木瓜蛋白酶的提取(編輯修改稿)
2025-07-16 22:38 本頁面
【文章內容簡介】 的調味品提高了酵母菌的價值和利用率。用于營養(yǎng)保健品工業(yè)：木瓜蛋白酶用于保健食品主要有兩種途徑：一種途徑是輔助消化，可做成腸溶片，口服以達到消除消化紊亂的目的；另一種途徑是將一些含有特殊蛋白源的動植物分解制成各種營養(yǎng)保健液。方富永等采用木瓜蛋白酶酶解巴非蛤貝肉，結果表明酶解液中游離氨基酸含量豐富，（色氨酸未計），%。巴非蛤貝肉經(jīng)復合蛋白酶水解，適當調配可制作營養(yǎng)豐富、海鮮風味濃郁、具有一定保健功能的口服液?！∮糜趯櫸锸称飞a(chǎn)用木瓜蛋白酶對寵物食品進行處理，可以減少寵物食品的黏稠性，改善口感，增加風味。由于木瓜蛋白酶還具有驅蟲效果，也可以用番木瓜汁來驅除哺乳動物宿主腸道內的線蟲。另外，木瓜蛋白酶還可以應用到化工、醫(yī)藥等領域。如洗衣粉等洗滌劑中加入木瓜蛋白酶能快速地清洗衣物中的血漬和汗?jié)n。此外，木瓜蛋白酶還可以促進中藥成分的有效煎出，用于輔助Rh血型的鑒定，還可用于腫瘤的輔助治療等。目前，木瓜蛋白酶被廣泛地應用于食品行業(yè)，如肉類、啤酒、調味品等的生產(chǎn)。隨著我國人民生活水平的提高，人們對食品安全和食品營養(yǎng)的問題越來越關注，而木瓜蛋白酶可用來生產(chǎn)安全、營養(yǎng)的食品，如具有保健功能的口服液等，具有良好的市場前景。同時，為了滿足各行各業(yè)對木瓜蛋白酶的需求，尤其是食品與醫(yī)藥行業(yè)，研究如何分離純化得到成本低、純度高的木瓜蛋白酶就很有意義。因此，對木瓜蛋白酶的提取和分離純化技術進行深入的研究，提取高質量的木瓜蛋白酶具有重要的實用價值。實驗內容： 一、實驗目的： 熟悉木瓜蛋白酶的粗提方法和原理。 掌握鹽析和雙水相萃取法的原理和步驟。 掌握酶活力測定的方法，并評定木瓜蛋白酶的活性。 學會分析總結影響實驗結果的因素。 二、實驗原理根據(jù)木瓜蛋白酶的分子量及特性，通過離心烘干等技術獲得木瓜蛋白酶的粗產(chǎn)物。再根據(jù)粗產(chǎn)物在雙水相中分配系數(shù)的差異進行進一步的提純。最后在紫外分光光度計中測取酶的吸光度，通過OD值換算酶的活性。四、 技術線路：木瓜乳汁粗提 有機試劑提取乙醇提取超聲波提取標準曲線測蛋白含量SDSpage標準曲線法雙水相法鹽析法雙水相法鹽析法雙水相法鹽析法雙水相法鹽析法提純雙水相法鹽析法SDSPAGE標準曲線法測酶活實驗一：木瓜蛋白酶的粗提：有機溶劑提取法：1)實驗原理：根據(jù)木瓜蛋白酶在不同相的分配系數(shù)不同。2）實驗步驟：稱取700g木瓜乳汁,加入350m l水,拌勻,用40%NH4OH調pH至9. 0,攪拌1h, 抽濾,濾液加入冷無水乙醇,使乙醇濃度為60%,攪拌均勻,置低溫冰箱30m in, 2500r/m in離心15 m in,取沉淀,干燥。 超聲波提取法：1)實驗原理：,一方面賦予溶劑對細胞壁更大的滲透力,并強化細胞內外的質量傳輸,另一方面破壞細胞壁,使細胞內含物更易釋放,。2）實驗內容：試驗材料：番木瓜。酪蛋白。L 酪氨酸。CCl3 COOH、Na2CONa2HPO4 12H2O、NaH2PO4 2H2O、NaAC、HAC、NaOH、HCl、NaCl、CuSOEDTA、Cys、Vc.儀器設備：721型分光光度計。UV 2000型紫外可見分光光度計。JY92 Ⅱ超聲波細胞粉碎機。PHS 3C型精密pH計。TDL5型低速臺式大容量離心機。梅特勒托利多PL202 S電子天平。HH 6數(shù)顯恒溫水浴鍋。TianfengTp10 20實驗型超濾裝置。操作步驟：酶液制備:選擇新鮮的番木瓜,清洗去皮、籽、瓤后,切塊破碎,稱取果肉,加入一定量的4℃蒸餾水進行打漿。果漿在一定條件下進行超聲波處理,4000 r min1離心15min。除雜過濾后,上清液選用截留分子質量為20000 u的PP中空纖維膜進行超濾濃縮,收集酶液樣品,超聲波處理前先預冷至0 4℃ ,超聲波處理時采用冰浴冷卻,.佳提取工藝條件為超聲波功率300W,超聲處理時間200 s,果漿質量分數(shù)30%。經(jīng)超聲波強化提取,。在以酪蛋白為底物、pH ℃條件下, mg mL1 min1。最適溫度為70 80℃ , 。該酶在40℃以下, 。EDTA、Cys和Vc對酶活力具有激活作用,CuSO4和ZnCl2具有抑制作用,而KCl、NaCl、CaClMg
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