人骨形成蛋白-7成熟肽cdna的克隆和序列測定(精)(編輯修改稿)
2025-10-03 10:27 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 CAGCTCAATGCCATCTCCGTCCTCTACTTCGATGACAGC(360) TCCAACGTCATCCTGAAGAAATACAGAAACATGGTGGTCCGGGCCTGTGGCTGCCACTAG(420) 3BMP?7成熟肽編碼基因的部分核苷酸序列 3 討論 hBMP7具有廣泛的生物學活性：①胚胎發(fā)育中所產(chǎn)生的BMP7和BMP4是誘導交感神經(jīng)元分化的信號分子。②能抑制胚胎癌性細胞(ECC)的增殖，誘導其分化，可能對一些干細胞腫瘤有治療價值。③對牙齒的修復(fù)、形成有重要作用。④對鼠胚胎菱腦的發(fā)育和形成有一定影響，為哺乳動物眼部發(fā)育所必需〔5〕。剔除(knock?out)該基因的小鼠出生不久即死于腎臟發(fā)育不良，提示其可能與小兒腎功能不良所致貧血和骨骼發(fā)育不良有關(guān)，從而使其在基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用等方面具有比較重要的價值。但天然來源的BMP7較少，限制了對其功能的研究。國外多用真核表達系統(tǒng)表達BMP7，只有極少數(shù)人嘗試用原核表達系統(tǒng)進行表達研究〔7〕，并獲得活性產(chǎn)物。以往認為，BMP原核表達后，難以獲得高活性的產(chǎn)物，且表達產(chǎn)物往往處于非溶解狀態(tài)，可溶性產(chǎn)物的量極少。近來本室在原核表達的BMP2的復(fù)性方面獲得了突破〔8〕，可得到大量可溶性重組BMP產(chǎn)品，為其體外活性測定方法的建立及功能研究提供了極大的便利。為進一步闡明BMP?7結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系，研究其在腎臟、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育及造血系統(tǒng)中的作用，克隆BMP7成熟肽基因很有必要?！ ∥覀円怨侨饬黾毎鸘2OS的λgt11噬菌體表達文庫為模板，利用自行設(shè)計的一對引物，僅一輪擴增即得到單1條帶。測序結(jié)果表明，設(shè)計的引物特異性強，擴增得到的基因正確。將擴增產(chǎn)物以平端克隆入載體pGEM?3zf()，可避免由于酶切處理過程的損失，無論是正向或反向克隆入載體都不影響測序，而且不會破壞引物中所含的酶切位點和起始密碼子。hBMP7成熟肽基因克隆的成功，為其原核表達以及功能研究和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)?！鲎髡吆喗椋和蹒?，男，24歲，助教現(xiàn)工作單位：蘭州市段家灘171號，解放軍蘭州醫(yī)高專生化教
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