【導讀】不溶于水而能被乙醚、氯仿、苯等非極性有機溶劑抽提出的化合物，統(tǒng)稱脂類。萜類和甾類及其衍生物：不含脂肪酸，都是異戊二烯的衍生物。能，植物的蠟質可以防止水分的蒸發(fā)。不飽和脂肪酸有順式和反式兩種異物體。但生物體內大多數是順式結構。酰基團能促進膜蛋白與疏水環(huán)境間的相互作用。哺乳動物既可以從食物中獲得大部分脂肪酸，也可以合成飽和脂肪酸和一些單不飽和脂肪酸。但是，哺乳動物不能合成多不飽和脂肪酸，稱為必需脂肪酸?；ㄉ南┧峥捎蓙営退嵩隗w內合成。完全皂化1克油脂所需KOH的毫克數，稱皂化值。用來評估油脂的質量。100克油脂吸收碘的克數。是一大類由許多哺乳動物組織產生的激素類的物質。它們只在產生的器官中起作用，所以稱。為自泌調控分子，而不是激素。碳單位、引入兩個雙鍵。細胞趨向破壞組織。

　　

【正文】 不同亞基 血紅蛋白 α 2β 2 蛋白質一級結構 (序列 )中含有形成高級結構的全部需的信息，一級結構決定高級結構結構及功能。 二、 一級結構的要點 蛋白質主鏈由氨基酸以酰胺鍵連接，多肽的線性結構叫肽鏈，組成肽鏈的氨基酸叫氨基酸殘基。 一級結構要點： ⑴蛋白質中的肽鍵都是由 αNH2和 αCOOH 結合生成的。 ⑵每一種蛋白質都有相同的肽主鏈結構，各種蛋白質間的差異是蛋白質的氨基酸種類、數量及排列順序不同。 ⑶氨基酸的 α NH2和 α COOH 縮合，只有末端及側鏈基團有化學活性。 ⑷每個蛋白質或每個蛋白質的亞基只有一個 α NH2 和 α COOH ⑸分子量大于 5000 的活性肽才能稱為蛋白質。 三、 ．蛋白質一級結構測定 推斷 預測 氨基酸序列（一級結構） → 空間結構 （高級結構） → 功能 （一） 蛋白質測序的一般步驟 祥見 P116 （ 1） 測定蛋白質分子中多肽鏈的數目。 （ 2） 拆分蛋白質分子中的多肽鏈。 （ 3） 測定多肽鏈的氨基酸組成。 （ 4） 斷裂鏈內二硫鍵。 （ 5） 分析多肽鏈的 N 末端和 C 末端。 （ 6） 多肽鏈部分裂解成肽 段。 （ 7） 測定各個肽段的氨基酸順序 （ 8） 確定肽段在多肽鏈中的順序。 （ 9） 確定多肽鏈中二硫鍵的位置。 （二） 蛋白質測序的基本策略 對于一個純蛋白質，理想方法是從 N 端直接測至 C 端，但目前只能測 60 個 N 端氨基酸。 ２９ 直接法（測蛋白質的序列） 兩種以上特異性裂解法 N C A 法裂解 A1 A2 A3 A4 B 法裂解 B1 B2 B3 B4 用兩種不同的裂解方法，產生兩 組切點不同的肽段，分離純化每一個肽段，分離測定兩個肽段的氨基酸序列，拼接成一條完整的肽鏈。 間接法（測核酸序列推斷氨基酸序列） 核酸測序，一次可測 600800bp （三） 測序前的準備工作 蛋白質的純度鑒定 純度要求， 97%以上，且均一，純度鑒定方法。（兩種以上才可靠） ⑴聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)要求一條帶 ⑵ DNS— cl（二甲氨基萘磺酰氯）法測 N 端氨基酸 測定分子量 用于估算氨基酸殘基 n= 方法：凝膠過濾法、沉降系數法 確定亞基種類及數目 多亞基蛋白的亞基間有兩種結合方式： ⑴非共價 鍵結合 8mol/L 尿素， SDS SDSPAGE 測分子量 ⑵二硫鍵結合 過甲酸氧化： — S— S— +HCOOOH → SO3H β巰基乙醇還原： 舉例 :： 血紅蛋白 (α 2β 2) （注意，人的血紅蛋白 α 和β的 N 端相同。） 