免疫組織化學技術(shù)研討(編輯修改稿)
2025-02-11 04:22 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 酒精置換二甲苯n PBS沖洗 3次，每次 3分鐘n 根據(jù)每一種抗體的要求，對組織抗原進行相應的修復 n %過氧化氫甲醇液阻斷 20分鐘，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性n PBS沖洗、浸泡 5分鐘， 3次n 正常山羊血清室溫封閉 10分鐘n 甩去血清，加入適當稀釋的一抗， 37℃ 孵育 60分鐘或4℃ 過夜n PBS沖洗，浸泡 5分鐘， 3次n 滴加多聚螯合物， 37℃ 孵育 30分鐘n PBS沖洗，浸泡 5分鐘， 3次n 新鮮配置酶底物顯色液 DAB顯色 3－ 10分鐘n 流水沖洗n 蘇木素復染，脫水，透明，封片。n 顯微鏡觀察拍照n IPP軟件分析光密度抗原修復方法n 真空負壓抗原修復法：① 切片脫蠟至水。② %H2O2甲醇真空負壓處理 5分鐘。③ 自來水洗，蒸餾水洗。④ （ ），真空負壓干燥箱預先調(diào)至 95℃ ，真空負壓處理 10分鐘。⑤ 待修復注降至室溫的一， PBS洗 3次，隨后按選好的免疫組化染色方法進行染色。n 微波輻射抗原修復法：① 切片脫蠟至水。② %H2O2甲醇處理 10分鐘。③ 自來水洗，蒸餾水洗。④ （ ），于微波爐內(nèi)微波輻射 10分鐘，如檢測 Er和 Pr則需要 20輻射分鐘左右。⑤ 待修復液降至室溫后， PBS洗 3次，隨后按選好的免疫組織化學的染色方法進行染色。n 高壓抗原修復法：① 切片脫蠟至水。② %H2O2甲醇處理切片 10分鐘。③ 自來水洗，蒸餾水洗。④ 切片放入抗原修復液中，邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后持續(xù) 1－ 4分鐘。⑤ 待修復液恢復至室溫后， PBS洗 3次，隨后按選好的免疫組織化學染色方法進行染色。n 隔水熱抗原修復法：① 切片脫蠟至水。② %H2O2甲醇處理切片 10分鐘。③ 自來水洗，蒸餾水洗。④ 切片放入 （ ）中，邊同容器一起放入水溶鍋中加熱，其間應不斷用溫度計測其溫度，待抗原修復液的溫度達到有效溫度后（ 92℃↑ ）。即開始計時，持續(xù) 40分鐘。⑤ 待抗原修復液恢復至室溫后， PBS洗 3次，隨后按選定好的免疫組化染色方法進行染色。n 電爐加熱抗原修復法：① 切片脫蠟至水。② %H2O2甲醇處理切片 10分鐘。③ 自來水洗，蒸餾水洗。④ 將切片放入抗原修復液中于電爐上加熱，不時用溫度計測量溫度，當達 92℃ 后，即可拔離電源，當溫度低于 92℃ 時，再插上電源，如此反復持續(xù)至 10分鐘左右。⑤ 待抗原修復液降至室溫后， PBS洗 3次，隨后按選定的免疫組化染色方法進行染色。n 胃蛋白酶消化法：① 切片脫蠟至水。② %H2O2甲醇處理切片 10分鐘。③ 自來水洗，蒸餾水洗。④ PBS洗 3次， 1分鐘 /次。⑤ 滴上配制好或商品化的胃蛋白酶，處理切片 20分鐘左右。⑥ PBS沖洗 3次， 2分鐘 /次。⑦ 后按選擇好的免疫組化該法進行
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