研發(fā)部崗前培訓細胞培養(yǎng)(編輯修改稿)
2025-02-07 13:33 本頁面
【文章內容簡介】 體：皮膚、黏膜；免疫系統(tǒng)；解毒器官（肝臟） 體外：保持細胞培養(yǎng)環(huán)境無任何污染，及時清除代謝物 （二）溫度 人和哺乳動物培養(yǎng)細胞標準溫度： 176。C 177。 176。C 培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力比其對高溫強 ≤39 176。C 四、細胞培養(yǎng)的基本技術 （一）細胞分離與原代培養(yǎng) 原代培養(yǎng) （ primary culture） 也稱初代培養(yǎng)，指從供體分離得到所需細胞后，接種于培養(yǎng)器皿，進行首次培養(yǎng) 培養(yǎng)材料為血液、胸水、腹水和羊水等細胞懸液時，可采用低速離心分離 培養(yǎng)材料為組織塊時，將組織塊剪切得盡可能細小，然后用膠原酶或胰蛋白酶進一步消化，以獲得細胞懸液 細胞分離與原代培養(yǎng) （二）細胞的傳代 （ secondary culture） 細胞由原培養(yǎng)器皿內分離稀釋后傳到新的培養(yǎng)器皿的過程為傳代 貼附細胞的傳代：多采用含有胰蛋白酶和EDTA的消化液消化傳代，然后以合適比例接種在新的培養(yǎng)器皿內 懸浮細胞的傳代：可直接添加新鮮培養(yǎng)液，或離心收集后換新鮮培養(yǎng)液，再以一定比例稀釋傳代 細胞系（ cell line）： 在 細胞 培養(yǎng)中產(chǎn)生了具有無限增殖能力的變種細胞，這種細胞可被無限的傳代 常見的細胞系： ? NIH3T3細胞系： 取自小鼠胚胎細胞建立 (1963年 ) ? Hela細胞系： 取自人宮頸癌細胞建立 (1952年 ) 貼附型細胞的生長過程 游離期 貼壁期 潛伏期 對數(shù)生長期 停止期（平臺期，平頂期） 游離期： 細胞接種后在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)。也稱懸浮期。此時細胞質回縮，胞體呈圓球形 10分鐘 ～ 4小時 貼壁期： 細胞附著于 底物 上，游離期結束。細胞株平均在 10分鐘 ～ 4小時貼壁 底物 ：膠原、玻璃、塑料、其它細胞等 血清中有促使細胞貼壁的冷析球蛋白和纖粘素、膠原等糖蛋白（ 生長基質 ），這些帶正電荷的糖蛋白的促貼壁因子先吸附于底物上，懸浮細胞再與吸附有促貼壁因子的附著 進口塑料培養(yǎng)瓶涂有 生長基質 （化學合成的功能基團） 細胞貼壁過程 細胞貼壁過程 潛伏期： 此時細胞有生長活動，但是無細胞分裂。細胞株潛伏期一般為 6～ 24小時 對數(shù)生長期： 細胞數(shù)隨時間變化成倍增長，活力最佳，最適合進行實驗研究 停止期（平臺期）： 細胞長滿瓶壁后，細胞雖有活力但不再分裂 機制：接觸抑制、密度依賴性 細胞的生長過程 （三）氣體環(huán)境與 pH值 多數(shù)細胞生長需要 O2，閉合式單層細胞培養(yǎng)氧分壓1995 9975Pa 開放培養(yǎng)時（碟皿或培養(yǎng)瓶松蓋培養(yǎng)），一般將細胞置于 95%空氣加 5%CO2混合氣體環(huán)境中 CO2的主要作用在于維持培養(yǎng)基的 pH 值，多數(shù)細胞的適宜 pH值為 – 原代培養(yǎng)細胞一般對 pH的變動耐受差；永生細胞和惡性腫瘤細胞耐受力強 總的說來，培養(yǎng)細胞耐酸性比耐堿性大一些 （四）體外培養(yǎng)細胞生存所需基本物質 六碳糖是主要的能源（葡萄糖、半乳糖） 1. 糖 2. 氨基酸 所有的細胞都需要谷氨酰胺，其所含的氨是核酸中嘌呤和嘧啶的來源；其它
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