【文章內容簡介】 6組 %的菠蘿蛋白酶解產(chǎn)物溶液,1mL只1，共3次。 過敏反應激發(fā)實驗 在末次強化致敏10d后，各動物用相對應的致敏物質進行激發(fā)，觀察動物是否發(fā)生過敏反應。 蝦蛋白過敏模型組激發(fā)實驗各組激發(fā)時所用過敏物質、激發(fā)給藥的途徑、激發(fā)的方法和注射劑量如下： 第1組 在末次腹腔注射后10天靜脈注射PBS平衡鹽溶液，2mL只1；第2組 %的卵白蛋白溶液，2mL只1；第3組 %的卵白蛋白溶液，2mL只1；第4組 %的卵白蛋白溶液，2mL只1第5組 在末次腹腔注射后10天靜脈注射1%的南美蝦蛋白溶液，2 mL只1；第6組 %的南美蝦蛋白溶液,2 mL只1；第7組 %的南美蝦蛋白溶液，2mL只1；第8組 %的南美蝦蛋白溶液,2mL只1。各動物靜脈注射后立即記時，密切觀察注射后60 min內動物的各種反應，并及時記錄。 經(jīng)加熱處理的蛋白質組過敏激發(fā)實驗第1組 %加熱到70℃后的卵白蛋白溶液，2mL只1；第2組 %加熱到70℃后的南美蝦蛋白溶液，2mL只1。 蝦蛋白酶解產(chǎn)物過敏原消減組激發(fā)實驗各組激發(fā)時所用過敏物質、激發(fā)給藥的途徑、激發(fā)的方法和注射劑量如下：第1組 在末次腹腔注射后10天，%的胰蛋白酶解產(chǎn)物溶液，2mL只1；第2組 在末次腹腔注射后10天，%的木瓜蛋白酶解產(chǎn)物溶液，2mL只1；第3組 在末次腹腔注射后10天，%的菠蘿蛋白酶解產(chǎn)物溶液，2mL只1；第4組 在末次腹腔注射后10天，%的胰蛋白酶解產(chǎn)物溶液，2mL只1；第5組 在末次腹腔注射后10天，%的木瓜蛋白酶解產(chǎn)物溶液，2mL只1；第6組 在末次腹腔注射后10天，%的菠蘿蛋白酶解產(chǎn)物溶液2mL只1。各動物靜脈注射后立即記時，密切觀察注射后60 min內動物的各種反應，并及時記錄。 過敏反應判定及評分標準凡在60分鐘內豚鼠出現(xiàn)興奮不安、抓鼻、豎毛、打噴嚏、呼吸困難、痙攣、休克和死亡等現(xiàn)象可按表3進行分級，并據(jù)此按評分標準給每只動物評分。過敏反應判定標準見表3。表3 過敏反應判定標準評分反應癥狀結果0無明顯反應陰性1只有輕度抓鼻、顫抖或豎毛弱陽性2≥3次咳嗽、有抓鼻、顫抖或豎毛陽性3多次或連續(xù)咳嗽、伴有呼吸困難或痙攣、抽搐等強陽性4痙攣、抽搐、大小便失禁、休克死亡極強陽性 數(shù)據(jù)采集及處理按上述實驗要求記錄原始數(shù)據(jù)，包括出現(xiàn)陽性反應的動物數(shù)、過敏反應的癥狀、死亡動物數(shù)、各鼠過敏反應評分，整理各組數(shù)據(jù)，計算出各組評分的均值（）177。標準差（s），進行方差齊性檢驗，然后根據(jù)方差是否齊進行組間差異的顯著性檢驗（t檢驗或t′檢驗）。平均值：，（…），其中n為樣本容量 標準差：，（…） 方差齊性檢驗要判斷兩個總體方差σ21與σ22是否相等，可用F檢驗。求得F統(tǒng)計量后，按檢驗水準α，可查F分布的臨界值表，得臨界值F（（1α）/2）和F（α/2）。若F≤F（（1α）/2）或F≥F（α/2），P＜α，拒絕H0；若F（（1α）/2）＜F＜F（α/2），則不可拒絕H0。但一般情況F值不小于1，這時，只要F≥F（α/2），便可拒絕H0；F＜F（α/2），便不可拒絕H0。 