【文章內(nèi)容簡介】 ，最早使用冷水、熱水浸提。劉世民等 [4]研究了洋蔥中類黃酮化合物的提取方法，結果表明： 90℃ 熱水浸提40min，物料比 1:3，類黃酮物質(zhì)浸出量最大，測定結果重現(xiàn)性好。黎乃維等 [5]用熱水提取法對料液比、提取溫度、浸提時間等因素進行正交試驗。實驗研究表明：用6 倍水， pH= 在水溫 60℃ 條件下浸提 2 小時，類黃酮化合物提取含量可達。水提法成本低，操作工藝簡單是較早運用于洋蔥類黃酮化合物提取的方法，但是由于熱水浸提易溶于水的雜質(zhì)較多，后處理較復雜，提取效率不高 ，濱州學院本科畢業(yè)設計（論文） 2 隨著科技的發(fā)展，此法已不經(jīng)常使用 [6]。 有機溶劑浸提法 根據(jù)洋蔥黃酮化合物的性質(zhì)及雜質(zhì)的溶解性，大多數(shù)甙類、甙元等適合用極性較強的乙醇或甲醇提取，因甲醇有毒成本較高，實驗室一般用乙醇對最佳提取工藝進行探討。王卓慧等 [7]對洋蔥中總黃酮的乙醇提取工藝進行了研究。研究結果表明：乙醇冷浸法從洋蔥中提取總類黃酮的最佳條件為 6 倍量的 50%乙醇提取 3 次，每次3d。在此條件下提取類黃酮化合物的質(zhì)量分數(shù)為 。影響因素的大小依次為：溶媒用量、提取次數(shù)、乙醇體積分數(shù)、提取時間。張強等 [8]對洋蔥 類黃酮化合物乙醇提取法進行了研究。實驗結果表明：乙醇濃度 70%，料液比 20： 1，溫度 70℃條件下浸提 小時，類黃酮化合物提取率最大為 %。乙醇浸提法較水提法效率較高，成本低是工業(yè)上常用的提取方法 [9]。 酶解法 洋蔥表皮的細胞壁主要成分是纖維素，用水、有機溶劑提取時，細胞壁的阻礙嚴重影響了提取效率，而酶是生物催化劑，能夠降低化學反應的活化能，通過酶解細胞壁使其改變細胞壁的通透性，加速細胞內(nèi)物質(zhì)的溶出，而且可以將油溶性的類黃酮轉化為易溶于水的糖苷類而有利于提取，在溫和的反應條件下，既縮短了 浸提時間，又增加了提取量，從而提高提取效率 [10]。因此，酶解法是洋蔥類黃酮化合物比較適宜的提取方法。但該技術同時存在著一定的局限性。酶的最佳溫度及最佳 pH值往往在一個很小的范圍內(nèi)，為使酶的活性提高到最大值，必須嚴格控制酶反應時的溫度及 pH值，溫度、 pH值等輕微改變和抑制劑 (如 Cu2 +、 Al3 +、 Hg2 +等 )的存在，都可能使酶的活性大大降低，因此對實驗設備有較高的要求；酶提取法用于工業(yè)化的中藥提取中還需綜合考慮酶濃度、底物濃度、抑制劑和激動劑等對提取物有何影響 [11]。 超聲波提取法 超聲波 提取法的原理是利用超聲波在液體中產(chǎn)生的 ―空化效應 ‖利用機械振動破壞植物細胞壁和細胞膜結構，從而增加細胞內(nèi)物質(zhì)的釋放與溶出，超聲波使提取液不斷震蕩，加速溶劑的擴散，而且超聲波具有熱效應，可縮短提取時間，提高提取濱州學院本科畢業(yè)設計（論文） 3 率 [12]。侯冬巖等 [13]利用超聲波法以 80%乙醇，在 10℃ 水浴中超聲提取 3次，每次 5分鐘，合并濾液旋轉蒸發(fā)，得提取率 %。