【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 lu242。)數(shù)=(M1+M2+……MN)/N M1——1號(hào)培養(yǎng)皿菌落數(shù) N ——培養(yǎng)皿總數(shù) 結(jié)果評(píng)定—同浮游菌,第五十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,外表微生物 外表微生物測(cè)定是對(duì)環(huán)境、設(shè)備和人員的外表微生物進(jìn)行監(jiān) 測(cè)，方法包括(bāoku242。)接觸碟法和擦拭法。 接觸碟法——將充滿規(guī)定的瓊脂培養(yǎng)基的接觸碟對(duì)規(guī)那么外表或平面進(jìn)行取樣，然后置適宜的溫度下培養(yǎng)一定時(shí)間并計(jì)數(shù)，每碟取樣面積約為25 cm2，微生物計(jì)數(shù)結(jié)果以cfu/碟報(bào)告； 擦拭法——接觸碟法的補(bǔ)充，用于不規(guī)那么外表的微生物監(jiān)測(cè)，特別是設(shè)備的不規(guī)那么外表。擦拭法是采用適宜尺寸的無(wú)菌模板確定擦拭的面積，取樣后，將拭子置適宜的緩沖液或培養(yǎng)基中，充分振蕩，然后采用適宜的方法計(jì)數(shù)，每個(gè)拭子取樣面積為約25 cm2，微生物計(jì)數(shù)結(jié)果以cfu/拭子報(bào)告。 接觸碟法和擦拭法采用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度和時(shí)間同浮游菌或沉降菌〔一般采用TSA，當(dāng)監(jiān)測(cè)結(jié)果有疑似真菌或考慮季節(jié)因素影響時(shí)，可增加SDA〕 外表菌測(cè)定應(yīng)在實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行。,第五十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,推薦的藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室的監(jiān)測(cè)(jiān c232。)頻次及監(jiān)測(cè)(jiān c232。)工程,第五十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,如果出現(xiàn)連續(xù)超過(guò)糾偏限和警戒限、關(guān)鍵區(qū)域內(nèi)發(fā)現(xiàn)有污染微生物存在、空氣凈化系統(tǒng)進(jìn)行任何重大的維修、消毒規(guī)程改變、設(shè)備有重大維修或增加(zēngjiā)、潔凈室〔區(qū)〕結(jié)構(gòu)或區(qū)域分布有重大變動(dòng)、引起微生物污染的事故、日常操作記錄反映出傾向性的數(shù)據(jù)時(shí)應(yīng)考慮修改監(jiān)測(cè)頻次。,第五十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,第五十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,偏差處理 當(dāng)微生物監(jiān)測(cè)結(jié)果超出警戒限度和糾偏限度時(shí)，應(yīng)當(dāng)按照偏差處理規(guī)程進(jìn)行報(bào)告、記錄、調(diào)查、處理以及采取糾正措施，并對(duì)糾正措施的有效性進(jìn)行評(píng)估。 微生物鑒定 建議對(duì)受控環(huán)境收集到的微生物進(jìn)行適當(dāng)水平的鑒定 有助于預(yù)期常見菌群。 有助于評(píng)估清潔/消毒方法(fāngfǎ)、消毒劑的有效性。 有助于污染源的調(diào)查，輔助OOS調(diào)查。,第六十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,微生物鑒定 通那么9205“藥品潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室微生物監(jiān)測(cè)和控制指導(dǎo)原那么〞建議對(duì)潔凈(ji233。j236。ng)室和其他受控環(huán)境別離到的微生物進(jìn)行鑒定，以掌握環(huán)境微生物污染情況，有助于污染調(diào)查。 無(wú)菌試驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性和無(wú)菌生產(chǎn)模擬工藝〔如培養(yǎng)基灌裝〕失敗時(shí)，對(duì)檢出的微生物鑒定至少到達(dá)種屬水平，必要時(shí)到達(dá)菌株水平。,第六十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,微生物鑒定 借助現(xiàn)有的分類系統(tǒng)，通過(guò)對(duì)未知微生物的特征測(cè)定，對(duì)其進(jìn)行細(xì)菌(x236。