【文章內容簡介】 。細菌的可流動性元件A? 插入序列： 轉座酶 編碼基因兩側連接反向末端重復序列 (箭頭所示 )B? 轉座子 Tn3：含有 轉座酶 、 β內酰胺酶及阻遏蛋白編碼基因C? 轉座子 Tn10：含四環(huán)素抗性基因及兩個相同的插入序列 IS10L由轉座子介導的轉座216。 相關概念? DNA克隆? 工具酶? 目的基因? 基因載體216。 基本原理 216。 重組 DNA技術與醫(yī)學的關系主要內容：第二節(jié) DNA重組技術DNA Rebination Technique一、重組一、重組 DNA技術相關概念技術相關概念 克隆 (clone):來自同一始祖的相同副本或拷貝的集合。獲取同一拷貝的過程稱為克隆化 (cloning)，即無性繁殖。（一） DNA克隆分子克?。悍肿涌寺。杭毎寺。杭毎寺。簞游锟寺。簞游锟寺。嚎寺〉牟煌瑢用鎽妹笇W的方法，在體外將各種來源的遺傳物質（同源的或異源的、原核的或真核的、天然的或人工的 DNA）與載體 DNA接合成一具有自我復制能力的 DNA分子 —— 復制子 (replicon)，繼而通過轉化或轉染宿主細胞，篩選出含有目的基因的轉化子細胞，再進行擴增提取獲得大量同一 DNA分子，也稱基因克隆或重組 DNA(rebinantDNA) 216。DNA克隆216。 生物技術工程 :基因工程、蛋白質工程、酶工程、細胞工程等216。目的：① 分離獲得某一感興趣的基因或 DNA② 獲得感興趣基因的表達產(chǎn)物（蛋白質）216。 基因工程 (geicengineering)—— 實現(xiàn)基因克隆所用的方法及相關的工作稱基因工程，又稱重組 DNA工藝學。（二）工具酶216。 限制性核酸內切酶216。 DNA聚合酶 Ⅰ216。 逆轉錄酶216。 T4DNA連接酶216。 堿性磷酸酶216。 末端轉移酶216。 TaqDNA聚合酶（ 1）定義：識別 DNA的特異序列 , 并在識別位點或其周圍切割雙鏈 DNA的一類內切酶，簡稱限制酶。限制性核酸內切酶存在于細菌體內，與細菌的甲基化酶構成 限制－修飾體系。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCC G+限制性核酸內切酶 (restriction endonuclease, RE)分子手術刀（ 2）限制酶的分類 : Ⅰ 類、 Ⅱ 類、 Ⅲ 類（ 3） 限制酶的命名 EcoR Ⅰ E： 代表細菌的屬名co： 代表細菌的種名R： 代表菌株Ⅰ ： 發(fā)現(xiàn)次序名稱 屬名種名株名序號來源菌株EcoRⅠ E co R Ⅰ Escherichia coli RY13Hind Ⅲ H In d Ⅲ Haemophilius influenzae RdHpa Ⅰ H pa Ⅰ Haemophilus parainfluenzae（ 4）限制酶的特點① 識別序列：回文結構 5`GAATTC3`3`CTTAAG5`不同堿基個數(shù)的識別序列在基因組中的出現(xiàn)頻率：四： 256bp六： 4kb八： 65kbBam HⅠGTCCAGGCCTAGGATCC G+GGATCCCCTAGGHindⅡGTCGACCAGCTGGACCTG+平端切口 粘端切口② 切割方式來源不同的限制酶，但能識別和切割同一位點，這些酶稱 同功異源酶 。GGATCCCCTAGGGCCTAGGATCC G+Bam HⅠGGATCCCCTAGGGCCTAGGATCC G+BstⅠ216。同功異源酶：有些限制性內切酶雖然識別序列不完全相同，但切割 DNA后，產(chǎn)生相同的粘性末端，稱為同尾酶。這兩個相同的粘性末端稱為配伍未端 (patibleend)。Bam HⅠⅠ Bg lⅡⅡ GGATCC CCTAGG AGATCT TCTAGAGCCTAG GATCC G++ATCTAG GATCT A216。 同尾酶名　　稱　　 　 識別 序列及切割位點 名　　稱　　　　　 識別 序列及切割點切割后 產(chǎn) 生５ ’突出末端 :BamHⅠ 5’… G▼GATCC...3 ’Bgl Ⅱ 5’… A▼GATCT...3 ’EcoR Ⅰ 5’… G▼AATTC...3 ’Hind Ⅲ 5’… A▼AGCTT...3 ’ Hpa Ⅱ 5’… C▼CGG...3 ’ Mbo Ⅰ 5’… ▼GATC...3 ’ Nde Ⅰ 5’… GA▼TATG...3 ’切割后 產(chǎn) 生 3’突出末端 :Apa Ⅰ 5’… GGGCC▼C...3 ’Hae Ⅱ 5’… PuGCGC▼Py...3 ’Kpn Ⅰ 5’… GGTAC▼C...3 ’Pst Ⅰ 5’… CTGCA▼G...3 ’Sph Ⅰ 5’… GCATG▼C...3 ’切割后 產(chǎn) 生平末端 :Alu Ⅰ 5’… AG▼CT...3 ’EcoR Ⅴ 5’… GAT▼ATC...3 ’Hae Ⅲ 5’… GG▼CC...3 ’Pvu Ⅱ 5’… CAG▼CTG...3 ’Sma Ⅰ 5’… CCC▼GGG...3 ’ 限制性內切核酸酶（三）目的基因研究某個基因，或者要克隆某個基因用研究某個基因，或者要克隆某個基因用于生產(chǎn)大量于生產(chǎn)大量 DNA和蛋白質分子和蛋白質分子 ,首先都要把首先都要把它從龐大的基因組中分離出來。它從龐大的基因組中分離出來。你所感興趣和想研究的基因，稱為目的你所感興趣和想研究的基因，稱為目的基因?；?。n 基因組 DNA (genomic DNA)n cDNA (plementary DNA)（四）基因載體216。定義為攜帶目的基因，實現(xiàn)其無性繁殖或表達有意義的蛋白質所采用的一些 DNA分子。216。常用載體質粒 DNA噬菌體 DNA病毒 DNA分子運輸車216?？寺≥d體 (cloningvector)為使插入的外源 DNA序列被擴增而特意設計的載體稱為 克隆載體 。216。表達載體 (expressionvector)為使插入的外源 DNA序列可轉錄翻譯成 多肽鏈而特意設計的載體稱為 表達載體 。n 載體的選擇標準：216。 能自主復制；216。 具有兩個以上的遺傳標記物，便于重組體的篩選和鑒定；216。 有克隆位點（外源 DNA插入點），常具有多個單一酶切位點，稱為多克隆位點；216。 分子量小，以容納較大的外源 DNA。 (plasmid)特點 ① 能在宿主細胞內獨立自主復制；帶有某些遺傳信息 , 會賦予宿主細胞一些遺傳性狀。 ② 大小適宜，拷貝數(shù)多。 ③ 易于從一個細菌轉移到另一個細菌，即易轉化。 ④ 有利于篩選。質粒上常帶有一個或兩三個抗藥基因。 ⑤ 有限制性內切酶的切口。 216。λ噬菌體 DNA改造系統(tǒng) λgt系列（插入型，適用 cDNA克?。〦MBL系列（置換型，適用基因組克?。?(phage)216。M13噬菌體 DNA改造系統(tǒng)（含 lac