細胞培養(yǎng)準備工作(編輯修改稿)
2025-09-19 13:10 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 蛋白酶法：(25g )（2） 膠原酶法：五：原代培養(yǎng)方法：1． 貼塊法：在培養(yǎng)皿內(nèi)將組織塊剪成1mm3左右的小塊，剪時可滴加1～2培養(yǎng)液，以保持濕潤。將剪切好的小塊用吸管吸入培養(yǎng)瓶中，均勻擺置。輕輕翻轉培養(yǎng)瓶，使組織塊朝上，向瓶內(nèi)注入少許培養(yǎng)液，蓋好瓶蓋，將培養(yǎng)瓶傾斜放置在37度培養(yǎng)箱內(nèi)。6小時后輕輕翻轉培養(yǎng)瓶，靜置培養(yǎng)。若組織塊不易貼壁，可預先在瓶壁涂薄層血清，胎汁。（10％胎牛血清，10％胎兒血清，0。03％ L谷氨酰氨。110mg/l丙酮酸鈉，100U/ml青霉素，100ug/ml鏈霉素） 貼塊法具有獲得平滑肌細胞純度高，量多，操作簡便的優(yōu)點。但用貼塊法易使平滑肌細胞胞質內(nèi)肌絲喪失，亞細胞器增加。2． 酶解法：組織塊剪成1～2mm3,轉入新鮮配置的0。2％Ⅰ型或Ⅳ型膠原酶消化液中，37℃恒溫搖床（25r/min）消化，消化液混濁，尚存有較小組織塊時，將消化液移入離心管內(nèi)，收集細胞并用培養(yǎng)液輕輕吹打混勻。細胞計數(shù)（0。1％臺盼藍），50ml培養(yǎng)瓶接種約8105活細胞。（沿動脈縱軸切開后，刮除內(nèi)皮細胞撕下中膜的內(nèi)2/3，注意不要混入內(nèi)皮細胞，將組織塊切成12mm2，放入加有3mg/ml膠原酶的無血清M199培養(yǎng)基中，37℃，～。離心去上清，重復上述消化步驟，然后再離心（9000r,4min），收集細胞，在5%～10%同種血清或胎牛血清的M199培養(yǎng)基中調整細胞數(shù)，然后轉入30～90
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