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正文內(nèi)容

細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備工作(編輯修改稿)

2024-09-19 13:10 本頁面
 

【文章內(nèi)容簡介】 蛋白酶法:(25g )(2) 膠原酶法:五:原代培養(yǎng)方法:1. 貼塊法:在培養(yǎng)皿內(nèi)將組織塊剪成1mm3左右的小塊,剪時(shí)可滴加1~2培養(yǎng)液,以保持濕潤。將剪切好的小塊用吸管吸入培養(yǎng)瓶中,均勻擺置。輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,使組織塊朝上,向瓶內(nèi)注入少許培養(yǎng)液,蓋好瓶蓋,將培養(yǎng)瓶傾斜放置在37度培養(yǎng)箱內(nèi)。6小時(shí)后輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶,靜置培養(yǎng)。若組織塊不易貼壁,可預(yù)先在瓶壁涂薄層血清,胎汁。(10%胎牛血清,10%胎兒血清,0。03% L谷氨酰氨。110mg/l丙酮酸鈉,100U/ml青霉素,100ug/ml鏈霉素) 貼塊法具有獲得平滑肌細(xì)胞純度高,量多,操作簡便的優(yōu)點(diǎn)。但用貼塊法易使平滑肌細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)肌絲喪失,亞細(xì)胞器增加。2. 酶解法:組織塊剪成1~2mm3,轉(zhuǎn)入新鮮配置的0。2%Ⅰ型或Ⅳ型膠原酶消化液中,37℃恒溫?fù)u床(25r/min)消化,消化液混濁,尚存有較小組織塊時(shí),將消化液移入離心管內(nèi),收集細(xì)胞并用培養(yǎng)液輕輕吹打混勻。細(xì)胞計(jì)數(shù)(0。1%臺盼藍(lán)),50ml培養(yǎng)瓶接種約8105活細(xì)胞。(沿動脈縱軸切開后,刮除內(nèi)皮細(xì)胞撕下中膜的內(nèi)2/3,注意不要混入內(nèi)皮細(xì)胞,將組織塊切成12mm2,放入加有3mg/ml膠原酶的無血清M199培養(yǎng)基中,37℃,~。離心去上清,重復(fù)上述消化步驟,然后再離心(9000r,4min),收集細(xì)胞,在5%~10%同種血清或胎牛血清的M199培養(yǎng)基中調(diào)整細(xì)胞數(shù),然后轉(zhuǎn)入30~90
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