免疫組織化學(xué)技術(shù)研討-在線瀏覽
2025-02-25 04:22本頁(yè)面
【正文】 放入接種了細(xì)胞的培養(yǎng)瓶或六孔板內(nèi)。n 用 4%的多聚甲醛固定 2h以上。細(xì)胞涂片制作n 離心將細(xì)胞收集出來(lái)，用預(yù)冷的 PBS洗2－ 3遍，最后用 PBS將細(xì)胞重懸。n 待稍微風(fēng)干以后加 4％多聚甲醛溶液覆蓋細(xì)胞，固定 2－ 4小時(shí)。免疫組織化學(xué)方法熒光標(biāo)記免疫組織化學(xué)酶聯(lián)免疫組織化學(xué)熒光標(biāo)記免疫組織化學(xué) 直接法 間接法酶聯(lián)免疫組織化學(xué)? ABC法? S P法免疫組化二步法 二步法 免疫 組化染色步驟n 二甲苯脫蠟，梯度酒精置換二甲苯n PBS沖洗 3次，每次 3分鐘n 根據(jù)每一種抗體的要求，對(duì)組織抗原進(jìn)行相應(yīng)的修復(fù) n %過(guò)氧化氫甲醇液阻斷 20分鐘，以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性n PBS沖洗、浸泡 5分鐘， 3次n 正常山羊血清室溫封閉 10分鐘n 甩去血清，加入適當(dāng)稀釋的一抗， 37℃ 孵育 60分鐘或4℃ 過(guò)夜n PBS沖洗，浸泡 5分鐘， 3次n 滴加多聚螯合物， 37℃ 孵育 30分鐘n PBS沖洗，浸泡 5分鐘， 3次n 新鮮配置酶底物顯色液 DAB顯色 3－ 10分鐘n 流水沖洗n 蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片。② %H2O2甲醇真空負(fù)壓處理 5分鐘。④ （ ），真空負(fù)壓干燥箱預(yù)先調(diào)至 95℃ ，真空負(fù)壓處理 10分鐘。n 微波輻射抗原修復(fù)法：① 切片脫蠟至水。③ 自來(lái)水洗，蒸餾水洗。⑤ 待修復(fù)液降至室溫后， PBS洗 3次，隨后按選好的免疫組織化學(xué)的染色方法進(jìn)行染色。② %H2O2甲醇處理切片 10分鐘。④ 切片放入抗原修復(fù)液中，邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。⑤ 待修復(fù)液恢復(fù)至室溫后， PBS洗 3次，隨后按選好的免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行染色。② %H2O2甲醇處理切片 10分鐘。④ 切片放入 （ ）中，邊同容器一起放入水溶鍋中加熱，其間應(yīng)不斷用溫度計(jì)測(cè)其溫度，待抗原修復(fù)液的溫度達(dá)到有效溫度后（ 92℃↑ ）。⑤ 待抗原修復(fù)液恢復(fù)至室溫后， PBS洗 3次，隨后按選定好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。② %H2O2甲醇處理切片 10分鐘。④ 將切片放入抗原修復(fù)液中于電爐上加熱，不時(shí)用溫度計(jì)測(cè)量溫度，當(dāng)達(dá) 92℃ 后，即可拔離電源，當(dāng)溫度低于 92℃ 時(shí)，再插上電源，如此反復(fù)持續(xù)至 10分鐘左右。n 胃蛋白酶消化法：① 切片脫蠟至水。③ 自來(lái)水洗，蒸餾水洗。⑤ 滴上配制好或商品化的胃蛋白酶，處理切片 20分鐘左右。⑦ 后按選擇好的免疫組化該法進(jìn)行染色。② %H2O2甲醇處理切片 10分鐘。④ PBS洗 3次， 1分鐘 /次。⑥ PBS洗 3次， 2分鐘 /次。注意事項(xiàng)一、抗體的保存 濃縮抗體：有效期內(nèi)，只需放在 4 ℃ 冰箱內(nèi)，保存時(shí)間可達(dá) 13年。 PBS或抗體稀釋液稀釋
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