20xx年醫(yī)學(xué)專題—第五章-抗-體-制-藥(編輯修改稿)
2024-11-16 00:46 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 定區(qū)（C）。,第二十三頁，共六十九頁。,第二十四頁，共六十九頁。,第二十五頁，共六十九頁。,第二十六頁，共六十九頁。,第二十七頁，共六十九頁。,鼠源性單克隆抗體的改造 人—鼠嵌合抗體（chimeric antibody） ：在基因水平上把鼠源性單克隆抗體的H和L鏈的V區(qū)基因分離出來，分別與人Ig的H鏈和L鏈的C區(qū)基因連接，即成為人—鼠嵌合抗體的H和L鏈基因，再共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞，就能表達(dá)出完整的Chimeric Antibody. 改型抗體(Reshaping antibody)：Ig分子中參與構(gòu)成抗原結(jié)合部位的區(qū)域是 H和L鏈 V區(qū)中的互補性決定區(qū) (CDR區(qū))。如果用鼠源性單克隆抗體的CDR序列(x249。li232。)替換人 Ig分子中的CDR序列(x249。li232。)，則可使人的 Ig分子具有鼠源性單克隆抗體的抗原結(jié)合特異性?？贵w分子中鼠源部分只占很小比例，可基本消除免疫源性。這種改型抗體也稱CDR移植抗體 (CDR grafting antibody)。 小分子抗體：基因工程小分子抗體僅表達(dá)鼠源性單克隆抗體的V區(qū)片段，其相對分子質(zhì)量僅為原抗體的1/80~1/3。 (1) Fab片段抗體：VH+CH1 (3)單鏈抗體：VHLinkerVL (2) FV抗體：VH+VL (4)單域抗體：VH或VL （5）最小識別單位（MRU）：單個CDR區(qū)構(gòu)成,第二十八頁，共六十九頁。,雙功能抗體：雙特異性抗體(bispecific antibody,BsAb)。是一種非天然性抗體，其結(jié)合抗原的兩個臂具有不同的特異性。 抗體融合蛋白：從廣義講應(yīng)屬于雙功能抗體范疇。是20世紀(jì)(sh236。j236。)90年代發(fā)展的研究領(lǐng)域。類型如下： （1）配基—配基型融合蛋白，如 CD4Fcγ. （2）配基—Ig型嵌合抗體，如 IL2Ig （3）配基—FV型嵌合蛋白，如 CD4FVCD3 (4) 受體—FV型融合蛋白 （5）酶—抗體型融合蛋白（abeneyme,抗體酶）,第二十九頁，共六十九頁。,第三節(jié) 基因工程(jīyīn gōngch233。ng)抗體和抗體工程,抗體研究的三個階段： ①以1890年Behring發(fā)現(xiàn)白喉抗毒素為代表，其特點是用抗原免疫動物來獲得多克隆抗體； ②以1975年K246。hler創(chuàng)建雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗體為代表； ③以1994年Winter 以基因工程方法制備抗體為代表。它是抗體研究領(lǐng)域的一次技術(shù)革命，它不用人工免疫動物和細(xì)胞融合技術(shù)，完全用基因工程技術(shù)制備人源性抗體，而且還能利用基因轉(zhuǎn)移和表達(dá)技術(shù)，通過細(xì)菌發(fā)酵或轉(zhuǎn)基因動物或轉(zhuǎn)基因植物大規(guī)模生產(chǎn)(shēngchǎn)抗體。在此基礎(chǔ)上發(fā)展成抗體工程。他創(chuàng)建了噬菌體抗體庫（Repertoire of antibodies displayed on phages）技術(shù),克服了人體不能隨意免疫的缺點，用人外周血制備抗體文庫，從而獲得人源性基因工程抗體。,第三十頁，共六十九頁。,一、噬菌體抗體庫技術(shù)的基本(jīběn)方法 獲取目的基因 抗體庫技術(shù)的載體： 淘篩（panning）： 表達(dá)與鑒定：。,第三十一頁，共六十九頁。,第三十二頁，共六十九頁。,第三十三頁，共六十九頁。,第三十四頁，共六十九頁。,第三十五頁，共六十九頁。,Western Blotting免疫(miǎny236。)印跡,與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如(l236。r)硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。,第三十六頁，共六十九頁。,二、噬菌體抗體庫技術(shù)的特點 模擬天然全套抗體庫：抗體文庫可以達(dá)到或超過1011庫容，所以能包含B細(xì)胞全部克隆。建庫的外源基因來
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