【文章內(nèi)容簡介】 個數(shù) 100 個 – 在干燥的、靜止的情況下。 無菌線 S6 驗證 SOP 目的： 整個生產(chǎn)線的無菌效果驗證，認(rèn)證從滅菌到無菌缸到充填及旋蓋的全部過程。 應(yīng)用：用經(jīng)過滅菌過的 LG 培養(yǎng)基來充填并且在正常的無菌生產(chǎn)條件下加蓋。所有的樣品在一定時間的放置后要進(jìn)行一次徹底的檢查，同時 LG 培養(yǎng)基要在充填前保存 72 小時，被延長的產(chǎn)品的無菌狀態(tài)需要被認(rèn)可。測試中所使用的瓶子和瓶蓋要和將來生產(chǎn)中使用的一致。 第一部分：準(zhǔn)備工作 一 .可能影響影響驗證的因素確認(rèn)及解善 1） 對吹瓶風(fēng)道空氣過濾器的維護(hù)，對風(fēng)道內(nèi)部的擦洗 2） 瓶蓋 /空瓶檢驗合格 3） 安排對灌注機(jī)和清洗消毒系統(tǒng)設(shè)備進(jìn)行自查（如灌裝機(jī) 查漏，殺菌液濃度確認(rèn)等） 4） 膜包機(jī)長時間不用，要在試驗開始前調(diào)試好 5） 保溫室（空間容量 ,溫濕度 ,光照等） 二．培養(yǎng)基的準(zhǔn)備（中性， ） 培養(yǎng)基： LG 培養(yǎng)基的配方（ 10000L）： 1 葡萄糖（食品級） 200 kg 2 酵母提取物（粉狀分析級） 35 kg 3 蛋白胨（食品級） 20 kg 4 硫酸銨（化學(xué)純級） 20 kg 5 磷酸二氫鉀（化學(xué)純級） 10 kg 6 硫酸鎂（化學(xué)純級） 10 kg LG 培養(yǎng)基的配制 （ 10000L）： 1. 實驗前對培養(yǎng)基原材料以以上 比例進(jìn)行預(yù)調(diào)配小樣，并按照比例進(jìn)行添加酸堿，對 pH 進(jìn)行測試。而且需要事先檢測培養(yǎng)基是否能夠被污染。 2. 向混合缸中注入 2020L 60℃ 的處理水。 3. 將 20 kg 蛋白胨用 300L 60℃ 的處理水預(yù)混，通過濾網(wǎng)加入混合缸中。攪拌直至蛋白胨徹底溶解。 4. 在攪拌器開啟的情況下將其余的組分按下列次序加入： 酵母提取物 35 kg，葡萄糖 200 kg，磷酸二氫鉀 10 kg，硫酸銨 20 kg，硫酸鎂10 kg （注意： 酵母提取物必須采用粉狀分析級的。 投料順序按照上述順序進(jìn)行，而且必須等待前一組分完全溶解后才能加入后一個組分。 如能將這些組分分別使用小料缸預(yù)溶解后通過 5u 濾網(wǎng)加入混合缸中更好。） 5. 攪拌直至所各組分徹底溶解。目測檢查。 6. 用 20oC 的處理水將混合缸定容至 10000L。 7. 至少 30 分鐘攪拌，取樣測試 pH，濁度和白利度。將 LG 培養(yǎng)基 pH值調(diào)至 （參考添加量： 110130g 化學(xué)純 NaOH 加入 1 噸 LG 培養(yǎng)基），謹(jǐn)慎起見，酸堿第一步添加量參考添加量下限的 80%，然后按照實際情況，逐漸加入余下量直至 pH 達(dá)標(biāo)為止。 8. 在 2 小時 內(nèi)將培養(yǎng)基在 137℃ ， 30 秒或相當(dāng)?shù)臏囟群蜁r間滅菌。