【導(dǎo)讀】不溶于水而能被乙醚、氯仿、苯等非極性有機(jī)溶劑抽提出的化合物，統(tǒng)稱脂類。萜類和甾類及其衍生物：不含脂肪酸，都是異戊二烯的衍生物。能，植物的蠟質(zhì)可以防止水分的蒸發(fā)。不飽和脂肪酸有順式和反式兩種異物體。但生物體內(nèi)大多數(shù)是順式結(jié)構(gòu)。酰基團(tuán)能促進(jìn)膜蛋白與疏水環(huán)境間的相互作用。哺乳動(dòng)物既可以從食物中獲得大部分脂肪酸，也可以合成飽和脂肪酸和一些單不飽和脂肪酸。但是，哺乳動(dòng)物不能合成多不飽和脂肪酸，稱為必需脂肪酸。花生四烯酸可由亞油酸在體內(nèi)合成。完全皂化1克油脂所需KOH的毫克數(shù)，稱皂化值。用來評(píng)估油脂的質(zhì)量。100克油脂吸收碘的克數(shù)。是一大類由許多哺乳動(dòng)物組織產(chǎn)生的激素類的物質(zhì)。它們只在產(chǎn)生的器官中起作用，所以稱。為自泌調(diào)控分子，而不是激素。碳單位、引入兩個(gè)雙鍵。細(xì)胞趨向破壞組織。

　　

【正文】 不同亞基 血紅蛋白 α 2β 2 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu) (序列 )中含有形成高級(jí)結(jié)構(gòu)的全部需的信息，一級(jí)結(jié)構(gòu)決定高級(jí)結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)及功能。 二、 一級(jí)結(jié)構(gòu)的要點(diǎn) 蛋白質(zhì)主鏈由氨基酸以酰胺鍵連接，多肽的線性結(jié)構(gòu)叫肽鏈，組成肽鏈的氨基酸叫氨基酸殘基。 一級(jí)結(jié)構(gòu)要點(diǎn)： ⑴蛋白質(zhì)中的肽鍵都是由 αNH2和 αCOOH 結(jié)合生成的。 ⑵每一種蛋白質(zhì)都有相同的肽主鏈結(jié)構(gòu)，各種蛋白質(zhì)間的差異是蛋白質(zhì)的氨基酸種類、數(shù)量及排列順序不同。 ⑶氨基酸的 α NH2和 α COOH 縮合，只有末端及側(cè)鏈基團(tuán)有化學(xué)活性。 ⑷每個(gè)蛋白質(zhì)或每個(gè)蛋白質(zhì)的亞基只有一個(gè) α NH2 和 α COOH ⑸分子量大于 5000 的活性肽才能稱為蛋白質(zhì)。 三、 ．蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)測(cè)定 推斷 預(yù)測(cè) 氨基酸序列（一級(jí)結(jié)構(gòu)） → 空間結(jié)構(gòu) （高級(jí)結(jié)構(gòu)） → 功能 （一） 蛋白質(zhì)測(cè)序的一般步驟 祥見 P116 （ 1） 測(cè)定蛋白質(zhì)分子中多肽鏈的數(shù)目。 （ 2） 拆分蛋白質(zhì)分子中的多肽鏈。 （ 3） 測(cè)定多肽鏈的氨基酸組成。 （ 4） 斷裂鏈內(nèi)二硫鍵。 （ 5） 分析多肽鏈的 N 末端和 C 末端。 （ 6） 多肽鏈部分裂解成肽 段。 （ 7） 測(cè)定各個(gè)肽段的氨基酸順序 （ 8） 確定肽段在多肽鏈中的順序。 （ 9） 確定多肽鏈中二硫鍵的位置。 （二） 蛋白質(zhì)測(cè)序的基本策略 對(duì)于一個(gè)純蛋白質(zhì)，理想方法是從 N 端直接測(cè)至 C 端，但目前只能測(cè) 60 個(gè) N 端氨基酸。 ２９ 直接法（測(cè)蛋白質(zhì)的序列） 兩種以上特異性裂解法 N C A 法裂解 A1 A2 A3 A4 B 法裂解 B1 B2 B3 B4 用兩種不同的裂解方法，產(chǎn)生兩 組切點(diǎn)不同的肽段，分離純化每一個(gè)肽段，分離測(cè)定兩個(gè)肽段的氨基酸序列，拼接成一條完整的肽鏈。 間接法（測(cè)核酸序列推斷氨基酸序列） 核酸測(cè)序，一次可測(cè) 600800bp （三） 測(cè)序前的準(zhǔn)備工作 蛋白質(zhì)的純度鑒定 純度要求， 97%以上，且均一，純度鑒定方法。