血脂及血漿脂蛋白檢驗(yàn)(編輯修改稿)
2024-11-04 07:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 血清 0.02 標(biāo)準(zhǔn)液 0.02 蒸餾水 0.02 抽提液 2.5 2.5 2.5 0.04mol/L H2SO4 0.5 0.5 0.5 加H2SO4時(shí)邊加邊搖，使其充分混勻，靜置分層后分別準(zhǔn)確吸取上清液于另外3支試管中 上清液 0.3 0.3 0.3 造化劑 1.0 1.0 1.0 混勻，在56℃恒溫水浴箱中保溫5min 氧化劑 1.0 1.0 1.0 顯色劑 1.0 1.0 1.0,第四十頁，共九十四頁。,混勻后，置60 ℃ 水浴20min，取出冷卻。用分光光度計(jì)在波長 415nm處，空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。 計(jì)算 測(cè)定管吸光度 血清三酰酯甘油〔mmol/L〕= 標(biāo)準(zhǔn)(biāozhǔn)液濃度〔mmol/L〕 標(biāo)準(zhǔn)管吸光度 參考范圍 0.56~1.70mmol/L,第四十一頁，共九十四頁。,本卷須知,1.每加一次試劑需搖勻。 2.皂化、氧化與顯色的溫度和時(shí)間(sh237。jiān)對(duì)吸光度均有影響，因此，每批標(biāo)本都需要做標(biāo)準(zhǔn)管。 3.以血漿作標(biāo)本時(shí)，應(yīng)注意抗凝劑的影響，通常用EDTANa2. 4.標(biāo)本應(yīng)及時(shí)別離，無論血清、血漿。,第四十二頁，共九十四頁。,(二)酶法,磷酸甘油氧化酶法〔GPOPAP法〕 原理(yu225。nlǐ) TG + 3H2O LPL 甘油 + 3脂肪酸 甘油 + ATP GK 磷酸甘油 + ADP 磷酸甘油 + O2 GPO 磷酸二羥丙酮 + H2O2 2 H2O2 + 4AAP+4氯酚 POD 紅色醌類化合物 + 4H2O GOP、4AAP、4氯酚三者合稱PAP，故本法稱GPOPAP法,,第四十三頁，共九十四頁。,試劑與器材 三酰酯甘油測(cè)定酶試劑 三酰酯甘油水溶性標(biāo)準(zhǔn)液 器材 試管(sh236。guǎn)、刻度吸管、微量加樣器、分光光度計(jì)、 37 ℃恒溫水浴箱。,第四十四頁，共九十四頁。,實(shí)驗(yàn)(sh237。y224。n)操作,取3支試管(sh236。guǎn)，按下表操作,第四十五頁，共九十四頁。,混勻后，置37 ℃ 水浴15min，用分光光度計(jì)在波長500nm處， 空白管調(diào)零，讀取各管吸光度。 計(jì)算 測(cè)定管吸光度 血清三酰酯甘油〔mmol/L〕= 標(biāo)準(zhǔn)液濃度〔mmol/L〕 標(biāo)準(zhǔn)管吸光度 參考(cānkǎo)范圍 0.56~1.70mmol/L,第四十六頁，共九十四頁。,本卷須知,標(biāo)本必須(b236。xū)新鮮，4 ℃放置不宜超過3天，時(shí)間過長，游離 甘油升高。 需用空腹血清作標(biāo)本。 11.1mmol/L,需做稀釋。,第四十七頁，共九十四頁。,臨床意義,TG隨年齡增長而上升趨勢(shì)，體重超標(biāo)往往偏高。 正常成人空腹脂肪餐〔脂肪1g/kg體重〕后，2~4h內(nèi)血清 混濁程度及TG值頂峰，8h后恢復(fù)正常。脂肪去除率較差者， 去除(qīngch)時(shí)間延長。 病理性升高 見于原發(fā)性高脂血癥、動(dòng)脈粥樣硬化、脂肪 肝、其他肝病、糖尿病、腎病綜合癥、胰腺炎、甲功能減退、 妊娠等。 