細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備工作(編輯修改稿)
2024-09-19 13:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 蛋白酶法：(25g )（2） 膠原酶法：五：原代培養(yǎng)方法：1． 貼塊法：在培養(yǎng)皿內(nèi)將組織塊剪成1mm3左右的小塊，剪時(shí)可滴加1～2培養(yǎng)液，以保持濕潤。將剪切好的小塊用吸管吸入培養(yǎng)瓶中，均勻擺置。輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使組織塊朝上，向瓶內(nèi)注入少許培養(yǎng)液，蓋好瓶蓋，將培養(yǎng)瓶傾斜放置在37度培養(yǎng)箱內(nèi)。6小時(shí)后輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，靜置培養(yǎng)。若組織塊不易貼壁，可預(yù)先在瓶壁涂薄層血清，胎汁。（10％胎牛血清，10％胎兒血清，0。03％ L谷氨酰氨。110mg/l丙酮酸鈉，100U/ml青霉素，100ug/ml鏈霉素） 貼塊法具有獲得平滑肌細(xì)胞純度高，量多，操作簡便的優(yōu)點(diǎn)。但用貼塊法易使平滑肌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)肌絲喪失，亞細(xì)胞器增加。2． 酶解法：組織塊剪成1～2mm3,轉(zhuǎn)入新鮮配置的0。2％Ⅰ型或Ⅳ型膠原酶消化液中，37℃恒溫?fù)u床（25r/min）消化，消化液混濁，尚存有較小組織塊時(shí)，將消化液移入離心管內(nèi)，收集細(xì)胞并用培養(yǎng)液輕輕吹打混勻。細(xì)胞計(jì)數(shù)（0。1％臺(tái)盼藍(lán)），50ml培養(yǎng)瓶接種約8105活細(xì)胞。（沿動(dòng)脈縱軸切開后，刮除內(nèi)皮細(xì)胞撕下中膜的內(nèi)2/3，注意不要混入內(nèi)皮細(xì)胞，將組織塊切成12mm2，放入加有3mg/ml膠原酶的無血清M199培養(yǎng)基中，37℃，～。離心去上清，重復(fù)上述消化步驟，然后再離心（9000r,4min），收集細(xì)胞，在5%～10%同種血清或胎牛血清的M199培養(yǎng)基中調(diào)整細(xì)胞數(shù)，然后轉(zhuǎn)入30～90
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