 (mm)呈比例關(guān)系的原理 [15] [19] [20]，利用已知分子量蛋白質(zhì) (標準分子量蛋白 )在膠板上的遷移距離 ， 以分子量對遷移 距 率作圖，制得標準曲線 ，再根據(jù)未知蛋白質(zhì)的遷移 距 率，從標準曲線上測定其分子量 。約 20min 后，凝膠與水封層間出現(xiàn)折射率不同的界線，則表示凝膠完全聚合，傾去水封層的重蒸水，在用濾紙條吸去多余的水分。L1 Tris— mol （ 6） 配制 10%濃縮膠貯液： 用電子天平 稱 取 丙烯酰胺 （ Acr） 10g 和 N, N’亞甲雙丙烯酰胺 (Bis)， 置于燒杯中 ， 加入適量 重蒸水 溶解，用玻璃棒引流至 100 mL 的容量瓶中， 最后定容至 100mL，過濾后置 于 棕色試劑瓶中， 4℃ 貯存 ，待用。最好臨用前配制。用吹風機將淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 8 頁 共 16 頁 薄層板吹干后，將薄層板置于 105℃的烘箱中約 20 分鐘，薄層板上出現(xiàn)紫紅色的斑點。 （ 9）從干燥器中取出 4 塊薄層層析板， 在薄層層析板下端距底邊 處用解剖針輕輕劃出一條線作為起始線 。 （ 3）將糊狀硅膠 G 粉注在玻璃板的一端，輕輕左右搖動，再上下擺動，并輕輕敲打左右兩端及底部，至上下左右均己均勻后，放在干凈、通風的水平工作臺上，自然干燥，即制成薄層層析板。 （ 6）從三角燒瓶中取得 200 mL 鹽藻上清液，置于燒杯中。白天光照強度 35001x。 本實驗以鹽藻為 研究對象，研究其胞外的蛋白質(zhì)，通過對其的研究可以進一步認 識海藻蛋白質(zhì)的特性和作用。鹽藻的蛋白質(zhì)含量和 氨 基酸組成表明，鹽藻是營養(yǎng)食品的蛋白新資源，是高蛋白仿生高級營養(yǎng)制品的理想原料。 杜氏 鹽 藻的綠色細胞通常含 50%~60%的蛋白質(zhì) (干重 )，而生 長在高鹽、氮不足的紅色細胞中約含 30%。因此早在 1949 年 ,Spoehr 和Milner 就建議利用藻類蛋白質(zhì)解決全球性蛋白短缺問題 ,但這方面的研究為數(shù)不多 ,并且大多是在 1970 年以前進行的。如高鹽能刺激鹽藻細胞內(nèi)脫落酸的合成。再合成β — 胡蘿卜素。其中有些甚至對人體有害，遠不能滿足人類的要求。根據(jù)對鹽生杜氏藻 營養(yǎng) 成分 （ 表 1） [3]分析表明，除了含 % β — 胡蘿卜素外，甘油的含量占淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 2 頁 共 16 頁 30%，蛋白質(zhì)的含量也約占 %。細胞內(nèi)甘油含量與細胞外鹽濃度是呈正相關(guān)的。有性生殖類似于衣藻的同配接合生殖。有人建議將它們列為杜氏藻目，杜氏藻科。 關(guān)鍵詞： 鹽藻 蛋白質(zhì) 薄板層析 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 分子量 畢業(yè)設(shè)計（論文）外文摘要 The characteristic analysis of Excellular protein from the DunalieUa Salin Abstract: The research takes the DunalieUa Salina as the research object, through acetone, the thin steel plate chromatographic analysis, SDS— PAGE and other biochemistry technology to carriey on the analysis of Excellular protein of the DunalieUa Salina. Using tests Coomassie Brilliant Blue G250 to determine the extinction value under 595 nm, obtains content of the excellular protein of the DunalieUa Salina is , may see the excellular protein of the DunalieUa Salina through the thin— layer chromatograph analysis the protein to have two big albuminoid substance Rf value respectively is and . protein enters SDS— PAGE to the transport ratio to be allowed to obtain three belts,the distance of the three belts is mm， mm， mm respectively,from which we can obtain the molecular weights,they are 34600， 22900， and 17800 accordingly. Keywords: DunalieUa Salina； protein； thin— layer chromatograph； SDS— PAGE； molecular weight 目 錄 1 引言………………………………………………………………………………… 1 鹽生杜氏藻的特性 …………………………………… …………… ………………… 1 鹽藻的研究現(xiàn)狀 ………………………………………………… …………………… 2 鹽藻蛋白質(zhì) ………………………………………………………………………………… 2 本試驗研究意義及前景 ………………………………………………… ……………… 3 2 材料與方法 …………………………………………………………………………………… 4 實驗 材料 ………………………………………………………………………… ……… … 4 實驗 方法 …………………………………………………………………… …………… … 5 3 結(jié)果與分析 …………………………………………………………………………… … … 11 鹽藻胞外蛋白質(zhì)的含量 …………………………………………………………… … 11 鹽藻胞外蛋白質(zhì)的 Rf 值 …………………………………………………………… … 11 鹽藻胞外蛋白質(zhì) 的 分子量 …… …………………………………………………… 11 4 討論 …… ……………………………………………………………………………………… 12 結(jié)論 ……………………………………………………… …………………………………… 13 致謝 …………………………………………………………………………………………… 14 參考文獻 … …………………………………………………………………………………… 15 淮海工學院二○○六屆畢業(yè)設(shè)計（論文） 第 1