白明生等 [14]利用超聲波強化提取類黃酮化合物，采用正交試驗法，確定最佳提取條件為 70%的乙醇濃度，料液比 1:20，超聲溫度 30℃ ，超聲時間 15分鐘，在此條件下類黃酮化合物得 率可達 %。超聲提取可極大地提高提取效率，節(jié)約溶劑，避免高溫對提取成分的影響，與常規(guī)提取法相比，具有提取時間短、產(chǎn)率高、無需加熱等優(yōu)點。值得注意的是超聲時間不宜過長，否則提取量反而下降，原因可能是由于超聲處理時間過長，會使提取出的黃酮分解而使提取率下降。 微波提取法 微波提取是一種非電離的電磁輻射，是被輻射物中的極性分子。在電磁場中快速轉向及定向排列，從而產(chǎn)生撕裂和相互摩擦引起發(fā)熱，同時保證能量的快速傳遞和充分利用。微波提取具有現(xiàn)則性高，操作時間短容積耗量少，有效成分得率高的特點 [15]。高 岐 [16]利用微波加熱溶出代替常規(guī)回流提取方法 ， 對紅皮洋蔥樣品中類黃酮化合物進行了微波溶出 —分光光度法測定 ， 與常規(guī)方法做了對照 ， 并討論了微波功率、微波時間、浸提劑濃度、料液比等因素對溶出結果的影響 ， 通過正交試驗 ，確定了最佳工藝條件為：微波功率 900W， 微波提取時間 5min， 提取溶劑 80 %乙醇 ，料液比為 1:10。郭梅等 [17]利用微波輔助提取洋蔥中類黃酮化合物，采用正交試驗優(yōu)化工藝條件。結果表明：影響洋蔥類黃酮化合物得率的主次因素順序為微波萃取時間＞微波功率＞乙醇體積分數(shù)＞料液比。最佳的提取工藝參數(shù)為微波功 率 960W、萃取時間 60s、乙醇體積分數(shù) 70%、料液比 1:60。在此條件下，類黃酮化合物的得率為%。 該法可以大大地縮短類黃酮化合物的溶出時間 ， 提高分析測定效率，節(jié)省人力物力 ， 操作簡便 ， 宜于批量樣品的溶出測定 ， 結果令人滿意 [18]。 洋蔥類黃酮化合物的結構分析及藥理活性 結構分析 類黃酮化合物廣泛存在于植物中，具有多種生物活性，是一類重要的天然產(chǎn)物。洋蔥中類黃酮化合物多存在于鱗莖及最外表皮中，是槲皮素及其衍生物，主要有黃酮類、黃酮醇類和花色素 (基本結構式見圖 1)等。目前 Lytn等人 [19]從洋蔥中分離出 9濱州學院本科畢業(yè)設計（論文） 4 種類黃酮化合物。類黃酮主要有 5,7,4’–三羥黃酮、 3,5,7,3’,4’,5’–六羥基黃酮以及黃酮糖苷等 [20]。王大力等 [21]利用高效液相色譜 質(zhì)譜聯(lián)用技術 (HPLCMS)鑒定洋蔥樣品中類黃酮化合物，結果表明為槲皮素糖苷。 Michael [22]研究了洋蔥中總黃酮的組成，結果表明洋蔥外表皮中以槲皮素為主的黃酮類物質(zhì)的含量最高。黃酮醇類有山奈酚、槲皮素及它們與葡萄糖組成的單糖苷和二糖苷至多糖苷 [23]。迄今為止，己經(jīng)有十六種黃酮醇從洋蔥中被分離出來，包括槲皮素、異鼠李黃素 、山奈酚的糖苷配基、糖基化衍生物等?；ㄉ仡愔饕怯苫ㄇ嗨?、花魁素與葡萄糖組成的葡萄糖苷 [24]。 Fossen T 等 [25]首次在洋蔥中發(fā)現(xiàn)了 2 種天竺葵素衍生物和花青素 3,5二葡萄糖苷，而花色苷在糖 3位被糖或酸取代的化合物在蔥屬以外植物中未見報道。 