顯著性檢驗方法通過F檢驗若方差齊性，則可用t檢驗；方差不齊性，則用t’檢驗。︱t︱＞t(α/2，n), P＜α，拒絕H0，接受H1，兩個樣本有差異。同理，︱t’︱＞t(α/2，df’), P＜α，拒絕H0，接受H1，兩個樣本有差異。（1）：=組間差異無顯著性，：=組間有顯著性；（2）計算T，即 ；（3）當=，查分布表，將t與進行比較，若︱t︱＞, P＜α，拒絕H0，接受H1，組間有顯著性差異；反之，組間無顯著性差異。3 結果 蝦蛋白過敏反應動物實驗模型的建立以PBS平衡鹽溶液為陰性對照，以卵白蛋白為陽性對照，建立了蝦蛋白全身過敏反應的動物實驗模型。 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過敏反應表現(xiàn)豚鼠用不同劑量的卵白蛋白致敏后，部分豚鼠出現(xiàn)咳嗽、抓鼻、打噴嚏、皮毛稍凌亂、倦怠等癥狀，個別動物出現(xiàn)死亡；PBS組豚鼠一切正常，與致敏前幾乎無變化；而用不同劑量的蝦蛋白致敏后的豚鼠反應與卵白蛋白組相似。PBS組豚鼠靜脈注射PBS后，豚鼠表現(xiàn)正常，無任何過敏反應的表現(xiàn)；各劑量卵白蛋白組動物用等濃度的卵白蛋白靜脈注射后，出現(xiàn)不同程度的過敏反應，多數(shù)動物表現(xiàn)多次咳嗽、抓鼻、打噴嚏、肌張力增高、站立不穩(wěn)、驚厥、抽搐、呼吸困難、大小便失禁、直至死亡。各劑量蝦蛋白組動物在激發(fā)后的過敏反應表現(xiàn)與卵白蛋白組及其相似。結果見表4。 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過敏反應評判及評分結果參照表3 中的過敏反應強度的判定標準和評分標準對各組結果進行評價。結果見表5。表4 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過敏反應表現(xiàn)組別例數(shù)致敏物質激發(fā)物質癥狀/只（均腹腔注射）（均靜脈注射）1244PBS平衡鹽溶液%卵白蛋白PBS平衡鹽溶液%卵白蛋白無異常3只死亡，1只出現(xiàn)抓鼻、咳嗽3次35%卵白蛋白%卵白蛋白均死亡45%卵白蛋白%卵白蛋白4只死亡541%南美蝦蛋白溶液1%南美蝦蛋白溶液3只死亡，1只出現(xiàn)呼吸困難65%南美蝦蛋白溶液%南美蝦蛋白溶液3只死亡，1只出現(xiàn)、呼吸困難、驚厥76%南美蝦蛋白溶液%南美蝦蛋白溶液5只死亡，1只抓鼻、咳嗽3次、呼吸困難、驚厥、大小便失禁85%南美蝦蛋白溶液%南美蝦蛋白溶液1只死亡，1只驚厥，均抓鼻3次、咳嗽表5 全身過敏反應評判及評分結果組 別例數(shù)陽性數(shù)陽性率死亡數(shù)死亡率評分/只/只　 /%　/只　/%140000177。244100375177?！?551005100177。45480240177。544100375177?！?5480360177?！?655177。85480120177。▲*注：與PBS平衡鹽溶液組比較，▲▲ ＜P＜，▲ P＜ %卵白蛋白溶液組比較，* ＜P＜，**P＜ 經(jīng)加熱處理的蛋白質過敏原的消除效果評價 致敏并激發(fā)后的全身過敏反應表現(xiàn)豚鼠用加熱后的卵白蛋白溶液和蝦蛋白溶液致敏后，豚鼠出現(xiàn)了不同程度的咳嗽、抓鼻、肌無力、甚至死亡等癥狀。