[基礎(chǔ)科學(xué)]細胞培養(yǎng)技術(shù)解答(編輯修改稿)
2025-02-04 20:04 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi)，以 400g 稍微離心 ,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。最好不使用過濾的方法去除這些絮狀 沉淀物，因為它可能會阻塞過濾膜。 ? 答 : (1)解凍血清時，請按照所建議的逐步解凍法 (20℃ 至 4℃ 至室溫 )，若血清解凍時改變的溫度太大 (如 20℃ 至 37℃) ，非常容易產(chǎn)生沉淀物。 (2)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。 (3)請勿將血清置于 37℃ 太久。若在 37℃ 放置太久，血清會變得混濁，同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分會因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。 (4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物 的增多，若非必要，可以無須做此步驟。 (5)若必須做血清的熱滅活，請遵守 56℃ ， 30 分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。 四、細胞培養(yǎng)常用試劑使用問答 ？ 答：谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，故 4℃ 下放置 1 周可分解 50%，使用中最好單獨配制，置 20℃ 冰箱中保存，用前加入培養(yǎng)液中。 ？ 答：碳酸氫鈉白色粉末，或不透明單斜晶系細微結(jié)晶。比重 。無臭、味咸，可溶于水，微溶于乙 醇。其水溶液因水解而呈微堿性，受熱易分解，在 65℃ 以上迅速分解，在 270℃ 時完全失去二氧化碳，在干燥空氣中無變化，在潮濕空氣中緩慢分解。 ？其解決辦法有哪些？ 答：可能得原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷氨酰胺或生長因子等耗盡或缺乏或已被破壞；培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng)；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗找出可能的原因。 解決辦法：增加起始培養(yǎng)細胞濃度；讓細胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液； 換入新鮮配制培養(yǎng)液；補加谷氨酰胺或生長因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在 5℃ 到 20℃ ；培養(yǎng)液需在 2－ 8℃ 避光保存；含血清完全培養(yǎng)液在28℃ 保存，并在 2 周內(nèi)用完；分離培養(yǎng)物，檢測支原體。 ？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？ 答： L谷氨酰胺在細胞培養(yǎng)時非常重要的。脫掉氨基后， L谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細胞的能量來源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。 L谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過一段時間后會降解，降解率隨保存溫度而變。 L谷氨酰胺的降解導(dǎo)致 氨的形成，而氨對于一些細胞具有毒性。 ？ 答：不見得！因為胰蛋白酶溶液的消化能力是和溶液的 pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有 Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下， pH , 溫度 37 oC 其作用能力最強。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前，一定要用DHanks 液或 PBS 液反復(fù)沖洗細胞培養(yǎng)瓶，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液濃度為： (1)％胰蛋白酶＋ ％ EDTA； (2)% 胰蛋白酶 多數(shù)細胞傳代消化可使用 ％胰蛋白酶＋ ％ EDTA 這種消化液。 ？使用胰蛋白酶時加入 EDTA 的目的是什么？ 答：二價離子的確抑制胰蛋白酶活性。 EDTA 用來螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細胞前，用 EDTA 清洗細胞，以消除來自培養(yǎng)基中所有的二價離子。 是什么？培養(yǎng)細胞如何利用 GlutaMAXI？這個二肽有多穩(wěn)定 ？ 答： GlutaMAXI 即谷丙氨酸二肽，是一個 L谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的 alpha氨基用 L丙氨酸來保護。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放 L谷氨酰胺供利用。 GlutaMAXI 二肽非常穩(wěn)定，即使在 121 磅滅菌 20 分鐘， GlutaMAXI 二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L谷氨酰胺幾乎完全降解 ？ 答：丙酮酸鈉可以作為細胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒有葡萄糖的話，細胞也可以代謝丙酮酸鈉。 ′s 平衡鹽溶液 (HBS)和 Earle′s 平衡鹽溶液 (EBS)有什么本質(zhì)的功能差別？ 答： HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平 ,在 Eagle′s () 中比在
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