【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 6組 %的菠蘿蛋白酶解產(chǎn)物溶液,1mL只1，共3次。 過(guò)敏反應(yīng)激發(fā)實(shí)驗(yàn) 在末次強(qiáng)化致敏10d后，各動(dòng)物用相對(duì)應(yīng)的致敏物質(zhì)進(jìn)行激發(fā)，觀察動(dòng)物是否發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)。 蝦蛋白過(guò)敏模型組激發(fā)實(shí)驗(yàn)各組激發(fā)時(shí)所用過(guò)敏物質(zhì)、激發(fā)給藥的途徑、激發(fā)的方法和注射劑量如下： 第1組 在末次腹腔注射后10天靜脈注射PBS平衡鹽溶液，2mL只1；第2組 %的卵白蛋白溶液，2mL只1；第3組 %的卵白蛋白溶液，2mL只1；第4組 %的卵白蛋白溶液，2mL只1第5組 在末次腹腔注射后10天靜脈注射1%的南美蝦蛋白溶液，2 mL只1；第6組 %的南美蝦蛋白溶液,2 mL只1；第7組 %的南美蝦蛋白溶液，2mL只1；第8組 %的南美蝦蛋白溶液,2mL只1。各動(dòng)物靜脈注射后立即記時(shí)，密切觀察注射后60 min內(nèi)動(dòng)物的各種反應(yīng)，并及時(shí)記錄。 經(jīng)加熱處理的蛋白質(zhì)組過(guò)敏激發(fā)實(shí)驗(yàn)第1組 %加熱到70℃后的卵白蛋白溶液，2mL只1；第2組 %加熱到70℃后的南美蝦蛋白溶液，2mL只1。 蝦蛋白酶解產(chǎn)物過(guò)敏原消減組激發(fā)實(shí)驗(yàn)各組激發(fā)時(shí)所用過(guò)敏物質(zhì)、激發(fā)給藥的途徑、激發(fā)的方法和注射劑量如下：第1組 在末次腹腔注射后10天，%的胰蛋白酶解產(chǎn)物溶液，2mL只1；第2組 在末次腹腔注射后10天，%的木瓜蛋白酶解產(chǎn)物溶液，2mL只1；第3組 在末次腹腔注射后10天，%的菠蘿蛋白酶解產(chǎn)物溶液，2mL只1；第4組 在末次腹腔注射后10天，%的胰蛋白酶解產(chǎn)物溶液，2mL只1；第5組 在末次腹腔注射后10天，%的木瓜蛋白酶解產(chǎn)物溶液，2mL只1；第6組 在末次腹腔注射后10天，%的菠蘿蛋白酶解產(chǎn)物溶液2mL只1。各動(dòng)物靜脈注射后立即記時(shí)，密切觀察注射后60 min內(nèi)動(dòng)物的各種反應(yīng)，并及時(shí)記錄。 過(guò)敏反應(yīng)判定及評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)凡在60分鐘內(nèi)豚鼠出現(xiàn)興奮不安、抓鼻、豎毛、打噴嚏、呼吸困難、痙攣、休克和死亡等現(xiàn)象可按表3進(jìn)行分級(jí)，并據(jù)此按評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)給每只動(dòng)物評(píng)分。過(guò)敏反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表3。表3 過(guò)敏反應(yīng)判定標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分反應(yīng)癥狀結(jié)果0無(wú)明顯反應(yīng)陰性1只有輕度抓鼻、顫抖或豎毛弱陽(yáng)性2≥3次咳嗽、有抓鼻、顫抖或豎毛陽(yáng)性3多次或連續(xù)咳嗽、伴有呼吸困難或痙攣、抽搐等強(qiáng)陽(yáng)性4痙攣、抽搐、大小便失禁、休克死亡極強(qiáng)陽(yáng)性 數(shù)據(jù)采集及處理按上述實(shí)驗(yàn)要求記錄原始數(shù)據(jù)，包括出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)的動(dòng)物數(shù)、過(guò)敏反應(yīng)的癥狀、死亡動(dòng)物數(shù)、各鼠過(guò)敏反應(yīng)評(píng)分，整理各組數(shù)據(jù)，計(jì)算出各組評(píng)分的均值（）177。標(biāo)準(zhǔn)差（s），進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，然后根據(jù)方差是否齊進(jìn)行組間差異的顯著性檢驗(yàn)（t檢驗(yàn)或t′檢驗(yàn)）。