結果見表6 蛋白液加熱后豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過敏反應評判及評分結果參照表3 中的過敏反應強度的判定標準和評分標準對各組結果進行評價。結果見表7。表6 致敏并激發(fā)的全身過敏反應表現(xiàn)組別例數(shù)致敏物質激發(fā)物質癥狀/只（均腹腔注射）（均靜脈注射）14PBS平衡鹽溶液PBS平衡鹽溶液無異常24%卵白蛋白%卵白蛋白3只死亡，1只出現(xiàn)抓鼻、咳嗽3次36%南美蝦蛋白溶液%南美蝦蛋白溶液5只死亡，1只抓鼻、咳嗽3次、呼吸困難、驚厥、大小便失禁44%加熱到70℃卵白蛋白溶液%加熱到70℃卵白蛋白溶液均死亡54加熱到70℃%南美蝦蛋白溶液加熱到70℃%南美蝦蛋白溶液1只死亡，均咳嗽、抓鼻3次表7 致敏并激發(fā)的全身過敏反應評判及評分結果組 別例數(shù)陽性數(shù)陽性率死亡數(shù)死亡率評分/只/只　/%　/只　/%140000177。2346451003575177?！?77。4551005100177。544100125177?！钭ⅲ号cPBS平衡鹽溶液組比較，▲▲ ＜P＜，▲ P＜ %卵白蛋白溶液組比較，* ＜P＜，**P＜%蝦白蛋白溶液組比較，☆＜P＜，☆☆P＜ 蝦蛋白酶解產(chǎn)物過敏原消減效果評價 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過敏反應表現(xiàn)豚鼠用蝦蛋白致敏后，部分豚鼠出現(xiàn)了不同程度的咳嗽、抓鼻、肌無力等癥狀，個別豚鼠出現(xiàn)死亡；用不同酶解產(chǎn)物致敏后的豚鼠反應與蝦蛋白相似。不同酶解產(chǎn)物靜脈注射后，各組豚鼠出現(xiàn)了不同程度的咳嗽，抓鼻等癥狀，并有個別豚鼠死亡。結果見表8。 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過敏反應結果評判結果參照表3 中的過敏反應強度的判定標準和評分標準對各組結果進行評價。結果見表9。表8 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過敏反應表現(xiàn)組別例數(shù)致敏物質激發(fā)物質癥狀　/只（均腹腔注射）（均靜脈注射）06%南美蝦蛋白溶液%南美蝦蛋白溶液5只死亡，1只抓鼻、咳嗽3次、呼吸困難、驚厥、大小便失禁16%南美蝦蛋白溶液%胰蛋白酶解產(chǎn)物咳嗽、抓鼻3次、1只略有肌無力、呼吸困難26%南美蝦蛋白溶液%木瓜蛋白酶解產(chǎn)物抓鼻3次36%南美蝦蛋白溶液%菠蘿蛋白沒接產(chǎn)物抓鼻﹤3次，2只未iv已過敏死亡46%胰蛋白酶解產(chǎn)物%胰蛋白酶解產(chǎn)物抓鼻2次、1只多次咳嗽55%木瓜蛋白酶解產(chǎn)物%木瓜蛋白酶解產(chǎn)物第一只死亡，均抓鼻，一只多次咳嗽66%菠蘿蛋白酶解產(chǎn)物%菠蘿蛋白沒解產(chǎn)物多次抓鼻、咳嗽3次表9 蝦蛋白酶解產(chǎn)物過敏反應評判及評分結果組別例數(shù)陽性數(shù)陽性率死亡數(shù)死亡率評分/只/只/%/只/%0655177。16400177?！?*26100177。**364217