血紅蛋白的提取和分離(1)(編輯修改稿)
2025-06-22 18:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 α －肽鏈 兩個(gè) β 一肽鏈 四個(gè)亞鐵紅素基團(tuán) 每個(gè)肽鏈環(huán)繞一個(gè) 亞鐵血紅素基團(tuán)， 此基團(tuán)可攜帶 一分子氧或一分子二 氧化碳， 血紅蛋白因含有 血紅素 而 呈 紅色。 血紅蛋白的特點(diǎn)： 二、實(shí)驗(yàn)操作 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 ： （一）蛋白質(zhì)提取和分離步驟 （二）操作過程 本課題可選用豬、牛、羊或其他脊椎 動物的血液來分離血紅蛋白。 (1)紅細(xì)胞的洗滌 : ① 洗滌目的 : 去除雜蛋白，以利于后續(xù)血紅蛋白的 分離純化， 洗滌次數(shù)不可過少 。 ② 洗滌操作： 采集血樣。 低速短時(shí)間 離心（速度越高和時(shí)間越長，會使白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞等一同沉淀，達(dá)不到分離的效果） 吸取血漿：上層透明的黃色血漿。 鹽水洗滌：用五倍體積的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 ％的氯化鈉 溶液洗滌。 低速離心（低速短時(shí)間） 重復(fù) 5步驟三次，直至上清液中已沒有黃色 ，表明洗滌干凈。 初次離心后的結(jié)果 3次洗滌后的結(jié)果 (2)血紅蛋白的釋放： 加蒸餾水到 原血液體積 ， 再加40％體積的 甲苯 ， 臵于 磁力攪拌器 上充分?jǐn)嚢?10分鐘 （ 加速細(xì)胞破裂 ） ,細(xì)胞破裂釋放出 血紅蛋白。 (3)分離血紅蛋白溶液： ① 過程： 將攪拌好混合液轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，以 2022r/min的速度離心 10 min。 ②試管中溶液層次： 第 1層（最上層）：甲苯層（ 無色透明 ）；第 2層（中上層）：脂溶性物質(zhì)沉淀層（ 白色薄層固體 ）；第 3層（中下層）：血紅蛋白的水溶液層（ 紅色透明液體 ）；第4層（最下層）：雜質(zhì)沉淀層（ 暗紅色 ）。 ③分離： 用濾紙過濾，除去脂溶性沉淀層，于分液漏斗中靜臵片刻后，分出下層的 紅色透明液體 。 二、實(shí)驗(yàn)操作 (4)透析： ① 過程： 取 1ml的血紅蛋白溶液裝入 透析袋 中，將透析袋放入盛有 300ml的物質(zhì)的量濃度為 20mmol/l的磷酸緩沖液 中（ pH為 ），透析 12小時(shí)。 ②透析目的： 除去樣品中分子量較小的雜質(zhì) 。 二、實(shí)驗(yàn)操作 ② 原理：透析袋能使小分子自由進(jìn)出，而大分子保留在袋內(nèi)。 透析過程動畫演示 利用透析袋透析 凝膠色譜操作 : （ 1）凝膠色譜柱的制作： ① 取長 40厘米，內(nèi)徑 ， 兩端需用砂紙磨平。 ②底塞的制作： 打孔 → 挖出凹穴 → 安裝移液管頭部 → 覆蓋尼龍網(wǎng)，再用 100目尼龍紗
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