蛋白提取方法(編輯修改稿)
2024-11-19 03:42 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 。抑肽素 μg/ml亮肽素 μg/ml 方法 [1] (1)冰上取材，稱濕重，置液氮中凍存或直接進(jìn)行下一步； (2)在液氮中研碎樣品或使用機(jī)械勻漿器磨碎組織； (3)將粉末懸浮于含DTT(%w/v)的10%三氯醋酸（w/v）的丙酮溶液中； (4)蛋白–20℃沉淀過夜； (5)35000g(6℃)離心30min； %DTT的預(yù)冷丙酮中； (7)20℃放置1h； 35000g(6℃)離心30min； (9)在通風(fēng)櫥中讓丙酮充分揮發(fā)，得到干燥的沉淀； (10)在裂解液中重新溶解沉淀（50100mg組織需要1ml裂解液）； (11)15℃,40000g，離心1hr； (12)用Bradford法[2]測定上清的蛋白濃度，分裝后置–75℃保存。 (1)取材； (2)用研缽在液氮冷凍條件下將樣品研成粉末，使用組織勻漿器勻漿30s； (3)組織懸液15℃，10000g離心10min； (4)上清液4℃，150000g超速離心45min； (5)小心避開上層漂浮的脂質(zhì)層，吸取離心上清6℃40,000g再次離心50min； 取離心上清。Bradford法定量，分裝后置–75℃保存。 (1)吸出培養(yǎng)液棄去，； (2)加入PBS，用橡膠刮收集細(xì)胞于10ml離心管中； (3)500g，離心5min； (4)棄上清，PBS洗三次（室溫,500g，5min）， (5)在離心管中加入1mlPBS，重懸細(xì)胞，用1ml微量加液器移
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