儲存于無菌缸中，否則可能會引起微生物過度繁殖， 造成培養(yǎng)基內(nèi)部渾濁。 第三部分：灌注（測試中所使用的瓶子和瓶蓋要和將來生產(chǎn)中使用的一致。） 1. 確認(rèn)生產(chǎn)線各個設(shè)備都在正常無故障狀態(tài)（前處理、動力中心、 PET、 UHT、無菌罐、氮?dú)庀到y(tǒng)、膜包機(jī)等后工序）。 2. 確認(rèn)參與試驗的的人員到位：車間所有員工（溶糖、萃茶、套標(biāo)除外）、維修工、微生物品控員、成品品控員、跟班品控員、 SCMC 工程師、克朗斯工程師、藝康工程師。 3. 調(diào)配系統(tǒng)、灌裝機(jī)、無菌水、 UHT、無菌罐、氮?dú)庀到y(tǒng)進(jìn)行 CIP、 SIP，記錄參數(shù) 4. 按照要求調(diào)配 LG培養(yǎng)基，調(diào)配結(jié)束后立即通過 UHT 滅菌打入無菌罐進(jìn)行儲存。 5. 灌 裝機(jī)進(jìn)行堿性 COP、酸性 COP，產(chǎn)前準(zhǔn)備， SOP，記錄參數(shù) 6. 開機(jī)生產(chǎn)，按照要求進(jìn)行灌裝，每次分為半瓶不充氮、半瓶充氮兩種類型進(jìn)行生產(chǎn)，在小于 35176。 C 的條件下灌注培養(yǎng)基，噴碼時注意區(qū)分。如果檢測的是72 小時，則在 24 小時的時候灌注三分之一；在 48 小時灌注三分之一；在72 小時灌注剩下的三分之一。合計灌注 10000 瓶。每次間隔都要進(jìn)行正常的COP/SOP 處理過程。灌注需全速進(jìn)行（ 36000 瓶 /小時）。半瓶瓶子中留出足夠的空間 (至少 50ml 左右 ) 。每 5 分鐘檢查瓶子中殘留消毒劑的量，根據(jù)操作說明確保無殘留。 7. 現(xiàn)場人 員安排 安排人員在生產(chǎn)線上，對高歪蓋產(chǎn)品進(jìn)行挑揀。所有挑揀人員必須在實驗之前，對雙手進(jìn)行全面消毒。安排品控員在線上對衛(wèi)生狀況進(jìn)行巡查。 所有從生產(chǎn)線掉落的培養(yǎng)基和倒在輸送帶上的培養(yǎng)基都不得放回生產(chǎn)線。 8. 灌裝結(jié)束按照正常的生產(chǎn)程序進(jìn)行結(jié)束生產(chǎn)。 注：為防止有高歪蓋或其它樣品損失，注入機(jī)在灌注時均適量放大樣品量。 第四部分： S6 驗證過程中無菌流體的取樣 1. 本試驗可能持續(xù) 72 小時以上，品控應(yīng)準(zhǔn)備好培養(yǎng)基及空氣取樣過濾器 2. 品控人員需依據(jù)無菌灌裝手冊中的取樣頻率，進(jìn)行微生物取樣 無菌水 （ UHT總出水口、沖瓶、 SIP 冷卻水）， 無菌空氣 （沖瓶、洗蓋和灌注間， HC），以及LN2 取樣。 3. 對于 無菌培養(yǎng)基（ V105） ，需放在無菌瓶中保溫培養(yǎng)。 4. 對調(diào)配完成的 LG 培養(yǎng)基料液 ， 空蓋 ， 空瓶，潔瓶，潔蓋 進(jìn)行取樣并且進(jìn)行總菌，霉菌 /酵母測試，以便對未來出現(xiàn)的危機(jī)進(jìn)行分析。 5. 灌注結(jié)束后對 ISOLATE 設(shè)備進(jìn)行涂抹。