jūn)、酵母菌和霉菌大類的區(qū)分，或?qū)佟⒎N及菌株水平確定的過(guò)程。,第六十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,鑒定(ji224。nd236。ng)程序 —?jiǎng)e離純化 —初篩試驗(yàn) —表型微生物鑒定 —基因型微生物鑒定〔16SrDNA、 18SrDNA、聚合酶鏈?zhǔn)椒错?、DNADNA雜交、焦磷酸測(cè)序、多位點(diǎn)序列分型等 〕,第六十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,別離純化 純培養(yǎng)(p233。iyǎng)物是指來(lái)源于同一單細(xì)胞的細(xì)胞群體 平板劃線法是最常用的技術(shù),第六十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,初篩試驗(yàn)(sh236。y224。n)〔革蘭氏染色、芽孢染色、鏡檢觀察細(xì)胞形態(tài)、重要的生化反響〕 重要的生化篩選試驗(yàn) —氧化酶試驗(yàn)：氧化酶陽(yáng)性：不發(fā)酵的革蘭氏陰性桿菌、 氧化酶陰性：腸道菌 —過(guò)氧化氫酶試驗(yàn) 陽(yáng) 性：葡萄球菌 陰性：鏈球菌 —凝固酶試驗(yàn) 陽(yáng) 性：致病性 陰性：非致病性,第六十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,表型微生物鑒定 —培養(yǎng)物 〔菌落形態(tài)、菌落顏色、形狀、大小和產(chǎn)色素〕 —形態(tài)學(xué)〔細(xì)胞形態(tài)、大小、形狀、鞭毛、內(nèi)容物、革蘭氏染色、芽孢 和抗酸染色、孢子形成模式〕 —生理學(xué)〔氧氣耐受性、pH值范圍、最適溫度和范圍、耐鹽性〕 —生化反響〔碳源利用、碳水化合物的氧化或發(fā)酵、酶的模式〕 —抑制性〔膽鹽耐受性、抗生素敏感性、染料耐受性〕 —血清學(xué)〔凝集反響、熒光抗體〕 —化學(xué)分類〔脂肪酸構(gòu)成、微生物霉素、全細(xì)胞組分(zǔf232。n)〕 —生態(tài)學(xué)〔微生物來(lái)源〕,第六十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,基因型微生物鑒定 —微生物由于特殊環(huán)境的影響，表型特征常發(fā)生變異，傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)鑒定手段(shǒudu224。n)難以得到種水平結(jié)果，以其核酸序列為鑒定根底，從遺傳進(jìn)化角度說(shuō)明微生物種群之間的分類學(xué)關(guān)系 —〔16SrDNA、 18SrDNA、聚合酶鏈?zhǔn)椒错?、DNADNA雜交、焦磷酸測(cè)序、多位點(diǎn)序列分型等 〕,第六十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,第六十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,第六十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,—?伯杰氏系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊(cè)?對(duì)細(xì)菌的分類是通過(guò)遺傳物質(zhì)的分析比較來(lái)實(shí)現(xiàn)。 —基因鑒定法不但(b249。d224。n)技術(shù)需要保證，還需要昂貴的分析設(shè)備和材料，通常在關(guān)鍵微生物調(diào)查中使用，如產(chǎn)品不合風(fēng)格查，假設(shè)使用，方法必須經(jīng)過(guò)確認(rèn) 鑒定方法確實(shí)認(rèn)包括：準(zhǔn)確度、專屬性、重現(xiàn)性、靈敏度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值,第七十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,隔離器 分類：硬倉(cāng)、軟倉(cāng) 結(jié)構(gòu)：空氣處理系統(tǒng)〔高效空氣過(guò)濾器〕 傳遞接口及傳遞門 滅菌設(shè)備(sh232。b232。i)〔一般為過(guò)氧化氫、過(guò)氧乙酸等滅菌〕 配套設(shè)備與輔助設(shè)備,第七十一頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,第七十二頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,第七十三頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,隔離系統(tǒng)的驗(yàn)證 操作驗(yàn)證 隔離器完整性驗(yàn)證 滅菌驗(yàn)證 滅菌循環(huán)(xnhu225。