（兩種以上才可靠） ⑴聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)要求一條帶 ⑵ DNS— cl（二甲氨基萘磺酰氯）法測(cè) N 端氨基酸 測(cè)定分子量 用于估算氨基酸殘基 n= 方法：凝膠過濾法、沉降系數(shù)法 確定亞基種類及數(shù)目 多亞基蛋白的亞基間有兩種結(jié)合方式： ⑴非共價(jià) 鍵結(jié)合 8mol/L 尿素， SDS SDSPAGE 測(cè)分子量 ⑵二硫鍵結(jié)合 過甲酸氧化： — S— S— +HCOOOH → SO3H β巰基乙醇還原： 舉例 :： 血紅蛋白 (α 2β 2) （注意，人的血紅蛋白 α 和β的 N 端相同。） 分子量： M 拆亞基： M1 、 M2 兩條帶 拆二硫鍵： M1 、 M2 兩條帶 110mw ３０ 分子量關(guān) 系： M = 2M1 + 2M2 測(cè)定氨基酸組成 主要是酸水解，同時(shí)輔以堿水解。氨基酸分析儀自動(dòng)進(jìn)行。 確定肽鏈中各種 出現(xiàn)的頻率 ,便于選擇裂解方法及試劑。 ① Trp 測(cè)定 對(duì)二甲基氨基苯甲醛 590nm。 ② Cys 測(cè)定 5/一二硫代雙（ — 2— 硝基苯甲酸） DTNB ， 412nm 端基分析 ① N 端分析 DNScl 法：最常用，黃色熒光，靈敏度極高， DNS多肽水解后的 DNS氨基酸不需要提取。 DNFB 法： Sanger 試劑， DNP多肽，酸水解，黃色 DNP氨基酸，有機(jī)溶劑（ 乙酸乙酯）抽提分離，紙層析、薄層層析、液相等 PITC 法： Edman 法，逐步切下。無色 PTH氨基酸，有機(jī)溶劑抽提，層析。 ② C 端分析 A．肼解法 H2NABCDCOOH 無水肼 NH2NH2 100℃ 510h。 ANHNH2 、 BNHNH2 、 CNHNH2 、 DCOOH 氨基酸的酰肼，用苯甲醛沉淀， C 端在上清中， Gln、 Asn、 Cys、 Arg 不能用 此法。 B．羧肽酶法（ Pro 不能測(cè)） 羧肽酶 A：除 Pro、 Arg、 Lys 外的所有 C 端 羧肽酶 B：只水解 Arg、 Lys N H2N? ? ? ? ? Val— Ser— Gly C 圖 P118 羧肽酶法測(cè) C 末端 （四） 肽鏈的部分裂解和肽段的分離純化 化學(xué)裂解法 ①溴化氰 — Met— X— 產(chǎn)率 85% ②亞碘?；郊姿? — Trp— X— 產(chǎn)率 70100% ③ NTCB（ 2硝基 5硫氰苯甲酸） — X— Cys— ④羥胺 NH2OH — Asn— Gly— 約 150 個(gè)氨基酸出現(xiàn)一次 ３１ 酶法裂解 ①胰蛋白酶 Lys X (X ≠ Pro) Arg—— X ②胰凝乳蛋白酶 Tyr—— X (X ≠ Pro) Trp—— X Phe—— X 胃蛋白酶 Phe(Trp、 Try、 Leu)—— Phe(Trp、 Try、 Leu) ③ Glu 蛋白酶 Glu—— X （ V8蛋白酶） ④ Arg 蛋白酶 Arg—— X ⑤ Lys 蛋白酶 X—— Lys ⑥ Pro 蛋白酶 Pro—— X 肽段的分離純化 ①電泳法 ＳＤＳ－ＰＡＧＥ 根據(jù)分子量大小分離 ②離子交換層析法（ DEAE— Cellulose、 DEAE— Sephadex） 根據(jù)肽 段的電荷特性分離 ③反相ＨＰＬＣ法 根據(jù)肽段的極性分離 ④凝膠過濾 肽段純度鑒定 分離得到的每一個(gè)肽段，需分別鑒定純度，常用ＤＮＳ－ c l 法 要求：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ單帶、ＨＰＬＣ單峰、Ｎ端單一。 （五） 肽段的序列測(cè)定及肽鏈的拼接 Edman 法 一次水解一個(gè)Ｎ端 ３２ （ 1）耦聯(lián) PITC ＋ H２ N— ABCD?? pH8— 9 ， 40℃ PTC—— ABCD?? （ 2）裂解 PTC— ABCD?? TFA 無水三氟乙酸 ATZ— A + H2N— BCD （ 3）轉(zhuǎn)化 ATZ— A PTH— A 用 GC 或 HPLC 測(cè)定 PTHA PTC 肽：苯氨基硫甲酰肽 ATZ：噻唑啉酮苯胺（一氨基酸） PTH：苯乙內(nèi)酰硫脲（一氨基酸） 耦聯(lián)：得 PTC 肽 一次循環(huán) 裂解： ATZ 轉(zhuǎn)化： 反應(yīng)產(chǎn)率 99％ 循環(huán)次數(shù) 120 (偶聯(lián)、降 98% 60 解兩步） 90% 40 DNSEdman 法 用 DNS 法測(cè) N 末端，用 Edman 法提供（ n1）肽段。 Ａ－Ｂ－Ｃ－Ｄ－Ｅ肽 圖 有色 Edman 法 熒光基團(tuán)或有色試劑標(biāo)記的 PITC 試劑。 