優(yōu)血紅蛋白的提取和分離(編輯修改稿)
2025-06-22 02:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 多） 血紅蛋白 （ 90％） 兩個 α －肽鏈 兩個 β 一肽鏈 四個亞鐵血紅素基團 ： 血液有哪些成分？ ： 用雞的紅細胞提取 DNA，用豬、牛、羊的紅細胞提取血紅蛋白的原因是什么？ 雞的紅細胞具有細胞核，含有 DNA，便于進行 DNA的提??；人的紅細胞無細胞核，結構簡單，血紅蛋白含量豐富，便于提取血紅蛋白。 血紅蛋白 兩個 α －肽鏈 兩個 β 一肽鏈 四個亞鐵 血 紅素基團 每個肽鏈環(huán)繞一個 亞鐵血紅素基團， 此基團可攜帶 一分子 O2或一分子 CO2，血紅蛋白因含有 血紅素 而 呈 紅色 。 血紅蛋白的特點： (1)紅細胞的洗滌 : 去除雜質蛋白，利于后續(xù)血紅蛋白的分離純化 . 采集血樣 低速短時間離心 （速度越高和時間越長，會使白細 胞等一同沉淀，達不到分離的效果） 吸取血漿： 上層透明的黃色血漿。 鹽水洗滌： 下層暗紅色的紅細胞 +五倍體積的 ％ 的 NaCl溶液洗滌，攪拌 10min 低速 短時間 離心： 重復 5步驟三次 上清液中已沒有黃色：紅細胞洗滌干凈。 ① 目的 : ② 操作： 洗滌次數(shù)過少 ,無法除去血漿蛋白。 (2)血紅蛋白的釋放： 加蒸餾水到 原血液體積 ， 加 40％體積的甲苯 （溶解細胞膜） 置于 磁力攪拌器 攪拌 10min（加速細胞破裂） 紅細胞破裂，釋放出血紅蛋白 (3)分離血紅蛋白溶液： ① 過程 ： 將攪拌好混合液轉移到離心管內(nèi)，以 2022r/min的速度 離心 10 min。 ② 試管中溶液層次： 第 1層（最上層）： 甲苯層 （無色透明）； 第 2層（中上層）： 脂溶性物質沉淀層 （白色薄層固體）； 第 3層（中下層）： 血紅蛋白的水溶液層 （紅色透明液體）； 第 4層（最下層）： 雜質沉淀層 （暗紅色）。 ③ 分離 ： 濾紙過濾：除去脂溶性沉淀層， 分液漏斗中靜置：分出下層的 紅色透明液體 。 甲苯層 （ 無色透明） 白色薄層固體 紅色透明液體 雜質沉淀層 （ 暗紅色 ） 試管中溶液層次 (4)透 析： ① 過程： 取 1ml的血紅蛋白溶液 裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300ml的 20mmol/l的磷酸緩沖液 中（ pH為 ），透析 12h ② 目的： 除去樣品中分子量較小的雜質和離子。 或用于更換樣品的緩沖液。 20mmol/L磷酸緩沖液 1mL 透析過程動畫演示 : （ 1）凝膠色譜
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