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優(yōu)血紅蛋白的提取和分離-wenkub.com

2025-05-23 02:25 本頁面
   

【正文】 紅色區(qū)帶:均勻、狹窄、平整,隨著洗脫液緩慢流出;說明凝膠色譜柱裝填得很成功、分離操作也正確 紅色區(qū)帶:歪曲、散亂、變寬, 說明分離的效果不好,這與凝膠色譜柱的裝填有關(guān)。 三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價(jià) 你是否完成了對血液樣品的處理?你能描述處理后的樣品發(fā)生了哪些變化嗎? 你裝填的凝膠色譜柱是否有氣泡產(chǎn)生?你的色譜柱裝填得成功嗎?你是如何判斷的? 由于凝膠是一種半透明的介質(zhì),因此可以 在凝膠柱旁放一支與凝膠柱垂直的日光燈,檢查凝膠是否裝填得均勻。 樣品的處理: 通過洗滌紅細(xì)胞、血紅蛋白的釋放、 離心等操作收集到 血紅蛋白溶液 , 樣品的粗分離 :透析 → 去除分子量較小的雜質(zhì) 樣品的純化: 凝膠色譜法 → 除去 相對分子質(zhì)量較大 的 雜質(zhì)蛋白 純度鑒定 :聚丙烯酰胺凝膠電泳 進(jìn)行純度鑒定。 思考下面的問題: 讓血紅蛋白處在穩(wěn)定的 pH范圍內(nèi),維持結(jié)構(gòu)和功能正常。 ⑤ 收集: 待 紅色的蛋白質(zhì)接近色譜柱底端 時(shí),用試管收集流出 液,每 5ml收集一試管,連續(xù)收集 。 ④ 洗滌平衡: 連接緩沖液洗脫瓶,在 50cm高的操作壓下,用 300ml的 20mmol/L的磷酸緩沖液( pH為 ) 充分洗滌平衡 12h。 ② 凝膠的前處理: 配置凝膠懸浮液: 計(jì)算并稱取一定量的凝膠浸泡于 蒸餾水或洗脫液 中 充分溶脹后,配成 凝膠懸浮液。 ⑤ 安裝其他附屬結(jié)構(gòu)。 ② 底塞的制作: 打孔 → 挖出凹穴 → 安裝移液管頭部 → 覆蓋尼龍網(wǎng),再用100目尼龍紗包好,插到玻璃管的 一 端 。 ③ 分離 : 濾紙過濾:除去脂溶性沉淀層, 分液漏斗中靜置:分出下層的 紅色透明液體 。 鹽水洗滌: 下層暗紅色的紅細(xì)胞 +五倍體積的 % 的 NaCl溶液洗滌,攪拌 10min 低速 短時(shí)間 離心: 重復(fù) 5步驟三次 上清液中已沒有黃色:紅細(xì)胞洗滌干凈。 二、實(shí)驗(yàn)操作 樣品處理 → 粗分離 → 純化 → 純度鑒定 : (一)蛋白質(zhì)提取和分離步驟 (二)操作過程 可選用豬、牛、羊或其他脊椎動物的血液來分離血紅蛋白。SDS能與各種蛋白質(zhì)形成 蛋白質(zhì) — SDS復(fù)合物 ,SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過了蛋白質(zhì)分子 原有的電荷量 。 聚丙烯酰胺凝膠是由 單體丙烯酰胺 和 交聯(lián)劑 N,N’ 亞甲基雙丙烯酰胺 在 引發(fā)劑 和 催化劑 的作用下聚合交聯(lián)成的具有三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠。 ② 在電場的作用下,這些
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