分子量： M 拆亞基： M1 、 M2 兩條帶 拆二硫鍵： M1 、 M2 兩條帶 110mw ３０ 分子量關 系： M = 2M1 + 2M2 測定氨基酸組成 主要是酸水解，同時輔以堿水解。氨基酸分析儀自動進行。 確定肽鏈中各種 出現(xiàn)的頻率 ,便于選擇裂解方法及試劑。 ① Trp 測定 對二甲基氨基苯甲醛 590nm。 ② Cys 測定 5/一二硫代雙（ — 2— 硝基苯甲酸） DTNB ， 412nm 端基分析 ① N 端分析 DNScl 法：最常用，黃色熒光，靈敏度極高， DNS多肽水解后的 DNS氨基酸不需要提取。 DNFB 法： Sanger 試劑， DNP多肽，酸水解，黃色 DNP氨基酸，有機溶劑（ 乙酸乙酯）抽提分離，紙層析、薄層層析、液相等 PITC 法： Edman 法，逐步切下。無色 PTH氨基酸，有機溶劑抽提，層析。 ② C 端分析 A．肼解法 H2NABCDCOOH 無水肼 NH2NH2 100℃ 510h。 ANHNH2 、 BNHNH2 、 CNHNH2 、 DCOOH 氨基酸的酰肼，用苯甲醛沉淀， C 端在上清中， Gln、 Asn、 Cys、 Arg 不能用 此法。 B．羧肽酶法（ Pro 不能測） 羧肽酶 A：除 Pro、 Arg、 Lys 外的所有 C 端 羧肽酶 B：只水解 Arg、 Lys N H2N? ? ? ? ? Val— Ser— Gly C 圖 P118 羧肽酶法測 C 末端 （四） 肽鏈的部分裂解和肽段的分離純化 化學裂解法 ①溴化氰 — Met— X— 產率 85% ②亞碘?；郊姿? — Trp— X— 產率 70100% ③ NTCB（ 2硝基 5硫氰苯甲酸） — X— Cys— ④羥胺 NH2OH — Asn— Gly— 約 150 個氨基酸出現(xiàn)一次 ３１ 酶法裂解 ①胰蛋白酶 Lys X (X ≠ Pro) Arg—— X ②胰凝乳蛋白酶 Tyr—— X (X ≠ Pro) Trp—— X Phe—— X 胃蛋白酶 Phe(Trp、 Try、 Leu)—— Phe(Trp、 Try、 Leu) ③ Glu 蛋白酶 Glu—— X （ V8蛋白酶） ④ Arg 蛋白酶 Arg—— X ⑤ Lys 蛋白酶 X—— Lys ⑥ Pro 蛋白酶 Pro—— X 肽段的分離純化 ①電泳法 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 根據分子量大小分離 ②離子交換層析法（ DEAE— Cellulose、 DEAE— Sephadex） 根據肽 段的電荷特性分離 ③反相ＨＰＬＣ法 根據肽段的極性分離 ④凝膠過濾 肽段純度鑒定 分離得到的每一個肽段，需分別鑒定純度，常用ＤＮＳ－ c l 法 要求：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ單帶、ＨＰＬＣ單峰、Ｎ端單一。 （五） 肽段的序列測定及肽鏈的拼接 Edman 法 一次水解一個Ｎ端 ３２ （ 1）耦聯(lián) PITC ＋ H２ N— ABCD?? pH8— 9 ， 40℃ PTC—— ABCD?? （ 2）裂解 PTC— ABCD?? TFA 無水三氟乙酸 ATZ— A + H2N— BCD （ 3）轉化 ATZ— A PTH— A 用 GC 或 HPLC 測定 PTHA PTC 肽：苯氨基硫甲酰肽 ATZ：噻唑啉酮苯胺（一氨基酸） PTH：苯乙內酰硫脲（一氨基酸） 耦聯(lián)：得 PTC 肽 一次循環(huán) 裂解： ATZ 轉化： 反應產率 99％ 循環(huán)次數 120 (偶聯(lián)、降 98% 60 解兩步） 90% 40 DNSEdman 法 用 DNS 法測 N 末端，用 Edman 法提供（ n1）肽段。 