灌注過程中對 ISOLATE 內(nèi)部空氣進(jìn)行總菌，霉菌 /酵母的取樣測試（各 1000L） 第五部分：樣品翻檢 在 3035176。 C 條件下，將樣品保溫 14 天；培養(yǎng)基培養(yǎng) 3 天后倒立瓶子，使瓶內(nèi)液體與內(nèi)瓶壁以及蓋子充分接觸 ， 7 天后第一次翻檢， 14 天后 再次翻檢。 保溫結(jié)束后，肉眼觀察所有瓶子是否有微生物污染 (膨脹的、渾濁的、變顏色的、絮狀的、產(chǎn)氣等 )。作為陽性對照，向未污染瓶子內(nèi)的培養(yǎng)基接種枯草芽孢桿菌，以確保培養(yǎng)基是適合該菌生長的。 注：樣品必需在不同的砧板上放置并貼上標(biāo)識。（本次試驗需 10 個塑料砧板） 第六部分：參考標(biāo)準(zhǔn) 10000 瓶測試 通過 1 失敗 ≥ 1 無菌線 S7 驗證 SOP 目的： 注入封蓋系統(tǒng)的無菌環(huán)境驗證，認(rèn)證從滅菌到充填及旋蓋的整個過程的無菌效果。 應(yīng)用：用經(jīng)過滅菌過的 LG 培養(yǎng)基來充填并且在正常的無菌生產(chǎn)條件下加蓋。所有的樣品在 一定時間的放置后要進(jìn)行一次徹底的檢查。測試中所使用的瓶子和瓶蓋要和將來生產(chǎn)中使用的一致。 第一部分：準(zhǔn)備工作 一 .可能影響影響驗證的因素確認(rèn)及解善 6） 對吹瓶風(fēng)道空氣過濾器的維護(hù)，對風(fēng)道內(nèi)部的擦洗 7） 瓶蓋 /空瓶檢驗合格 8） 安排對灌注機(jī)和清洗消毒系統(tǒng)設(shè)備進(jìn)行自查（如灌裝機(jī)查漏，殺菌液濃度確認(rèn)等） 9） 膜包機(jī)長時間不用，要在試驗開始前調(diào)試好 10） 保溫室（空間容量 ,溫濕度 ,光照等） 二．培養(yǎng)基的準(zhǔn)備（中性， ） 培養(yǎng)基： LG 培養(yǎng)基的配方（ 10000L）： 1 葡萄糖（食品級） 200 kg 2 酵母提取物（粉 狀分析級） 35 kg 3 蛋白胨（食品級） 20 kg 4 硫酸銨（化學(xué)純級） 20 kg 5 磷酸二氫鉀（化學(xué)純級） 10 kg 6 硫酸鎂（化學(xué)純級） 10 kg LG 培養(yǎng)基的配制 （ 10000L）： 9. 實驗前對培養(yǎng)基原材料以以上比例進(jìn)行預(yù)調(diào)配小樣，并按照比例進(jìn)行添加酸堿，對 pH 進(jìn)行測試。而且需要事先檢測培養(yǎng)基是否能夠被污染。 10. 向混合缸中注入 2020L 60℃ 的處理水。 11. 將 20 kg 蛋白胨用 300L 60℃ 的處理水預(yù)混，通過濾網(wǎng)加入混合缸中。攪拌直至蛋白胨徹底溶解。 12. 在攪拌器 開啟的情況下將其余的組分按下列次序加入： 酵母提取物 35 kg，葡萄糖 200 kg，磷酸二氫鉀 10 kg，硫酸銨 20 kg，硫酸鎂10 kg （注意： 酵母提取物必須采用粉狀分析級的。 投料順序按照上述順序進(jìn)行，而且必須等待前一組分完全溶解后才能加入后一個組分。 如能將這些組分分別使用小料缸預(yù)溶解后通過 5u 濾網(wǎng)加入混合缸中更好。） 13. 攪拌直至所各組分徹底溶解。目測檢查。 14. 