實(shí)驗(yàn)二蛋白質(zhì)的顏色反應(yīng)及蛋白質(zhì)含量測(cè)定-資料下載頁(yè)
2025-05-13 22:03本頁(yè)面
【正文】 4 4 4 4 4 蛋白質(zhì)濃度 (?g/mL) 0 10 20 30 40 50 ？ ？ A595nm 搖勻， 1 h內(nèi)以 0號(hào)試管為空白對(duì)照，在 595nm處比色 OD595nm 以 OD595nm為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量為橫坐標(biāo)，在 Excell上繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 根據(jù)所測(cè)樣品提取液吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)的蛋白質(zhì)含量（ μg ），按下式計(jì)算： )( (m l ) g / m l )()g / g( g樣品鮮重 提取液總體積查得的蛋白質(zhì)含量鮮重樣品蛋白質(zhì)含量 ?? ??雙縮脲法測(cè)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 取 14支試管，分兩組按下表平行操作。 試管編號(hào) 0 1 2 3 4 5 6 7 標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液 2 (mL) 0 樣液 2 3mL 卵清蛋白3ml 蒸餾水（ mL） 0 0 雙縮脲試劑 (mL) 2 2 2 2 2 2 2 2 蛋白質(zhì)濃度 (mg/mL) 0 ？ ？ A595nm 充分混勻后，顯色后 30min內(nèi)測(cè)定 A540，否則會(huì)有 CuO2形成。 討論 現(xiàn)象 解釋現(xiàn)象 雙縮脲反應(yīng)尿素 雙縮脲反應(yīng)卵清蛋白 茚三酮反應(yīng) 黃色反應(yīng) 反應(yīng)現(xiàn)象 考馬斯亮藍(lán)法與雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線與樣液濃度 計(jì)算雞蛋清的蛋白質(zhì)含量 兩種測(cè)定方法的優(yōu)缺點(diǎn) 其它測(cè)定蛋白質(zhì)含量的方法的原理與優(yōu)缺點(diǎn) 注意事項(xiàng) （ 1） 如果測(cè)定要求很嚴(yán)格 ， 可以在試劑加入后的 520 min內(nèi)測(cè)定光吸收 ， 因?yàn)樵龠@段時(shí)間內(nèi)顏色最穩(wěn)定 。 （ 2） 考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定中 ， 蛋白 染料復(fù)合物會(huì)有少部分吸附于比色杯壁上 ， 但此復(fù)合物的吸附量可以忽略 。 測(cè)定完后可用乙醇將藍(lán)色的比色杯洗干凈 。 一些陽(yáng)離子如 K+、Na+、 Mg2+等物質(zhì)對(duì)測(cè)定無(wú)影響；而大量的去污劑如 SDS等會(huì)嚴(yán)重干擾測(cè)定；乙醇的存在會(huì)使蛋白質(zhì)沉淀 ， 改變?nèi)玖项伾? （ 3） 雙縮脲法：本實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定范圍 1－ 10mg/mL蛋白質(zhì) 。須于顯色后 30min內(nèi)比色測(cè)定 。 30min后 ， 可有霧狀沉淀發(fā)生 。 各管由顯色到比色的時(shí)間應(yīng)盡可能一致 。 有大量脂肪性物質(zhì)同時(shí)存在時(shí) ， 會(huì)產(chǎn)生渾濁的反應(yīng)混合物 ， 這時(shí)可用乙醇或石油醚使溶液澄清后離心 ， 取上清液再測(cè)定 。 8 作業(yè) ? 預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn) 28
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