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正文內(nèi)容

響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化喜樹葉黃酮提取工藝畢業(yè)論文(編輯修改稿)

2024-07-21 22:42 本頁(yè)面
 

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 建模最常用和最有效的方法之一就是多元線性回歸方法[12]。對(duì)于非線性體系可作適當(dāng)處理化為線性形式。中心復(fù)合設(shè)計(jì)仍然是當(dāng)前應(yīng)用得最多的RSM經(jīng)典設(shè)計(jì)方法[12]。化學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域是RSM最重要的應(yīng)用領(lǐng)域,RSM在這兩個(gè)學(xué)科的研究中充分展現(xiàn)了它的優(yōu)點(diǎn)[12]。 實(shí)驗(yàn)研究方法本論文首創(chuàng)性地對(duì)喜樹葉進(jìn)行響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化黃酮提取工藝,對(duì)開發(fā)喜樹葉資源具有一定的研究?jī)r(jià)值和現(xiàn)實(shí)意義。本論文以風(fēng)干喜樹葉為原料,在喜樹葉的黃酮提取研究中,將單因素和響應(yīng)面分析法應(yīng)用于乙醇回流提取喜樹葉黃酮工藝,研究回流提取的條件及其對(duì)提取結(jié)果即黃酮的得率的影響,尋求各因素的綜合優(yōu)化條件,為提高喜樹葉黃酮利用率以及為工業(yè)化生產(chǎn)提供一定的理論參考。第2章 材料與方法黃酮類化合物易溶于熱水和熱的乙醇,用石油醚處理過(guò)的樣品,用乙醇溶液回流提取,得到黃酮提取液[5]。在中性或弱堿性及亞硝酸鈉存在條件下,黃酮類化合物與鋁鹽生成鰲合物,加入氫氧化鈉溶液后顯紅橙色,是因?yàn)閬喯跛徕c還原黃酮,加硝酸鋁絡(luò)合,加氫氧化鈉使黃酮類化合物開環(huán),生成2’OH查耳酮而顯色。在波長(zhǎng)510 nm附近有吸收,可用分光光度法進(jìn)行測(cè)定[5]。利用黃酮類化合物中的3羥基、4羥基、5羥基、4羰基或鄰二位酚羥基,與Al3+進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng),在堿性條件下生成紅色絡(luò)合物的原理測(cè)定其含量。 材料、藥品試劑及儀器 實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)原材料為喜樹葉,2012年9月下旬采摘于湖南科技學(xué)院校園,挑選新鮮干凈喜樹葉采摘后,經(jīng)清洗,烘干,室溫保存于實(shí)驗(yàn)室備用。 主要藥品與試劑蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、95%乙醇、石油醚、亞硝酸鈉、三氯化鋁、氫氧化鈉。藥品試劑均達(dá)分析純。 主要儀器與器具T6可見分光光度計(jì)、TE124S電子天平、RE52B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、烘箱、回流提取裝置、DF101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器、燒杯,容量瓶,移液管,移液槍,量筒,比色管等。 樣品處理將葉片剪成適當(dāng)長(zhǎng)度,再在105℃烘至恒重。采用Soxhlet提取法,以沸程為30℃60℃的石油醚為脫脂劑于45℃水浴中脫脂3次每次2小時(shí),充分除去樣品中脂類和脂溶性色素。取出樣品,先置通風(fēng)處晾干,再將濾紙包置烘箱中130 ℃烘干,放入干燥器中冷卻備用。 相關(guān)溶液的配制5%亞硝酸鈉溶液: g亞硝酸鈉,置燒杯充分溶解,定容到50 mL容量瓶。10%三氯化鋁: g三水合三氯化鋁,置燒杯充分溶解,定容到50 mL容量瓶。1 mol/L氫氧化鈉:準(zhǔn)確稱量10 g氫氧化鈉,置燒杯充分溶解,定容到250 mL容量瓶。70%乙醇溶液: mL 95%乙醇稀釋到500 mL。50%,60%,80%,90%乙醇溶液用類似方法配得。以上溶液用完均可再配。 