平均值：，（…），其中n為樣本容量 標(biāo)準(zhǔn)差：，（…） 方差齊性檢驗(yàn)要判斷兩個(gè)總體方差σ21與σ22是否相等，可用F檢驗(yàn)。求得F統(tǒng)計(jì)量后，按檢驗(yàn)水準(zhǔn)α，可查F分布的臨界值表，得臨界值F（（1α）/2）和F（α/2）。若F≤F（（1α）/2）或F≥F（α/2），P＜α，拒絕H0；若F（（1α）/2）＜F＜F（α/2），則不可拒絕H0。但一般情況F值不小于1，這時(shí)，只要F≥F（α/2），便可拒絕H0；F＜F（α/2），便不可拒絕H0。 顯著性檢驗(yàn)方法通過(guò)F檢驗(yàn)若方差齊性，則可用t檢驗(yàn)；方差不齊性，則用t’檢驗(yàn)。︱t︱＞t(α/2，n), P＜α，拒絕H0，接受H1，兩個(gè)樣本有差異。同理，︱t’︱＞t(α/2，df’), P＜α，拒絕H0，接受H1，兩個(gè)樣本有差異。（1）：=組間差異無(wú)顯著性，：=組間有顯著性；（2）計(jì)算T，即 ；（3）當(dāng)=，查分布表，將t與進(jìn)行比較，若︱t︱＞, P＜α，拒絕H0，接受H1，組間有顯著性差異；反之，組間無(wú)顯著性差異。3 結(jié)果 蝦蛋白過(guò)敏反應(yīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒁訮BS平衡鹽溶液為陰性對(duì)照，以卵白蛋白為陽(yáng)性對(duì)照，建立了蝦蛋白全身過(guò)敏反應(yīng)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀? 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過(guò)敏反應(yīng)表現(xiàn)豚鼠用不同劑量的卵白蛋白致敏后，部分豚鼠出現(xiàn)咳嗽、抓鼻、打噴嚏、皮毛稍凌亂、倦怠等癥狀，個(gè)別動(dòng)物出現(xiàn)死亡；PBS組豚鼠一切正常，與致敏前幾乎無(wú)變化；而用不同劑量的蝦蛋白致敏后的豚鼠反應(yīng)與卵白蛋白組相似。PBS組豚鼠靜脈注射PBS后，豚鼠表現(xiàn)正常，無(wú)任何過(guò)敏反應(yīng)的表現(xiàn)；各劑量卵白蛋白組動(dòng)物用等濃度的卵白蛋白靜脈注射后，出現(xiàn)不同程度的過(guò)敏反應(yīng)，多數(shù)動(dòng)物表現(xiàn)多次咳嗽、抓鼻、打噴嚏、肌張力增高、站立不穩(wěn)、驚厥、抽搐、呼吸困難、大小便失禁、直至死亡。各劑量蝦蛋白組動(dòng)物在激發(fā)后的過(guò)敏反應(yīng)表現(xiàn)與卵白蛋白組及其相似。結(jié)果見(jiàn)表4。 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過(guò)敏反應(yīng)評(píng)判及評(píng)分結(jié)果參照表3 中的過(guò)敏反應(yīng)強(qiáng)度的判定標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果見(jiàn)表5。表4 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過(guò)敏反應(yīng)表現(xiàn)組別例數(shù)致敏物質(zhì)激發(fā)物質(zhì)癥狀/只（均腹腔注射）（均靜脈注射）1244PBS平衡鹽溶液%卵白蛋白PBS平衡鹽溶液%卵白蛋白無(wú)異常3只死亡，1只出現(xiàn)抓鼻、咳嗽3次35%卵白蛋白%卵白蛋白均死亡45%卵白蛋白%卵白蛋白4只死亡541%南美蝦蛋白溶液1%南美蝦蛋白溶液3只死亡，1只出現(xiàn)呼吸困難65%南美蝦蛋白溶液%南美蝦蛋白溶液3只死亡，1只出現(xiàn)、呼吸困難、驚厥76%南美蝦蛋白溶液%南美蝦蛋白溶液5只死亡，1只抓鼻、咳嗽3次、呼吸困難、驚厥、大小便失禁85%南美蝦蛋白溶液%南美蝦蛋白溶液1只死亡，1只驚厥，均抓鼻3次、咳嗽表5 全身過(guò)敏反應(yīng)評(píng)判及評(píng)分結(jié)果組 別例數(shù)陽(yáng)性數(shù)陽(yáng)性率死亡數(shù)死亡率評(píng)分/只/只　 /%　/只　/%140000177。244100375177。▲3551005100177。45480240177。544100375177?！?5480360177?！?655177。85480120177。