【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ，因此大大降低能耗。（ 7）藥材原料處理量大，成倍或數(shù)倍提高，且雜質(zhì)少，有效成分易于分離、凈化。（ 8）萃取工藝成本低，綜合經(jīng)濟(jì)效益顯著。 本課題的目的意義和研究?jī)?nèi)容 本課題所介紹的超聲波提取黃酮類化合物的方法 與常規(guī)提取方法比 ： (1)超聲波提取具有提取 溫度低 等特點(diǎn)，可以避免高溫對(duì)有效成分的破壞，適合于熱敏性物料的提取。(2)提取物的有效成分含量高，有利于進(jìn)一步的精制。 (3)溶媒用量少，可有效降低成本。(4)有效成分的提取率高，原料利 用充分，提高經(jīng)濟(jì)效益。 (5)對(duì)大多數(shù)有效成分的生理活性基本無(wú)影響。 黃酮類化和物用傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑加熱浸提，時(shí)間較長(zhǎng)，能源消耗大。采用超聲波輔助提取可以加速提取成分的擴(kuò)散釋放，充分與溶劑混合，提高提取效率，且與超臨界CO2萃取相比，成本低、投資少、提取效率高。所以研究此種方法對(duì)尋求更加有效的黃安徽工程科技學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 7 酮類化和物提取法有較大的幫助。 第 2 章 材料與方法 試驗(yàn)原料、藥品及器材 試驗(yàn)原料 芹菜葉：購(gòu)買(mǎi)與安徽省蕪湖市鳩江區(qū)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng) 試驗(yàn)藥品 蘆丁： 中國(guó)醫(yī)藥 (集團(tuán) )上?；瘜W(xué)試 劑公司 (生化試劑 )；無(wú)水乙醚，乙醇， NaOH, NaNO2， Al(NO3)3等均為國(guó)產(chǎn)分析純 。蒸餾水。 試驗(yàn)器材 FC104 型電子分析天平； 101A2E 型數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱； FW100 型高速萬(wàn)能粉碎機(jī)； KQ250E 超聲波清洗器； L550 型臺(tái)式大容量離心機(jī)；分光光度計(jì)。 實(shí)驗(yàn)步驟 芹菜葉的預(yù)處理 芹菜葉 →粉碎→按 1∶ 20料液比加無(wú)水乙醚→ 40℃冷凝回流 2小時(shí)脫脂→過(guò)濾→濾渣 干燥后備用。 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備及回歸方程的建立 準(zhǔn)確稱取蘆丁 20mg(120℃烘至恒重 ),加 95%乙醇水溶液 50 mL。準(zhǔn)確吸取 0、 12mL 于 50mL 容量瓶中 ,加 12mL 95%的乙醇 ,加含 5% NaNO2水溶液 2mL,搖勻靜置 6min,再加含 10% Al(NO3)3水溶液 2mL,搖勻靜置 6min,再加含 5% NaOH 水溶液 20mL,用 95%乙醇水溶液稀釋 至 刻度 ,搖勻 ,在 490— 510 nm 波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描 ,確定最大吸收波長(zhǎng) 。在最大吸收波長(zhǎng) (510nm)處測(cè)定吸光值。以吸收度 Y 為縱坐標(biāo) ,濃度 x 為橫坐標(biāo) ,進(jìn)行回歸分析 ,繪制回歸曲線。濃度與吸光度有良好的線 性關(guān)系。得出回歸方程 : Y=（ R2=） （ 1） 樣品總黃酮 得率 的確定 以芹菜葉 為原料 ,經(jīng)乙醇 浸提總黃酮 ,提取液 過(guò)濾 離心后 定容至 50mL,每次準(zhǔn)確量取 。代入回歸方程 (1)中計(jì)算 ,得出提取液中總黃酮含量。 陶然： 芹菜葉中黃酮類物質(zhì)提取工藝的研究 8 總黃酮的得率 =C*50/(w*1000)*100 （ 2） 式中： w 為樣品的質(zhì)量，單位 g； C 為提取液中總黃酮的含量，單位 mg/mL。 單因素試驗(yàn) 選擇提取乙醇濃度、超聲功率、超聲提取溫度、料液比、超聲提取時(shí)間進(jìn)行單因素試驗(yàn) ,考察其對(duì)提取率的影響。 正交試驗(yàn) 根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果 ,選擇超聲功率、超聲提取溫度、料液比、超聲提取做 4因素 3水平正交試驗(yàn) ,確定最佳提取條件。正交試驗(yàn)因素和水平見(jiàn)表 1。 表 1 正交試驗(yàn)因素和水平表 水平 A 超聲波功率 /W B 提取溫度 /℃ C 料液比 /g： mL D 超聲波時(shí)間 /min 1 50 50 1:70 5 2 55 60 1:80 10 3 60 70 1:90 15 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別取少量 芹菜葉 黃酮的提取液進(jìn)行日光、自然光、 避光 、 加熱時(shí)間 、 加熱溫度 、pH、 Vc 的 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) ,在 510 nm處測(cè)其吸光度 ,根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程計(jì)算總黃酮含量 ,由此判斷芹菜葉 黃酮的光及熱穩(wěn)定性。 