血紅蛋白的提取與分離(1)(編輯修改稿)
2025-06-22 18:25 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 )。 SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì) — SDS復(fù)合物， SDS所 帶負(fù)電荷 的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有電荷量。 因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于 ( )。 蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于它所帶靜電荷的多少以及分子的大小等因素。 SDS 單條肽鏈的分子量 分子的大小 討論： 如何測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量？ 使用 SDS— 聚丙烯酰胺凝膠電泳測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量時(shí)，可選用一組已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白同時(shí)進(jìn)行電泳，根據(jù)已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白的電泳區(qū)帶位置，用電泳遷移率和分子量的對(duì)數(shù)作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，可以測(cè)定未知蛋白質(zhì)的分子量。市場(chǎng)上有高分子量、次高分子量及低分子量的標(biāo)準(zhǔn)蛋白試劑出售 實(shí)驗(yàn)操作 閱讀 課本相關(guān)內(nèi)容， 思考 以下問(wèn)題： 蛋白質(zhì)的提取和分離一般分成幾步？ 樣品怎樣處理？ 蛋白質(zhì)怎樣分離？ 實(shí)驗(yàn)操作 （一）樣品處理 樣品處理 —— 粗分離 —— 純化 —— 純度鑒定 問(wèn)： 蛋白質(zhì)提取和分離步驟？ 血液 血 漿 水分 固體物質(zhì) 血漿蛋白 無(wú)機(jī)鹽 磷脂 葡萄糖等 血細(xì)胞 白細(xì)胞 血小板 紅細(xì)胞 （最多） 血紅蛋白 （ 90％） 2個(gè) a－肽鏈 2個(gè) β 一肽鏈 4個(gè)亞鐵紅素基團(tuán) ① 血液組成 實(shí)驗(yàn)操作 （一）樣品處理 血液由血漿和各種血細(xì)胞組成，其中紅細(xì)胞最多。在紅細(xì)胞的組成中，約 90％是血紅蛋白。血紅蛋白由四個(gè)肽鏈組成 (如圖 )，包括兩個(gè) α 肽鏈和兩個(gè) β 肽鏈。其中每條肽鏈環(huán)繞一個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)，此基團(tuán)可攜帶一分子氧或一分了二氧化碳。血紅蛋白因含有血紅素而呈現(xiàn)紅色。 血紅蛋白 2個(gè) a－肽鏈 2個(gè) β 一肽鏈 4個(gè)亞鐵紅素基團(tuán) 實(shí)驗(yàn)操作 （一）樣品處理 每個(gè)肽鏈環(huán)繞一個(gè) 亞鐵血紅素基團(tuán)， 此基團(tuán)可攜帶 一分子氧或一分子二氧化碳， 血紅蛋白因含有 血紅素 而呈紅色 ② 血紅蛋白組成及作用 ③選材 本課題可選用豬、牛、羊或其他 脊椎動(dòng)物 的血液來(lái)分離血紅蛋白。 實(shí)驗(yàn)操作 （一）樣品處理 紅細(xì)胞的洗滌 閱讀 課本內(nèi)容， 回答 以下問(wèn)題： 洗滌的目的？ 怎樣洗滌？ 洗滌干凈的標(biāo)志是什么？ 1 除去其中的雜蛋白，以利于后續(xù)血紅蛋白的分離純化。 2 采樣分離－吸漿倒紅－加液攪拌－重洗三次 3 直至上清液中沒(méi)有黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。 實(shí)驗(yàn)操作 （一）樣品處理 速度越高和時(shí)間越長(zhǎng)會(huì)使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等一同沉淀達(dá)不到分離的效果。 問(wèn)： 洗滌操作過(guò)程中，為什么要 低速短時(shí)間 離心？ 為了使紅細(xì)胞洗滌干凈，需如何處理？ 用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 ％的氯化鈉溶液洗滌， 能否用蒸餾水或濃度高的氯化鈉溶液？為什么？ 紅細(xì)胞的洗滌 重復(fù)洗滌三次 ， 直至上清液中沒(méi)有黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。 實(shí)驗(yàn)操作 （一）樣品處理 紅細(xì)胞的洗滌 洗滌紅細(xì)胞的目的是 去除雜蛋白 ，以利于后續(xù)步驟的分離純化。采集的血樣要及時(shí)分離紅細(xì)胞，分離時(shí)采用 低速短時(shí)間離心 ，如500 r／ rain離心 2min，然后用膠頭吸管吸出上層透明的黃色血漿，將下層暗紅色的紅細(xì)胞液體倒入燒杯，再加入五倍體積的生理鹽水 (質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 ％的 NaCl溶液 )，緩慢攪拌 10min，低速短時(shí)間離心，如此重復(fù)洗滌三次，直至上清液中沒(méi)有黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。 實(shí)驗(yàn)操作 （一）樣品處理 血紅蛋白的釋放 將洗滌好的紅細(xì)胞倒入燒杯中，加蒸餾水到原血液的體積，再加 40％體積的甲苯，臵于磁力攪拌器上充分?jǐn)嚢?10 min。在蒸餾水和甲苯的作用下，紅細(xì)胞破裂，釋放出血紅蛋白。 說(shuō)出： 蒸餾水和甲苯的作用。 實(shí)驗(yàn)操作 （一）樣品處理 分離血紅蛋白溶液 將攪拌好的混合液轉(zhuǎn)移到離心管中，以 2022 r／ min的速度離心 10min后，可以明顯看到試管中的溶液分為 4層。從上往下數(shù)，第 1層為無(wú)色透明的甲苯層，第 2層為白色薄層固體，是脂溶性物質(zhì)的沉淀層，第 3層是紅色透明液體，這是血紅蛋白的水溶液，第 4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過(guò)濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜臵片刻后，分出下層的紅色透明液體。 問(wèn)： 采用什么方法分離血紅蛋白？ 離心分層后， 各層的成分 各是什么？ 用濾紙過(guò)濾，去掉什么成分？ 實(shí)驗(yàn)操作 （一）
研究報(bào)告相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1