病理性降低 見于原發(fā)性b脂蛋白缺乏癥，肝功能嚴(yán)重低下、 甲功能亢進(jìn)、腎上腺皮質(zhì)功能減退等。,第四十八頁，共九十四頁。,第四節(jié) 血清(xu232。qīng)高密度脂蛋白膽固醇測(cè)定,第四十九頁，共九十四頁。,概述(ɡ224。i sh249。),血清高密度脂蛋白〔HDL〕是密度最大的脂蛋白，由蛋白質(zhì)、磷脂、膽固醇及其酯、三酯酰甘油組成。 HDL中主要脂類是磷脂，以磷脂酰膽堿最多，膽固醇是HDL中含量占第二位的脂類，酯化和游離的膽固醇之比約3：1 HDL所含的蛋白質(zhì)主要是ApoAⅠ和ApoAⅡ，其中以ApoAⅠ更重要。 注意(zh249。 y236。)： 雖然磷脂局部比膽固醇含量多，但測(cè)定膽固醇比測(cè)定磷脂更 容易，故常以測(cè)定HDLC含量代表HDL水平。,第五十頁，共九十四頁。,高密度脂蛋白測(cè)定(c232。d236。ng),超速離心法 凝膠過濾層析(c233。nɡ xī)法 免疫化學(xué)法 電泳法 沉淀法 臨床實(shí)驗(yàn)室常用：沉淀法中的林鎢酸鎂法,第五十一頁，共九十四頁。,林鎢酸鎂法,原理(yu225。nlǐ) 用磷鎢酸與鎂離子作沉淀劑，選擇性沉淀LDL和VLDL 〔主要含ApoB〕，上清液中只含HDL，測(cè)定上清液中 膽固醇含量。,第五十二頁，共九十四頁。,試劑與器材 沉淀劑 酶試劑 參考血清 器材 試管(sh236。guǎn)、刻度吸管、微量加樣器、分光光度計(jì)、 37 ℃恒溫水浴箱。,第五十三頁，共九十四頁。,實(shí)驗(yàn)(sh237。y224。n)操作,HDL的提取(t237。qǔ) 于小離心管中加血清200uI和沉淀劑200uI，混勻， 室溫〔20 ℃，不得高于30℃ 〕放置15min，然后3000rpm離心 15min。 取3支試管，按下表操作,第五十四頁，共九十四頁。,混勻，置于37℃水浴箱，放置15min，以空白管調(diào)零點(diǎn)，在 500nm波長處進(jìn)行比色，分別讀取各管的吸光度。 計(jì)算 測(cè)定管吸光度 HDLC〔mmol/L〕= 定值血清膽固醇濃度〔mmol/L〕 標(biāo)準(zhǔn)管吸光度 參考(cānkǎo)范圍 成人男性 1.16~1.42 mmol/L 成人女性 1.29~1.55 mmol/L,第五十五頁，共九十四頁。,本卷須知,血清嚴(yán)重(y225。nzh242。ng)混濁時(shí)IDL和VLDL沉淀不完全，此時(shí)用生理鹽水將血清做1：1稀釋后再行沉淀，測(cè)定結(jié)果乘以2。 血清中高膽紅素、維生素C、溶血都會(huì)有影響。,第五十六頁，共九十四頁。,【臨床意義】,HDLC與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān) HDLC低于0.9 mmol/L 是冠心病危險(xiǎn)因素 HDLC大于1.55mmol/L被認(rèn)為是冠心病的“負(fù)〞危險(xiǎn)因素 HDLC下降 多見于腦血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。 HDLC增高 往往伴以低HDLC，肥胖者的HDLC也多偏低。吸煙可使HDLC下降，適量飲酒、長期(ch225。ngqī)體力勞動(dòng)和運(yùn)動(dòng)會(huì)使HDLC升高。,第五十七頁，共九十四頁。,第五節(jié) 血清(xu232。qīng)低密度脂蛋白膽固醇測(cè)定,第五十八頁，共九十四頁。,概述(ɡ224。i sh249。),低密度脂蛋白〔LDL〕由極低密度脂蛋
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