圖 1 洋蔥類黃酮化合物的基本結構式 藥理活性 類黃酮化合物是廣泛存在于植物中的具有多種生物活性的天然產(chǎn)物，越來越多的研究趨向于天然中草藥物的提取，以治愈疑難病癥，促進醫(yī)藥的進步。類黃酮化合物具有抗氧化、預防心血管疾病、抗衰老、降血糖、降血脂、增 加機體免疫力等功效。近年來，對洋蔥類黃酮化合物藥理活性研究的報道主要集中于抗氧化活性和OOOOO HOO黃 酮 類 黃 酮 醇 類雙 氫 黃 酮OOO H雙 氫 黃 酮 醇OOOO異 雙 氫 黃 酮 異 黃 酮OO HOO HOC HO花 色 素 類 黃 烷 3 醇 類 黃 烷 3 , 4 二 醇 類濱州學院本科畢業(yè)設計（論文） 5 抗癌活性方面，至于其它方面的藥理活性研究報道相對較少。 抗氧化活性 隨著人們生活水平的提高，延年益壽，減緩衰老是人們很關心的問題，自從自由基理論提出以來，人們逐步認識到人體衰老以及許多疾病都與體內(nèi)氧化產(chǎn)生的自由基有關，因而抗氧化劑的研究越來越被人們所關注，抗氧化劑不僅用于含脂肪食品的抗氧化，而且可作為功能因子用于保健食品及化妝品等的開發(fā)。 Sachiko H等 [20]認為洋蔥的抗氧化作用是由于黃酮化合物能抑制超氧陰 離子的產(chǎn)生，同時認為槲皮素中的 2,3位雙鍵和 4位羥基以及 3,5位羥基對洋蔥的抗氧化作用有十分重要的貢獻。姚勇芳等 [26]對洋蔥黃酮苷的抗氧化穩(wěn)定性進行了研究，結果表明：洋蔥黃酮苷在酸性條件下的抗氧化性質(zhì)比較穩(wěn)定；在 70℃ 以上條件下保存 1h基本失去抗氧化性；而且對光線敏感。張強等 [8]通過實驗得出 30ug/ml的洋蔥類黃酮化合物對超氧陰離子的清除能力與等濃度的 BHT相當，同時，洋蔥黃酮化合物對羥基自由基有較好的清除能力，并呈現(xiàn)較好的量效關系，但清除效果低于等濃度的 BHT；測定洋蔥類黃酮化合物還原力時發(fā)現(xiàn)，洋蔥 類黃酮化合物抗氧化能力優(yōu)于 BHT。同時，洋蔥類黃酮化合物對亞油酸過氧化、油脂過氧化以及脫氧核糖氧化損傷均具有良好的抑制作用，能明顯抑制 H2O2誘導的紅細胞氧化溶血反應和大鼠肝組織勻漿脂質(zhì)過氧化反應的發(fā)生，表明洋蔥類黃酮化合物具有很強的體外抗氧化活性，作為天然抗氧化劑和功能性食品具有較好的開發(fā)潛力 [27]。 抗腫瘤活性 因癌癥是難治之癥，醫(yī)學工作者對抗癌藥物的研究態(tài)度積極，醫(yī)學研究證明類黃酮的抗癌作用主要指能夠減小甚至消除一些化學物質(zhì)的毒性，關于類黃酮的抗癌作用機理， Wattenberg[28]認為它起到一種阻斷劑的作用，因為所有的化學致癌物質(zhì)進入體內(nèi)后，要在體內(nèi)一種依賴于細胞色素的 P450 的沒的作用下活化為可隨意與DNA 反應的中間物采有致癌活性的中間物，或誘導某些酶的活性，是致癌物脫毒，也可能與那些有致癌活性的中間體結合，從而避免它們與 DNA 結合或反應。近年來眾多研究證明了洋蔥類黃酮明顯的抗癌活性。 Wal