【文章內(nèi)容簡介】 lu242。)數(shù)=(M1+M2+……MN)/N M1——1號培養(yǎng)皿菌落數(shù) N ——培養(yǎng)皿總數(shù) 結(jié)果評定—同浮游菌,第五十五頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,外表微生物 外表微生物測定是對環(huán)境、設(shè)備和人員的外表微生物進行監(jiān) 測，方法包括(bāoku242。)接觸碟法和擦拭法。 接觸碟法——將充滿規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基的接觸碟對規(guī)那么外表或平面進行取樣，然后置適宜的溫度下培養(yǎng)一定時間并計數(shù)，每碟取樣面積約為25 cm2，微生物計數(shù)結(jié)果以cfu/碟報告； 擦拭法——接觸碟法的補充，用于不規(guī)那么外表的微生物監(jiān)測，特別是設(shè)備的不規(guī)那么外表。擦拭法是采用適宜尺寸的無菌模板確定擦拭的面積，取樣后，將拭子置適宜的緩沖液或培養(yǎng)基中，充分振蕩，然后采用適宜的方法計數(shù)，每個拭子取樣面積為約25 cm2，微生物計數(shù)結(jié)果以cfu/拭子報告。 接觸碟法和擦拭法采用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時間同浮游菌或沉降菌〔一般采用TSA，當(dāng)監(jiān)測結(jié)果有疑似真菌或考慮季節(jié)因素影響時，可增加SDA〕 外表菌測定應(yīng)在實驗結(jié)束后進行。,第五十六頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,推薦的藥品潔凈實驗室的監(jiān)測(jiān c232。)頻次及監(jiān)測(jiān c232。)工程,第五十七頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,如果出現(xiàn)連續(xù)超過糾偏限和警戒限、關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染微生物存在、空氣凈化系統(tǒng)進行任何重大的維修、消毒規(guī)程改變、設(shè)備有重大維修或增加(zēngjiā)、潔凈室〔區(qū)〕結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動、引起微生物污染的事故、日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)時應(yīng)考慮修改監(jiān)測頻次。,第五十八頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,第五十九頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,偏差處理 當(dāng)微生物監(jiān)測結(jié)果超出警戒限度和糾偏限度時，應(yīng)當(dāng)按照偏差處理規(guī)程進行報告、記錄、調(diào)查、處理以及采取糾正措施，并對糾正措施的有效性進行評估。 微生物鑒定 建議對受控環(huán)境收集到的微生物進行適當(dāng)水平的鑒定 有助于預(yù)期常見菌群。 有助于評估清潔/消毒方法(fāngfǎ)、消毒劑的有效性。 有助于污染源的調(diào)查，輔助OOS調(diào)查。,第六十頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,微生物鑒定 通那么9205“藥品潔凈(ji233。j236。ng)實驗室微生物監(jiān)測和控制指導(dǎo)原那么〞建議對潔凈(ji233。j236。ng)室和其他受控環(huán)境別離到的微生物進行鑒定，以掌握環(huán)境微生物污染情況，有助于污染調(diào)查。 無菌試驗結(jié)果陽性和無菌生產(chǎn)模擬工藝〔如培養(yǎng)基灌裝〕失敗時，對檢出的微生物鑒定至少到達種屬水平，必要時到達菌株水平。,第六十一頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,微生物鑒定 借助現(xiàn)有的分類系統(tǒng)，通過對未知微生物的特征測定，對其進行細菌(x236。jūn)、酵母菌和霉菌大類的區(qū)分，或?qū)?