n)驗(yàn)證 隔離器內(nèi)部潔凈度驗(yàn)證 儀器儀表驗(yàn)證,第七十四頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,藥品潔凈實(shí)驗(yàn)室怎樣實(shí)現(xiàn)微生物的良好控制？處于受控狀態(tài)？ 硬件設(shè)施的滿足 潔凈室的驗(yàn)收(y224。nshōu)應(yīng)符合標(biāo)準(zhǔn)，換氣次數(shù)，送風(fēng)量、環(huán)境溫濕度等等 良好的環(huán)境管理， 清潔、消毒程序，并嚴(yán)格執(zhí)行，選擇適當(dāng)?shù)南痉绞剑侠淼南緞?，清潔消毒頻率。監(jiān)測(cè)到位。 減少人員干預(yù)，人是最大的污染源，標(biāo)準(zhǔn)人員進(jìn)出潔凈區(qū)的程序，嚴(yán)格按照A/B潔凈區(qū)的要求做好人員防護(hù)。做好人員培訓(xùn)。 控制物流的干擾，做好物流的消毒、外外表滅菌工作，減少物流的污染 應(yīng)當(dāng)對(duì)監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析、回憶，通過(guò)收集的數(shù)據(jù)和趨勢(shì)分析，總結(jié)和評(píng)估潔凈實(shí)驗(yàn)室是否受控。,第七十五頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,消毒劑的選擇(xuǎnz233。)與使用 微生物的抗力 從小到大排列一般為： —細(xì)菌繁殖體 —真菌繁殖體 —真菌孢子 —病毒 —分枝桿菌 —細(xì)菌芽孢,第七十六頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,消毒劑選擇、使用 將消毒劑種類分為四個(gè)作用水平 〔1〕滅菌：可殺滅一切微生物〔包括芽孢〕到達(dá)滅菌保證水平的方法。甲醛、戊二醛、環(huán)氧乙烷、過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫(ɡu242。 yǎnɡ hu224。 qīnɡ)等。 〔2〕高水平消毒法：可以殺滅各種微生物，對(duì)芽孢殺滅到達(dá)消毒效果的方法。這類消毒方法應(yīng)能殺滅一切細(xì)菌繁殖體〔包括結(jié)核分枝桿菌〕、病毒、真菌及其孢子和絕大多數(shù)細(xì)菌芽孢。用含氯、二氧化氯、過(guò)氧乙酸、過(guò)氧化氫、含溴消毒劑、臭氧、二溴海因等甲基乙內(nèi)酰脲類化合物和一些復(fù)配的消毒劑等消毒因子進(jìn)行消毒的方法。 〔3〕中水平消毒法：殺滅和去除細(xì)菌芽孢以外的各種病原微生物的消毒方法，碘類消毒劑(碘伏、碘酊等)、醇類、醇類和氯已定的復(fù)方，醇類和季銨鹽類化合物的復(fù)方、酚類等消毒劑進(jìn)行消毒的方法。 〔4〕低水平消毒法：只能殺滅細(xì)菌繁殖體〔分枝桿菌除外〕和親脂病毒的化學(xué)消毒劑。如單鏈季銨鹽類消毒劑(苯扎溴銨等)、雙胍類消毒劑如氯己定、植物類消毒劑和汞、銀、銅等金屬離子消毒劑。,第七十七頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,第七十八頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,消毒劑的配制： 按供給商的使用說(shuō)明配制和儲(chǔ)存。 A/B級(jí)區(qū)域應(yīng)使用經(jīng)除菌過(guò)濾的消毒劑。 盡量高級(jí)別的水配制，純化水、滅菌水、注射用水,配好后放置一會(huì)。 影響消毒劑效力的因素： 濃度、接觸時(shí)間、 pH值、溫度(wēnd249。)、微生物的數(shù)量和種類,第七十九頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,消毒劑的選擇原理 根據(jù)市售消毒劑的抗菌譜、根據(jù)區(qū)域等級(jí)，A/B級(jí)選用殺孢子劑，其他區(qū)域可配合使用其他水平的消毒劑，定期使用殺孢子劑。 根據(jù)使用說(shuō)明，標(biāo)準(zhǔn)使用濃度和作用時(shí)間 根據(jù)待消毒外表的材質(zhì)。如對(duì)設(shè)備外表的腐蝕程度對(duì)操作者的平安性?！矚埩?c225。nli)、腐蝕、粘膜刺激〕 和清潔劑，其他消毒劑的相容性 選用多種類的消毒劑，交替使用，防止微生物對(duì)其產(chǎn)生耐受性。,第八十頁(yè)，共一百二十一頁(yè)。,潔凈(ji233。j236。ng)實(shí)驗(yàn)室,幾種空間滅菌方法： 熏蒸滅菌概念 1980年收錄于USP，在一定溫度(wēnd249。)和壓力的密閉條件下，化學(xué)消毒劑轉(zhuǎn)為氣態(tài)滲透到生物體內(nèi)，使生物致死。有助于降低潔凈區(qū)死角的微生物污染。 甲醛：對(duì)所有微生物都有殺滅作用。殺孢子劑 通常推薦12小時(shí)滅菌時(shí)間，排氣、通風(fēng)至少24小時(shí)，過(guò)程漫長(zhǎng)，有致癌作用，現(xiàn)在已很少使用 臭氧：對(duì)所有微生物都有殺滅作用。殺孢子劑