合成肽s247-預(yù)先給藥對大鼠呼吸機(jī)相關(guān)性肺損傷的影響(編輯修改稿)
2024-10-03 03:25 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 隨機(jī)分為三組，每組8只。對照組（C組），高潮氣量組（H組）和S247預(yù)先給藥組（S組）。S組大鼠腹腔注射S247 1次/d，持續(xù)2周，在最后一次注射30min后開始機(jī)械通氣。C組和H組大鼠在相同的時間點(diǎn)注射等量的生理鹽水。粉末狀的S247（上海英駿生物技術(shù)有限公司）注射前用生理鹽水稀釋成20mg/ml。 VILI動物模型的制備：H組和S組的大鼠腹腔注射20％，利用額鏡，直視下經(jīng)口插入氣管導(dǎo)管（用16號靜脈套管針代替），口腔填塞細(xì)紗布條以防止漏氣，連接到683型小動物容量控制呼吸機(jī)（Harvard Apparatus公司，美國）行機(jī)械通氣，潮氣量40ml/kg，呼吸頻率40次/min，呼氣末正壓0 cmH2O，吸入氧濃度21％，通氣時間為4h。股靜脈置管，乳酸鈉林格氏液以3ml/h的速度持續(xù)靜脈輸注。頸動脈置管，1205A監(jiān)測儀（hp公司，美國）監(jiān)測心率和平均動脈壓。通氣過程中動物保持仰臥位，通氣結(jié)束后頸動脈放血處死。C組大鼠不進(jìn)行機(jī)械通氣。 標(biāo)本制備：機(jī)械通氣后4h，放血處死大鼠。小心分離左右兩側(cè)肺組織，結(jié)扎右主支氣管，4℃生理鹽水4ml分兩次注入氣管，輕輕回抽，收集支氣管肺泡灌洗液（BALF），低溫離心（1200g，4℃，10min），上清液等分后70℃保存，用于測定總蛋白（TP）含量、腫瘤壞死因子α（TNFα）和巨噬細(xì)胞炎性蛋白2（MIP2）的濃度，沉淀物用于白細(xì)胞（WBC）計數(shù)。分離右肺上葉用于測定肺濕/干重比（W/D）。分離右肺中葉，4％多聚甲醛固定，用于觀察肺組織病理學(xué)改變和免疫組化檢測TGFβ1的表達(dá)。 檢測指標(biāo)及方法：（1）W/D：右肺上葉稱重后，置于70℃的烤箱烘烤直至恒重，計算W/D。（2） BALF WBC計數(shù)：BALF離心沉淀物用PBS稀釋后光鏡下行WBC計數(shù)（3）BALF TP含量：用BCA蛋白測定試劑盒（Pierce公司，美國）按說明書進(jìn)行操作。（4）BALF TNFα和MIP2濃度：用ELISA試劑盒（Biosource公司，美國）按說明書進(jìn)行操作。（5）肺組織病理學(xué)改變：右肺中葉石臘包埋，切片，一部分切片HE染色，光鏡下觀察肺組織病理學(xué)改變。（6）肺組織TGFβ1表達(dá)：另一部分切片用于免疫組化法檢測肺組織TGFβ1表達(dá)，兔抗大鼠TGFβ1多克隆抗體及SABC免疫組化試劑盒為武漢博士德生物工程公司產(chǎn)品，按試劑盒說明操作，DAB染色，陽性染色為胞漿染成棕黃或棕褐色。陰性對照采用PBS代替一抗。每張切片隨機(jī)選取5個視野（200），圖象采用HMIAS2000型全自動彩色圖像分析系統(tǒng)（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院圖象分析室）進(jìn)行蛋白半定量分析，以光密度反映TGFβ1蛋白含量。 統(tǒng)計學(xué)方法：，計量資料以均數(shù)177。標(biāo)準(zhǔn)差（177。ｓ）表示，組間比較采用單因素方差分析，P。2 結(jié)果 病理學(xué)改變：C組肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔清晰；H組肺泡結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，肺泡腔內(nèi)出血、滲出物和間質(zhì)水腫明顯；S組肺泡結(jié)構(gòu)尚存，肺泡間隔有一定程度的增寬，肺泡腔內(nèi)出血和滲出物較H組明顯減輕。 W/D，BALF WBC計數(shù)、TP含量、TNFα和MIP2濃度：與C組比較，H組和S組W/D、WBC計數(shù)、TP含量升高，H組MIP2的濃度升高（P），與H組比較，S組W/D、WBC計數(shù)、TP含量、TNFα和MIP2濃度降低（P），見表1。表 1 三組W/D、WBC 計數(shù)、TP含量和細(xì)胞因子濃度的比較（n=8 , 177。ｓ）組別W/DWBC(/ml)TP(g/l)TNFα(pg/ml)MIP2(pg/ml)C組177。1 780177。248177。53177。8H組177。*19 967177。1 89
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