、種及菌株水平確定的過程。,第六十二頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,鑒定(ji224。nd236。ng)程序 —別離純化 —初篩試驗 —表型微生物鑒定 —基因型微生物鑒定〔16SrDNA、 18SrDNA、聚合酶鏈式反響、DNADNA雜交、焦磷酸測序、多位點序列分型等 〕,第六十三頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,別離純化 純培養(yǎng)(p233。iyǎng)物是指來源于同一單細胞的細胞群體 平板劃線法是最常用的技術(shù),第六十四頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,初篩試驗(sh236。y224。n)〔革蘭氏染色、芽孢染色、鏡檢觀察細胞形態(tài)、重要的生化反響〕 重要的生化篩選試驗 —氧化酶試驗：氧化酶陽性：不發(fā)酵的革蘭氏陰性桿菌、 氧化酶陰性：腸道菌 —過氧化氫酶試驗 陽 性：葡萄球菌 陰性：鏈球菌 —凝固酶試驗 陽 性：致病性 陰性：非致病性,第六十五頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,表型微生物鑒定 —培養(yǎng)物 〔菌落形態(tài)、菌落顏色、形狀、大小和產(chǎn)色素〕 —形態(tài)學(xué)〔細胞形態(tài)、大小、形狀、鞭毛、內(nèi)容物、革蘭氏染色、芽孢 和抗酸染色、孢子形成模式〕 —生理學(xué)〔氧氣耐受性、pH值范圍、最適溫度和范圍、耐鹽性〕 —生化反響〔碳源利用、碳水化合物的氧化或發(fā)酵、酶的模式〕 —抑制性〔膽鹽耐受性、抗生素敏感性、染料耐受性〕 —血清學(xué)〔凝集反響、熒光抗體〕 —化學(xué)分類〔脂肪酸構(gòu)成、微生物霉素、全細胞組分(zǔf232。n)〕 —生態(tài)學(xué)〔微生物來源〕,第六十六頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,基因型微生物鑒定 —微生物由于特殊環(huán)境的影響，表型特征常發(fā)生變異，傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定手段(shǒudu224。n)難以得到種水平結(jié)果，以其核酸序列為鑒定根底，從遺傳進化角度說明微生物種群之間的分類學(xué)關(guān)系 —〔16SrDNA、 18SrDNA、聚合酶鏈式反響、DNADNA雜交、焦磷酸測序、多位點序列分型等 〕,第六十七頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,第六十八頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,第六十九頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,—?伯杰氏系統(tǒng)細菌學(xué)手冊?對細菌的分類是通過遺傳物質(zhì)的分析比較來實現(xiàn)。 —基因鑒定法不但(b249。d224。n)技術(shù)需要保證，還需要昂貴的分析設(shè)備和材料，通常在關(guān)鍵微生物調(diào)查中使用，如產(chǎn)品不合風(fēng)格查，假設(shè)使用，方法必須經(jīng)過確認 鑒定方法確實認包括：準確度、專屬性、重現(xiàn)性、靈敏度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值,第七十頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,隔離器 分類：硬倉、軟倉 結(jié)構(gòu)：空氣處理系統(tǒng)〔高效空氣過濾器〕 傳遞接口及傳遞門 滅菌設(shè)備(sh232。b232。i)〔一般為過氧化氫、過氧乙酸等滅菌〕 配套設(shè)備與輔助設(shè)備,第七十一頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,第七十二頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,第七十三頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,隔離系統(tǒng)的驗證 操作驗證 隔離器完整性驗證 滅菌驗證 滅菌循環(huán)(xnhu225。