芹菜葉 總黃酮保存率 (%)＝ (處理后溶液中總黃酮含量 /處理前溶液中總黃酮含量 ) 100 提取物中黃酮類物質(zhì)的鑒定 紅外光譜掃描 取少量蘆丁粉末與少量在最佳提取條件下干燥后的粉末進(jìn)行壓片，進(jìn)行紅外掃描。 紫外可見(jiàn)光譜掃描 第 3 章 結(jié)果與討論 單因素試驗(yàn) 乙醇濃度對(duì)得率的影響 準(zhǔn)確稱取脫脂后的 芹菜葉 粉末 g,分別加入 50mL 的水以及不同濃度的 乙醇在60℃下浸提 2h 過(guò)濾 ,濾液按方程 (2)測(cè)定總黃酮提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示。結(jié)果表明 ,在較低濃度條件下 ,隨著乙醇濃度的增加 ,芹菜葉 總黃酮的提取率逐漸提升 ,到 65%的乙醇為溶劑時(shí) ,總黃酮的提取率達(dá)到峰值 ,之后 ,總黃酮的得率 隨著乙醇濃度的增加而降低。因此 ,選擇 65%乙醇為最佳溶劑濃度。 安徽工程科技學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 9 超聲波功率對(duì)得率的影響 準(zhǔn)確稱取脫脂后的芹菜葉 粉末 0. 5g， 加入 40mL65%乙醇 ,在 60℃下超聲功率分別為0、 50W、 60W、 70W、 80W、 90W 和 100W 時(shí)超聲提取 10min， 過(guò)濾 ， 濾液按方程 (2)測(cè)定總黃酮提取率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示。結(jié)果表明隨著 使用 超聲波 輔助提取 ,總黃酮的提取率 在增加 ， 而到 50W 之后 ， 總黃酮提取率隨著超聲功率的增大而降 低。因此 50W 為最佳提取功率。由于試驗(yàn)儀器的影響，最低的超聲波提取功率只能設(shè)定在 50W。 超聲波時(shí)間對(duì)得率的影響 陶然： 芹菜葉中黃酮類物質(zhì)提取工藝的研究 10 準(zhǔn)確稱取脫脂后的芹菜葉 粉末 0. 5g， 加入 40mL 65%乙醇 ,在 60℃、超聲功率為 60W時(shí)分別超聲提取 5min、 10min、 20min、 30min 和 40min， 過(guò)濾 ， 濾液按方程 (2)測(cè)定總黃酮得 率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示。結(jié)果表 明 ， 隨著時(shí)間的增加 ,總黃酮提取率增加 ,但在 10min時(shí)候達(dá)到峰值 ， 之后隨著時(shí)間的增加 ,總黃酮提取率降低。所以選擇 10min 為最佳的提取時(shí)間。 提取溫度對(duì)得率的影響 準(zhǔn)確稱取脫脂后的芹菜葉 粉末 0. 5 g， 加入 40mL 65%乙醇 ,分別在 20℃、 40℃、 50℃、60℃、 70℃和 78℃下 ， 超聲功率為 60W 時(shí)超聲提取 10min,過(guò)濾 ,濾液按方程 (2)測(cè)定總黃酮得 率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示。結(jié)果表明 ,超聲提取溫度為 20℃至 60℃時(shí) ,總黃酮 得 率隨著溫度的升高而增加 ,而 60℃之后隨著溫度的升高 ,總黃酮提取率降 低。因此 ,選擇 60℃為最佳的超聲提取溫度。 安徽工程科技學(xué)院畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文） 11 料液比對(duì)得率的影響 準(zhǔn)確稱取脫脂后的 芹菜葉 粉末 0. 5g， 分別加入 65%乙醇 10mL、 20mL、 30mL、 40mL和 50mL， 在 60℃、超聲功率為 60W 時(shí)超聲提取 10min,過(guò)濾 ,濾液按方程 (2)測(cè)定總黃酮得 率。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖所示。結(jié)果表明 ,總黃酮提取率隨料液比增大而增大 ,在料液比為 1∶80 時(shí)為最大值 ,隨后減小。 正交試驗(yàn) 為了全面考察超聲波輔助提取的最佳工藝參數(shù) ， 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上 ,選擇 65%乙醇為最佳提取溶劑 ,以超聲功率 ,超聲提取溫 度 ,料液比和超 聲 提取時(shí)間這 4 種因素進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn) ， 確定最優(yōu)方案 ， 結(jié)果見(jiàn)表。從表 中 極差數(shù)據(jù)可知 ,超聲功率 ,超聲提取溫度 ,料液比和超聲提取時(shí)間這 4 種因素對(duì)總黃酮提取率影響的主次順序?yàn)?： 料液比 超聲陶然： 芹菜葉中黃酮類物質(zhì)提取工藝的研究 12 波提取溫度 超聲提取 時(shí)間 超聲提取 功率， 最佳的提取條件為 65%乙醇濃度 ， 超聲功率為 55W， 超聲提取溫度為 50℃ ， 料液比為 1∶ 80， 超聲提取時(shí)間為 10min，最佳提取條件下所得的黃酮類化合物的得率為 %。 試驗(yàn)號(hào) A B C D 黃酮得率 1 1 1 1 1 2 1 2 2 2 3 1 3 3 3 4 2 1 2 3 5 2 2 3 1 6 2 3 1 2 7 3 1 3 2 8 3 2 1 3 9 3 3 2 1 K1 K2 K3 k1 k2 k3 極差 R 因素主 次 料液比 提取溫度 超聲波提取時(shí)間 超聲波功率 最優(yōu)方案 55W 50 度 8