實驗二蛋白質的顏色反應及蛋白質含量測定-資料下載頁
2025-05-13 22:03本頁面
【正文】 4 4 4 4 4 蛋白質濃度 (?g/mL) 0 10 20 30 40 50 ？ ？ A595nm 搖勻， 1 h內(nèi)以 0號試管為空白對照，在 595nm處比色 OD595nm 以 OD595nm為縱坐標，標準蛋白含量為橫坐標，在 Excell上繪制標準曲線。 根據(jù)所測樣品提取液吸光值，在標準曲線上查得相應的蛋白質含量（ μg ），按下式計算： )( (m l ) g / m l )()g / g( g樣品鮮重 提取液總體積查得的蛋白質含量鮮重樣品蛋白質含量 ?? ??雙縮脲法測蛋白質標準曲線制作 取 14支試管，分兩組按下表平行操作。 試管編號 0 1 2 3 4 5 6 7 標準蛋白溶液 2 (mL) 0 樣液 2 3mL 卵清蛋白3ml 蒸餾水（ mL） 0 0 雙縮脲試劑 (mL) 2 2 2 2 2 2 2 2 蛋白質濃度 (mg/mL) 0 ？ ？ A595nm 充分混勻后，顯色后 30min內(nèi)測定 A540，否則會有 CuO2形成。 討論 現(xiàn)象 解釋現(xiàn)象 雙縮脲反應尿素 雙縮脲反應卵清蛋白 茚三酮反應 黃色反應 反應現(xiàn)象 考馬斯亮藍法與雙縮脲法測定蛋白質含量的標準曲線與樣液濃度 計算雞蛋清的蛋白質含量 兩種測定方法的優(yōu)缺點 其它測定蛋白質含量的方法的原理與優(yōu)缺點 注意事項 （ 1） 如果測定要求很嚴格 ， 可以在試劑加入后的 520 min內(nèi)測定光吸收 ， 因為再這段時間內(nèi)顏色最穩(wěn)定 。 （ 2） 考馬斯亮藍法測定中 ， 蛋白 染料復合物會有少部分吸附于比色杯壁上 ， 但此復合物的吸附量可以忽略 。 測定完后可用乙醇將藍色的比色杯洗干凈 。 一些陽離子如 K+、Na+、 Mg2+等物質對測定無影響；而大量的去污劑如 SDS等會嚴重干擾測定；乙醇的存在會使蛋白質沉淀 ， 改變?nèi)玖项伾? （ 3） 雙縮脲法：本實驗方法測定范圍 1－ 10mg/mL蛋白質 。須于顯色后 30min內(nèi)比色測定 。 30min后 ， 可有霧狀沉淀發(fā)生 。 各管由顯色到比色的時間應盡可能一致 。 有大量脂肪性物質同時存在時 ， 會產(chǎn)生渾濁的反應混合物 ， 這時可用乙醇或石油醚使溶液澄清后離心 ， 取上清液再測定 。 8 作業(yè) ? 預習實驗 28
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