n)驗證 隔離器內(nèi)部潔凈度驗證 儀器儀表驗證,第七十四頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,藥品潔凈實驗室怎樣實現(xiàn)微生物的良好控制？處于受控狀態(tài)？ 硬件設(shè)施的滿足 潔凈室的驗收(y224。nshōu)應(yīng)符合標準，換氣次數(shù)，送風(fēng)量、環(huán)境溫濕度等等 良好的環(huán)境管理， 清潔、消毒程序，并嚴格執(zhí)行，選擇適當(dāng)?shù)南痉绞?，合理的消毒劑，清潔消毒頻率。監(jiān)測到位。 減少人員干預(yù)，人是最大的污染源，標準人員進出潔凈區(qū)的程序，嚴格按照A/B潔凈區(qū)的要求做好人員防護。做好人員培訓(xùn)。 控制物流的干擾，做好物流的消毒、外外表滅菌工作，減少物流的污染 應(yīng)當(dāng)對監(jiān)測數(shù)據(jù)進行分析、回憶，通過收集的數(shù)據(jù)和趨勢分析，總結(jié)和評估潔凈實驗室是否受控。,第七十五頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,消毒劑的選擇(xuǎnz233。)與使用 微生物的抗力 從小到大排列一般為： —細菌繁殖體 —真菌繁殖體 —真菌孢子 —病毒 —分枝桿菌 —細菌芽孢,第七十六頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,消毒劑選擇、使用 將消毒劑種類分為四個作用水平 〔1〕滅菌：可殺滅一切微生物〔包括芽孢〕到達滅菌保證水平的方法。甲醛、戊二醛、環(huán)氧乙烷、過氧乙酸、過氧化氫(ɡu242。 yǎnɡ hu224。 qīnɡ)等。 〔2〕高水平消毒法：可以殺滅各種微生物，對芽孢殺滅到達消毒效果的方法。這類消毒方法應(yīng)能殺滅一切細菌繁殖體〔包括結(jié)核分枝桿菌〕、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細菌芽孢。用含氯、二氧化氯、過氧乙酸、過氧化氫、含溴消毒劑、臭氧、二溴海因等甲基乙內(nèi)酰脲類化合物和一些復(fù)配的消毒劑等消毒因子進行消毒的方法。 〔3〕中水平消毒法：殺滅和去除細菌芽孢以外的各種病原微生物的消毒方法，碘類消毒劑(碘伏、碘酊等)、醇類、醇類和氯已定的復(fù)方，醇類和季銨鹽類化合物的復(fù)方、酚類等消毒劑進行消毒的方法。 〔4〕低水平消毒法：只能殺滅細菌繁殖體〔分枝桿菌除外〕和親脂病毒的化學(xué)消毒劑。如單鏈季銨鹽類消毒劑(苯扎溴銨等)、雙胍類消毒劑如氯己定、植物類消毒劑和汞、銀、銅等金屬離子消毒劑。,第七十七頁，共一百二十一頁。,第七十八頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,消毒劑的配制： 按供給商的使用說明配制和儲存。 A/B級區(qū)域應(yīng)使用經(jīng)除菌過濾的消毒劑。 盡量高級別的水配制，純化水、滅菌水、注射用水,配好后放置一會。 影響消毒劑效力的因素： 濃度、接觸時間、 pH值、溫度(wēnd249。)、微生物的數(shù)量和種類,第七十九頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,消毒劑的選擇原理 根據(jù)市售消毒劑的抗菌譜、根據(jù)區(qū)域等級，A/B級選用殺孢子劑，其他區(qū)域可配合使用其他水平的消毒劑，定期使用殺孢子劑。 根據(jù)使用說明，標準使用濃度和作用時間 根據(jù)待消毒外表的材質(zhì)。如對設(shè)備外表的腐蝕程度對操作者的平安性?！矚埩?c225。nli)、腐蝕、粘膜刺激〕 和清潔劑，其他消毒劑的相容性 選用多種類的消毒劑，交替使用，防止微生物對其產(chǎn)生耐受性。,第八十頁，共一百二十一頁。,潔凈(ji233。j236。ng)實驗室,幾種空間滅菌方法： 熏蒸滅菌概念 1980年收錄于USP，在一定溫度(wēnd249。)和壓力的密閉條件下，化學(xué)消毒劑轉(zhuǎn)為氣態(tài)滲透到生物體內(nèi)，使生物致死。有助于降低潔凈區(qū)死角的微生物污染。 甲醛：對所有微生物都有殺滅作用。殺孢子劑 通常推薦12小時滅菌時間，排氣、通風(fēng)至少24小時，過程漫長，有致癌作用，現(xiàn)在已很少使用 臭氧：對所有微生物都有殺滅作用。殺孢子劑