▲*注：與PBS平衡鹽溶液組比較，▲▲ ＜P＜，▲ P＜ %卵白蛋白溶液組比較，* ＜P＜，**P＜ 經(jīng)加熱處理的蛋白質(zhì)過(guò)敏原的消除效果評(píng)價(jià) 致敏并激發(fā)后的全身過(guò)敏反應(yīng)表現(xiàn)豚鼠用加熱后的卵白蛋白溶液和蝦蛋白溶液致敏后，豚鼠出現(xiàn)了不同程度的咳嗽、抓鼻、肌無(wú)力、甚至死亡等癥狀。結(jié)果見(jiàn)表6 蛋白液加熱后豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過(guò)敏反應(yīng)評(píng)判及評(píng)分結(jié)果參照表3 中的過(guò)敏反應(yīng)強(qiáng)度的判定標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果見(jiàn)表7。表6 致敏并激發(fā)的全身過(guò)敏反應(yīng)表現(xiàn)組別例數(shù)致敏物質(zhì)激發(fā)物質(zhì)癥狀/只（均腹腔注射）（均靜脈注射）14PBS平衡鹽溶液PBS平衡鹽溶液無(wú)異常24%卵白蛋白%卵白蛋白3只死亡，1只出現(xiàn)抓鼻、咳嗽3次36%南美蝦蛋白溶液%南美蝦蛋白溶液5只死亡，1只抓鼻、咳嗽3次、呼吸困難、驚厥、大小便失禁44%加熱到70℃卵白蛋白溶液%加熱到70℃卵白蛋白溶液均死亡54加熱到70℃%南美蝦蛋白溶液加熱到70℃%南美蝦蛋白溶液1只死亡，均咳嗽、抓鼻3次表7 致敏并激發(fā)的全身過(guò)敏反應(yīng)評(píng)判及評(píng)分結(jié)果組 別例數(shù)陽(yáng)性數(shù)陽(yáng)性率死亡數(shù)死亡率評(píng)分/只/只　/%　/只　/%140000177。2346451003575177?！?77。4551005100177。544100125177?！钭ⅲ号cPBS平衡鹽溶液組比較，▲▲ ＜P＜，▲ P＜ %卵白蛋白溶液組比較，* ＜P＜，**P＜%蝦白蛋白溶液組比較，☆＜P＜，☆☆P＜ 蝦蛋白酶解產(chǎn)物過(guò)敏原消減效果評(píng)價(jià) 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過(guò)敏反應(yīng)表現(xiàn)豚鼠用蝦蛋白致敏后，部分豚鼠出現(xiàn)了不同程度的咳嗽、抓鼻、肌無(wú)力等癥狀，個(gè)別豚鼠出現(xiàn)死亡；用不同酶解產(chǎn)物致敏后的豚鼠反應(yīng)與蝦蛋白相似。不同酶解產(chǎn)物靜脈注射后，各組豚鼠出現(xiàn)了不同程度的咳嗽，抓鼻等癥狀，并有個(gè)別豚鼠死亡。結(jié)果見(jiàn)表8。 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過(guò)敏反應(yīng)結(jié)果評(píng)判結(jié)果參照表3 中的過(guò)敏反應(yīng)強(qiáng)度的判定標(biāo)準(zhǔn)和評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)對(duì)各組結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果見(jiàn)表9。表8 各組豚鼠致敏并激發(fā)后的全身過(guò)敏反應(yīng)表現(xiàn)組別例數(shù)致敏物質(zhì)激發(fā)物質(zhì)癥狀　/只（均腹腔注射）（均靜脈注射）06%南美蝦蛋白溶液%南美蝦蛋白溶液5只死亡，1只抓鼻、咳嗽3次、呼吸困難、驚厥、大小便失禁16%南美蝦蛋白溶液%胰蛋白酶解產(chǎn)物咳嗽、抓鼻3次、1只略有肌無(wú)力、呼吸困難26%南美蝦蛋白溶液%木瓜蛋白酶解產(chǎn)物抓鼻3次36%南美蝦蛋白溶液%菠蘿蛋白沒(méi)接產(chǎn)物抓鼻﹤3次，2只未iv已過(guò)敏死亡46%胰蛋白酶解產(chǎn)物%胰蛋白酶解產(chǎn)物抓鼻2次、1只多次咳嗽55%木瓜蛋白酶解產(chǎn)物%木瓜蛋白酶解產(chǎn)物第一只死亡，均抓鼻，一只多次咳嗽66%菠蘿蛋白酶解產(chǎn)物%菠蘿蛋白沒(méi)解產(chǎn)物多次抓鼻、咳嗽3次表9 蝦蛋白酶解產(chǎn)物過(guò)敏反應(yīng)評(píng)判及評(píng)分結(jié)果組別例數(shù)陽(yáng)性數(shù)陽(yáng)性率死亡數(shù)死亡率評(píng)分/只/只/%/只/%0655177。16400177。▲**26100177。**364217