用 20oC 的處理水將混合缸定容至 10000L。 15. 至少 30 分鐘攪拌，取樣測試 pH，濁度和白利度。將 LG 培養(yǎng)基 pH值調(diào)至 （參考添加量 ： 110130g 化學(xué)純 NaOH 加入 1 噸 LG 培養(yǎng)基），謹(jǐn)慎起見，酸堿第一步添加量參考添加量下限的 80%，然后按照實際情況，逐漸加入余下量直至 pH 達(dá)標(biāo)為止。 16. 在 2 小時 內(nèi)將培養(yǎng)基在 137℃ ， 30 秒或相當(dāng)?shù)臏囟群蜁r間滅菌。儲存于無菌缸中，否則可能會引起微生物過度繁殖，造成培養(yǎng)基內(nèi)部渾濁。 第三部分：灌注（測試中所使用的瓶子和瓶蓋要和將來生產(chǎn)中使用的一致。） 9. 確認(rèn)生產(chǎn)線各個設(shè)備都在正常無故障狀態(tài)（前處理、動力中心、 PET、 UHT、無菌罐、氮?dú)庀到y(tǒng)、膜包機(jī)等后工序）。 10. 確認(rèn)參與試驗的的人員到位：車間所有員工（溶糖、萃 茶、套標(biāo)除外）、維修工、微生物品控員、成品品控員、跟班品控員、 SCMC 工程師、克朗斯工程師、藝康工程師。 11. 調(diào)配系統(tǒng)、灌裝機(jī)、無菌水、 UHT、無菌罐、氮?dú)庀到y(tǒng)進(jìn)行 CIP、 SIP，記錄參數(shù) 12. 按照要求調(diào)配 LG培養(yǎng)基，調(diào)配結(jié)束后立即通過 UHT 滅菌打入無菌罐進(jìn)行儲存。 13. 灌裝機(jī)進(jìn)行堿性 COP、酸性 COP，產(chǎn)前準(zhǔn)備， SOP，記錄參數(shù) 14. 開機(jī)生產(chǎn)，按照要求進(jìn)行灌裝，每次分為半瓶不充氮、半瓶充氮兩種類型進(jìn)行生產(chǎn)，在小于 35176。 C 的條件下灌注培養(yǎng)基，噴碼時注意區(qū)分。合計灌注 10000瓶（充氮和不充氮各灌裝 5000 瓶）。一次性完成產(chǎn) 品灌注。每次間隔都要進(jìn)行正常的 COP/SOP 處理過程。灌注需全速進(jìn)行（ 36000 瓶 /小時）。半瓶瓶子中留出足夠的空間 (至少 50ml 左右 ) 。每 5 分鐘檢查瓶子中殘留消毒劑的量，根據(jù)操作說明確保無殘留。 15. 現(xiàn)場人員安排 安排人員在生產(chǎn)線上，對高歪蓋產(chǎn)品進(jìn)行挑揀。所有挑揀人員必須在實驗之前，對雙手進(jìn)行全面消毒。安排品控員在線上對衛(wèi)生狀況進(jìn)行巡查。 所有從生產(chǎn)線掉落的培養(yǎng)基和倒在輸送帶上的培養(yǎng)基都不得放回生產(chǎn)線。 16. 灌裝結(jié)束按照正常的生產(chǎn)程序進(jìn)行結(jié)束生產(chǎn)。 注：為防止有高歪蓋或其它樣品損失，注入機(jī)在灌注時均適量放大樣品量 。 第四部分： S7 驗證過程中無菌流體的取樣 6. 本試驗可能持續(xù) 10 小時以上，品控應(yīng)準(zhǔn)備好培養(yǎng)基及空氣取樣過濾器 7. 品控人員需依據(jù)無菌灌裝手冊中的取樣頻率，進(jìn)行微生物取樣 無菌水 （ UHT總出水口、沖瓶