用自動(dòng)序列分析儀測(cè)序 儀器原理： Edman 法，可測(cè) 60 肽。 1967 液相測(cè)序儀 自旋反應(yīng)器，適于大肽段。 1971 固相測(cè)序儀 表面接有丙氨基的微孔玻璃球，可耦連肽段的Ｃ端。 1981 氣相測(cè)序儀 用 Polybrene 反應(yīng)器。 （聚陽離子）四級(jí)銨鹽聚合物 液相： 5nmol 2040 肽 97% 氣相： 5pmol 60 肽 98% 肽段拼接成肽鏈 16 肽，Ｎ端 H Ｃ端Ｓ ３３ Ａ法裂解： ONS PS EOVE RLA HOWT Ｂ 法裂解： SEO WTON VERL APS HO 重疊法確定序列： HOWTONSEOVER LAPS （六） 二硫鍵、酰胺及其他修飾基團(tuán)的確定 二硫鍵的確定（雙向電泳法） 碘乙酰胺封閉 SH 胃蛋白酶酶解蛋白質(zhì) 第一向電泳 過甲酸氧化 — S— S— 生成 SO3H 第二向電泳 分離出含二硫鍵的兩條短肽，測(cè)序 與拼接出的肽鏈比較，定出二硫鍵的位置。 酰胺的確定 Asp –Asn、 GluGln 酶解肽鏈，產(chǎn)生含單個(gè) Asx 或 Glx 的肽，用電泳法確定是 Asp 還是 Asn 舉例： LeuGlxProVal 肽在 pH= 時(shí)，電荷量是 Leu+ Pro0 Va l 此肽除 Glx 外，凈電荷為 0，可根據(jù)此肽的電泳行為確定是 Glu 或是 Gln。 糖、脂、磷酸基位置的確定 糖類通過 Asn、 Ser 與蛋白質(zhì)連接， N糖苷 0糖苷 脂類： Ser、 Thr、 Cys 磷酸： Ser、 Thr、 His 經(jīng)驗(yàn)性序列： Lys(Arg)SerAsnSer(PO4) ArgThrLeuSer(PO4) Lys(Arg) –AlaSer(PO4) 四、 蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)與生物功能 （一） 蛋白質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu)決定高級(jí)結(jié)構(gòu)和功能 蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)舉例： （ 1） 牛胰島素 Sanger 于 1953 年首次完成測(cè)序工作。 P128 圖 338 分子量： 5700 dalton 51 個(gè) 殘基， A 鏈 21 個(gè)殘基， B 鏈 30 個(gè)殘基， A 鏈內(nèi)有一個(gè)二硫鍵 Cys 6—Cys 11 ３４ 鏈間有二個(gè)二硫鍵 7 — B Cys 7 20—B Cys 19 （ 2）核糖核酸酶（ RNase） P128 圖 339 分子量： 12600 124 個(gè) 殘基 4 個(gè)鏈內(nèi)二硫鍵。 牛胰 RNase 變性一復(fù)性實(shí)驗(yàn)： P164 圖 369。 (8M 尿素 +β硫基乙醇 )變性、失活→透析，透析后構(gòu)象恢復(fù)， 活性恢復(fù) 95%以上，而二硫鍵正確復(fù)性的概率是 1/105。 （ 3）人血紅蛋白α和β鏈及肌紅蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu) P129 圖 340 （二） 同源蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)的種屬差異與生物進(jìn)化 同源蛋白質(zhì)： 在不同的生物體內(nèi)具有同一功能的蛋白質(zhì)。如：血紅蛋白在不同的脊椎動(dòng)物中都具有輸送氧氣的功能，細(xì)胞色素在所有的生物中都是電子傳遞鏈的組分。 同源蛋白質(zhì)的特點(diǎn)： ①多肽鏈長度相同或相近 ②同源蛋白質(zhì)的 氨基酸順序中有許多位置的氨基酸對(duì)所有種屬來說都是相同的，稱不變殘基，不變殘基高度保守，是必需的。 ③除不變殘基以外，其它位置的氨基酸對(duì)不同的種屬有很大變化，稱可變殘基，可變殘基中，個(gè)別氨基酸的變化不影響蛋白質(zhì)的功能。 通過比較同源蛋白質(zhì)的氨基酸序列的差異可以研究不同物種間的親源關(guān)系和進(jìn)化，親源關(guān)系越遠(yuǎn)，同源蛋白的氨基酸順序差異就越大。 細(xì)胞色素 C 存在于線粒體膜內(nèi)，在真核細(xì)胞的生物氧