[基礎(chǔ)科學(xué)]細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)解答(編輯修改稿)
2025-02-04 20:04 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物，可以將血清分裝至無(wú)菌離心管內(nèi)，以 400g 稍微離心 ,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過(guò)濾。最好不使用過(guò)濾的方法去除這些絮狀 沉淀物，因?yàn)樗赡軙?huì)阻塞過(guò)濾膜。 ? 答 : (1)解凍血清時(shí)，請(qǐng)按照所建議的逐步解凍法 (20℃ 至 4℃ 至室溫 )，若血清解凍時(shí)改變的溫度太大 (如 20℃ 至 37℃) ，非常容易產(chǎn)生沉淀物。 (2)解凍血清時(shí)，請(qǐng)隨時(shí)將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發(fā)生。 (3)請(qǐng)勿將血清置于 37℃ 太久。若在 37℃ 放置太久，血清會(huì)變得混濁，同時(shí)血清中許多較不穩(wěn)定的成分會(huì)因此受到損害，而影響血清的質(zhì)量。 (4)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物 的增多，若非必要，可以無(wú)須做此步驟。 (5)若必須做血清的熱滅活，請(qǐng)遵守 56℃ ， 30 分鐘的原則，并且隨時(shí)搖晃均勻。溫度過(guò)高，時(shí)間過(guò)久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多。 四、細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑使用問(wèn)答 ？ 答：谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，故 4℃ 下放置 1 周可分解 50%，使用中最好單獨(dú)配制，置 20℃ 冰箱中保存，用前加入培養(yǎng)液中。 ？ 答：碳酸氫鈉白色粉末，或不透明單斜晶系細(xì)微結(jié)晶。比重 。無(wú)臭、味咸，可溶于水，微溶于乙 醇。其水溶液因水解而呈微堿性，受熱易分解，在 65℃ 以上迅速分解，在 270℃ 時(shí)完全失去二氧化碳，在干燥空氣中無(wú)變化，在潮濕空氣中緩慢分解。 ？其解決辦法有哪些？ 答：可能得原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細(xì)胞生長(zhǎng)必需成分如谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子等耗盡或缺乏或已被破壞；培養(yǎng)物中有少量細(xì)菌或真菌污染；試劑保存不當(dāng)；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清支持細(xì)胞生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)找出可能的原因。 解決辦法：增加起始培養(yǎng)細(xì)胞濃度；讓細(xì)胞逐漸適應(yīng)新培養(yǎng)液； 換入新鮮配制培養(yǎng)液；補(bǔ)加谷氨酰胺或生長(zhǎng)因子等；用無(wú)抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，丟棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在 5℃ 到 20℃ ；培養(yǎng)液需在 2－ 8℃ 避光保存；含血清完全培養(yǎng)液在28℃ 保存，并在 2 周內(nèi)用完；分離培養(yǎng)物，檢測(cè)支原體。 ？它在溶液中不穩(wěn)定嗎？ 答： L谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)非常重要的。脫掉氨基后， L谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。 L谷氨酰胺在溶液中經(jīng)過(guò)一段時(shí)間后會(huì)降解，降解率隨保存溫度而變。 L谷氨酰胺的降解導(dǎo)致 氨的形成，而氨對(duì)于一些細(xì)胞具有毒性。 ？ 答：不見(jiàn)得！因?yàn)橐鹊鞍酌溉芤旱南芰κ呛腿芤旱?pH、溫度、胰酶濃度及溶液中是否含有 Ca++, Mg++離子和血清等因素有關(guān)。通常情況下， pH , 溫度 37 oC 其作用能力最強(qiáng)。另外，鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進(jìn)行傳代消化前，一定要用DHanks 液或 PBS 液反復(fù)沖洗細(xì)胞培養(yǎng)瓶，以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈，這樣就能大大提高消化液的消化能力。通常使用的消化液濃度為： (1)％胰蛋白酶＋ ％ EDTA； (2)% 胰蛋白酶 多數(shù)細(xì)胞傳代消化可使用 ％胰蛋白酶＋ ％ EDTA 這種消化液。 ？使用胰蛋白酶時(shí)加入 EDTA 的目的是什么？ 答：二價(jià)離子的確抑制胰蛋白酶活性。 EDTA 用來(lái)螯合游離的鎂離子和鈣離子，以便保持抑制胰蛋白酶的活性。建議胰蛋白酶處理細(xì)胞前，用 EDTA 清洗細(xì)胞，以消除來(lái)自培養(yǎng)基中所有的二價(jià)離子。 是什么？培養(yǎng)細(xì)胞如何利用 GlutaMAXI？這個(gè)二肽有多穩(wěn)定 ？ 答： GlutaMAXI 即谷丙氨酸二肽，是一個(gè) L谷氨酰胺的衍生物，其不穩(wěn)定的 alpha氨基用 L丙氨酸來(lái)保護(hù)。一種肽酶逐漸裂解二肽，釋放 L谷氨酰胺供利用。 GlutaMAXI 二肽非常穩(wěn)定，即使在 121 磅滅菌 20 分鐘， GlutaMAXI 二肽溶液有最小的降解，如果在相同條件下，L谷氨酰胺幾乎完全降解 ？ 答：丙酮酸鈉可以作為細(xì)胞培養(yǎng)中的替代碳源，盡管細(xì)胞更傾向于以葡萄糖作為碳源，但是，如果沒(méi)有葡萄糖的話，細(xì)胞也可以代謝丙酮酸鈉。 ′s 平衡鹽溶液 (HBS)和 Earle′s 平衡鹽溶液 (EBS)有什么本質(zhì)的功能差別？ 答： HBS 和 EBS 的主要差別在于碳酸氫鈉的水平 ,在 Eagle′s () 中比在
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