Ａ－Ｂ－Ｃ－Ｄ－Ｅ肽 圖 有色 Edman 法 熒光基團或有色試劑標記的 PITC 試劑。 用自動序列分析儀測序 儀器原理： Edman 法，可測 60 肽。 1967 液相測序儀 自旋反應器，適于大肽段。 1971 固相測序儀 表面接有丙氨基的微孔玻璃球，可耦連肽段的Ｃ端。 1981 氣相測序儀 用 Polybrene 反應器。 （聚陽離子）四級銨鹽聚合物 液相： 5nmol 2040 肽 97% 氣相： 5pmol 60 肽 98% 肽段拼接成肽鏈 16 肽，Ｎ端 H Ｃ端Ｓ ３３ Ａ法裂解： ONS PS EOVE RLA HOWT Ｂ 法裂解： SEO WTON VERL APS HO 重疊法確定序列： HOWTONSEOVER LAPS （六） 二硫鍵、酰胺及其他修飾基團的確定 二硫鍵的確定（雙向電泳法） 碘乙酰胺封閉 SH 胃蛋白酶酶解蛋白質 第一向電泳 過甲酸氧化 — S— S— 生成 SO3H 第二向電泳 分離出含二硫鍵的兩條短肽，測序 與拼接出的肽鏈比較，定出二硫鍵的位置。 酰胺的確定 Asp –Asn、 GluGln 酶解肽鏈，產生含單個 Asx 或 Glx 的肽，用電泳法確定是 Asp 還是 Asn 舉例： LeuGlxProVal 肽在 pH= 時，電荷量是 Leu+ Pro0 Va l 此肽除 Glx 外，凈電荷為 0，可根據此肽的電泳行為確定是 Glu 或是 Gln。 糖、脂、磷酸基位置的確定 糖類通過 Asn、 Ser 與蛋白質連接， N糖苷 0糖苷 脂類： Ser、 Thr、 Cys 磷酸： Ser、 Thr、 His 經驗性序列： Lys(Arg)SerAsnSer(PO4) ArgThrLeuSer(PO4) Lys(Arg) –AlaSer(PO4) 四、 蛋白質的一級結構與生物功能 （一） 蛋白質的一級結構決定高級結構和功能 蛋白質一級結構舉例： （ 1） 牛胰島素 Sanger 于 1953 年首次完成測序工作。 P128 圖 338 分子量： 5700 dalton 51 個 殘基， A 鏈 21 個殘基， B 鏈 30 個殘基， A 鏈內有一個二硫鍵 Cys 6—Cys 11 ３４ 鏈間有二個二硫鍵 7 — B Cys 7 20—B Cys 19 （ 2）核糖核酸酶（ RNase） P128 圖 339 分子量： 12600 124 個 殘基 4 個鏈內二硫鍵。 牛胰 RNase 變性一復性實驗： P164 圖 369。 (8M 尿素 +β硫基乙醇 )變性、失活→透析，透析后構象恢復， 活性恢復 95%以上，而二硫鍵正確復性的概率是 1/105。 （ 3）人血紅蛋白α和β鏈及肌紅蛋白的一級結構 P129 圖 340 （二） 同源蛋白質一級結構的種屬差異與生物進化 同源蛋白質： 在不同的生物體內具有同一功能的蛋白質。如：血紅蛋白在不同的脊椎動物中都具有輸送氧氣的功能，細胞色素在所有的生物中都是電子傳遞鏈的組分。 同源蛋白質的特點： ①多肽鏈長度相同或相近 ②同源蛋白質的 氨基酸順序中有許多位置的氨基酸對所有種屬來說都是相同的，稱不變殘基，不變殘基高度保守，是必需的。 ③除不變殘基以外，其它位置的氨基酸對不同的種屬有很大變化，稱可變殘基，可變殘基中，個別氨基酸的變化不影響蛋白質的功能。 通過比較同源蛋白質的氨基酸序列的差異可以研究不同物種間的親源關系和進化，親源關系越遠，同源蛋白的氨基酸順序差異就越大。 細胞色素 C 存在于線粒體膜內，在真核細胞的生物氧