黃酮含量測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)溶液及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制[5]:稱取約50 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品于稱量瓶中置105℃烘箱下烘干至恒重,干燥器中冷卻,精確稱取25 mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品,用70%乙醇定容至25 mL, mL定容到25 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制[5]:、、 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于6個(gè)25 mL容量瓶中, mL 5%亞硝酸鈉,放置6 min, mL 10%三氯化鋁后放置6 min, mol/L NaOH mL,加70%乙醇定容至刻度,搖勻,放置12 min得測(cè)定液。以空白溶液作參比,在λ= 510 nm處測(cè)吸光度,計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)液濃度(C)與吸光度(A)的回歸方程A = kC + b。 黃酮的提取脫脂后樣品按一定條件提取,將提取液抽濾,濾渣在相同條件下提取一定次數(shù),用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀合并濾液濃縮至約25 mL,轉(zhuǎn)移到50 ml容量瓶中,用70%乙醇定容至刻度,搖勻。取該溶至10 mL,轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中,再用70%乙醇定容至刻度,搖勻。 mL,置于25 mL 容量瓶中待測(cè)定。 黃酮含量測(cè)定方法按照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法操作,測(cè)定吸光度,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出測(cè)定樣品溶液總黃酮濃度C。然后計(jì)算樣品中總黃酮的提取率。總黃酮提取率(mg/g)= CNV/m式中,C 為測(cè)定樣品溶液總黃酮濃度(mg/mL);N 為稀釋倍數(shù),;V 為最初樣品定容體積(mL),數(shù)值為50;m為樣品質(zhì)量(g),數(shù)值為1。 黃酮提取單因素試驗(yàn) 料液比的影響取樣品1 g,乙醇體積分?jǐn)?shù)70%,料液比分別為1:1:1:1:1:50萃取,恒溫70℃,回流提取兩次,每次120 min,測(cè)定提取液黃酮含量,并計(jì)算得率。 提取次數(shù)的影響取樣品1 g,乙醇體積分?jǐn)?shù)70%,料液比1:40,恒溫70℃,回流提取兩次,每次120 min,分別萃取1 、2 、3 、4次,測(cè)定提取液黃酮含量,并計(jì)算得率。 乙醇體積分?jǐn)?shù)的影響取樣品1 g,分別加入50%、60%、70%、80%、90%的乙醇溶液,料液比1:40,恒溫70℃,回流提取兩次,每次120min,測(cè)定提取液黃酮含量,并計(jì)算得率。 提取溫度的影響取樣品1 g,乙醇體積分?jǐn)?shù)70%,料液比1:40,回流提取兩次,每次120 min,分別于50℃、60℃、70℃、80℃提取,測(cè)定提取液黃酮含量,并計(jì)算得率。 提取時(shí)間的影響取樣品1 g,乙醇體積分?jǐn)?shù)70%,料液比1:40,恒溫70℃,回流提取兩次,每次回流提取60 min、90 min、120 min、150 min,測(cè)定提取液黃酮含量,并計(jì)算得率。參考文獻(xiàn)[17],在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上從料液比、提取次數(shù)、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度、提取時(shí)間五個(gè)因素中精心篩選出3個(gè)對(duì)黃酮乙醇提取影響比較顯著的因素:料液比、乙醇體積分?jǐn)?shù)、提取溫度,在固定提取時(shí)間90 min、提取次數(shù)3次的條件下采用經(jīng)典的三因素三水平BoxBehnken 試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn)確定喜樹葉中黃酮提取的最佳工藝[17]。表 喜樹葉黃酮提取工藝條件的BoxBehnken 中心組合設(shè)計(jì)因素與水平水平Level因素 FactorsA:乙醇
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