王鏡巖生物化學-第35章dna的重組與基因工程(編輯修改稿)
2025-02-09 22:33 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 相關概念 自我復制 克隆載體、表達載體 原核載體 ：質粒 (pBR322,pUC… ）噬菌體（ λ， M13） 真核載體 ：動物病毒載體 pLXSN 質粒 — 存在于細菌染色體外的小型環(huán)狀雙鏈 DNA分子 理想的質粒 。 terr ampr 篩選標志 （單一） （一）重組 DNA技術的相關概念 基因載體 vector p BR 3 22E c o R ⅠHind ⅢBam H ⅠAva ⅠPv u ⅡSal ⅠPst Ⅰ O r i 氨芐青霉素 抗性基因 四環(huán)素抗性基因 Chapter35 DNA的重組與基因工程 三、重組 DNA技術基本原理 （一）目的基因獲得 化學合成法 基因組 DNA 基因組 DNA文庫 — 存在于轉化細菌中、克隆載體攜帶的所有基因組 DNA的集合 cDNA cDNA文庫 聚合酶鏈式反應 PCR (二 )克隆載體的選擇和構建 (三 )外源基因與載體的連接（ DNA連接酶） 連接方式 1. 粘性末端連接 連接效率高 相同酶切末端 配伍末端 連接效率低 Chapter35 DNA的重組與基因工程 三、重組 DNA技術基本原理 目的基因載體 DNA+d G TP+d C TPPo ly GPo ly C3′3′3′3′重組 DNA技術簡圖 (四 ) 重組 DNA導入受體菌 基因工程菌 HB101,JM109 轉化 制備感受態(tài)細胞 冷的氯化鈣處理 細胞處于最適攝取和容忍外來 DNA的生理狀態(tài) Chapter35 DNA的重組與基因工程 三、重組 DNA技術基本原理 (五 )重組體的篩選 screening/selection 1. 直接選擇法 抗藥性標志選擇 標志補救 表達產(chǎn)物與營養(yǎng)缺陷互補 α—互補 藍白斑篩選 分子雜交 探針 原位雜交 /Southern印跡法 限制性酶切圖譜 /PCR 免疫學方法 Chapter35 DNA的重組與基因工程 三、重組 DNA技術基本原理 (六 )克隆基因的表達 載體有轉錄、翻譯的元件
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