核酸類藥物(編輯修改稿)
2025-02-23 16:41 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 方法 ：將核苷懸浮于磷酸三甲酯或磷酸三乙酯中，在冷卻條件下加入氯化氧磷，進(jìn)行磷酸化。從核苷生成5‘核苷酸收率可達(dá) 90%。 氯化氧磷 肌苷，懸浮于磷酸三乙酯中 肌苷酸（ IMP ） 0 ℃ 核苷的制備 ? 核苷 是多種核苷類藥物的原料，這些藥物通常是生物自身能夠合成的組成遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)類似物，目前已用于臨床的此類藥物有幾十種 ? 另外，核苷的 發(fā)酵法 生產(chǎn)水平大大高于同類結(jié)構(gòu)核苷酸的發(fā)酵水平，因此肌苷酸鈉，鳥苷酸鈉可分別由肌苷和鳥苷經(jīng) 化學(xué)磷酸化 方法合成，ATP由 腺苷酯法 合成。 （一） RNA化學(xué)水解法制備核苷 ? RNA以甲酰胺化學(xué)水解 ， 樹脂分離 、結(jié)晶 ， 可制得 4種核苷 。 （二）發(fā)酵法生產(chǎn)核苷 ? 發(fā)酵法生產(chǎn)核苷是近代發(fā)酵工程領(lǐng)域中的杰出成果，產(chǎn)率高，周期短，控制容易，產(chǎn)量大。 ? 菌種 ：枯草芽孢桿菌或短小芽孢桿菌變異株，嘌呤核苷分解活性低，而嘌呤核苷酸酶活性高。 ? 枯草桿菌 的嘌呤核苷酸合成途徑。 ADP AMP GMP GTP GDP SAMP IMP XMP AMP脫氨酶 IMP脫氫酶 GMP還原酶 SAMP合成酶 PRPP AICAR SAICAR PRPP ATP SAMP裂解酶 GMP合成酶 （二）發(fā)酵法生產(chǎn)核苷 ? 在右邊的合成途徑中，嘌呤核苷酸生物合成的第一個(gè)酶PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶 受 AMP、 ADP、以及腺嘌呤衍生物的強(qiáng)烈抑制而受鳥嘌呤衍生物的抑制很弱。IMP脫氫酶 受最終產(chǎn)物 GMP及鳥嘌呤衍生物反饋抑制，SAMP合成酶 受 AMP反饋抑制的。 ? 枯草桿菌的 腺嘌呤 缺陷型，當(dāng)培養(yǎng)基中提供 限量腺嘌呤 時(shí)就累積肌苷。 ? 而枯草桿菌的 腺嘌呤、 黃嘌呤缺陷型，當(dāng)培養(yǎng)基中提供 限量鳥嘌呤 時(shí)就累積腺苷。 枯草桿菌的嘌呤核苷酸合成途徑 PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶 1．發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷（ I或 Iou） ? 肌苷生產(chǎn)菌（ AJ11102）遺傳性狀： ? ①腺嘌呤缺陷型（ A）； ? ② GMP還原酶缺失（ GMPred）； ? ③磺胺脒抗性（ SGr）； ? ④精氨酸缺陷型（ Arg）。 ? 選育出從遺傳上解除正常代謝控制的理想菌株。肌苷產(chǎn)率達(dá) 20g/L. 1．發(fā)酵法生產(chǎn)肌苷（ I或 Iou） ? 工藝要點(diǎn)： ? ①保證培養(yǎng)基有 充足 N源 。 ? ②短小芽孢桿菌受 PO43的抑制。 ? ③ Mg2+、 Ca2+ 對(duì)肌苷生產(chǎn)有促進(jìn)作用。 ? ④提供的生長(zhǎng)因子腺嘌呤或酵母粉必須 亞適量 。 ? ⑤發(fā)酵條件， 30～ 34℃ ， ～ ，高溶氧，低分壓。 2．發(fā)酵法生產(chǎn)鳥苷和黃苷（ G， X） ? 鳥苷生產(chǎn)菌性狀 ：以肌苷產(chǎn)生菌為出發(fā)菌株，再增加德夸菌素抗性， 解除 GMP對(duì)酶 PRPP轉(zhuǎn)酰胺酶 、 IMP脫氫酶 、 GMP合成酶 的反饋抑制 ? 黃苷生產(chǎn)菌性狀與鳥苷產(chǎn)生菌株相類似，關(guān)鍵是要 缺失 GMP合成酶 。選育鳥嘌呤和腺嘌呤雙重缺陷型（ G和 A），培養(yǎng)基中限量供給腺嘌呤、鳥嘌呤。 3．發(fā)酵法生產(chǎn)腺苷（ A或 Ado） ? 腺苷產(chǎn)生菌遺傳性狀： ? ①腺嘌呤回復(fù)（ A+）； ? ②黃嘌呤缺陷（ Xn）； ? ③ AMP脫氨酶缺失； ? ④ GMP還原酶 (GMPred) 缺失； ? ⑤抗 8雜氮黃嘌呤（ 8AXr） ? 注意防止黃嘌呤缺陷型標(biāo)記的回復(fù)，保存期間斜面的反復(fù)移植是黃嘌呤回復(fù)，腺苷產(chǎn)量下降的主要原因。 3．發(fā)酵法生產(chǎn)腺苷（ A或 Ado） 小結(jié)： ? 肌苷發(fā)酵的生產(chǎn)菌種包括棒狀桿菌、芽孢桿菌、 枯草桿菌、產(chǎn)氨短桿菌等。 ? 以 產(chǎn)氨短桿菌 為出發(fā)株，用 發(fā)酵法 直接產(chǎn)生 AMP或 GMP是很困難的。因?yàn)槠渖锖铣赏緩浇?jīng) IMP然后分成兩條直鏈途徑，最終合成 AMP和 GMP。 ? 而使用 枯草桿菌 為出發(fā)株，其合成途徑經(jīng) IMP分成兩條環(huán)形途徑，只要阻塞某一代謝途徑，就能產(chǎn)生另一途徑相應(yīng)累積產(chǎn)物。 （一）疊氮胸苷（ AZT） ? 商品名 ： Refrovir， 中文商品名齊多夫定。是第一種被美國(guó) FDA批準(zhǔn)用于臨床的治療艾滋病 的新藥。 ? 藥理作用 ：在體內(nèi)經(jīng)磷酸化后生成疊氮胸苷酸，取代了正常的胸嘧啶核苷酸（ TMP）參與病毒 DNA合成，而含 AZT成分的 DNA不能繼續(xù)復(fù)制，從而阻止病毒增殖。 （一）疊氮胸苷（ AZT） ? 化學(xué)合成，起始原料是 胸苷 ，成本高。 （一）疊氮胸苷（ AZT） ? AZT的常見付作用為 貧血 、 白血球減少 ，有 32%的患者服藥后引起骨髓壞死癥，破壞人體造血功能。 ? 1990年 5月 《 新英格蘭醫(yī)學(xué)雜志 》 發(fā)表了第 2個(gè)治療愛滋病的藥物，稱雙脫氧肌苷（ DDI），商品名稱 Videx，由美國(guó)國(guó)立癌癥研究所于 1985年發(fā)現(xiàn)的。 （一）疊氮胸苷（ AZT） ? DDI的化學(xué)結(jié)構(gòu)和藥理活性與 AZT相似，治療艾滋病的效果與 AZT相同。 ? DDI的抗病毒作用，是通過 減慢 HIV在人體細(xì)胞中的復(fù)制 （或繁殖）速度和在免疫系統(tǒng)中的擴(kuò)散（或傳播）速度。 DDI的治療效果比 AZT好，極少發(fā)現(xiàn)毒性反應(yīng)，大劑量給藥時(shí)，發(fā)生外周神經(jīng)痛和胰腺炎。 （一）疊氮胸苷（ AZT） ? 后來，美國(guó)又批準(zhǔn)一個(gè)治療艾滋病的新藥，稱為 雙脫氧胸苷 （ DDS），是
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